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1、第六章 芳酸类非甾体抗炎药物的分析,主要内容：,1 典型药物分类与理化性质 2 鉴别试验 3 特殊杂质检查 4 含量测定 5 体内药物分析,醇羟基,酚羟基,醇,酚,羧酸,芳酸,酯,游离羧基,游离羧基,按结构分类,水杨酸类,邻氨基苯甲酸类,芳酸类非甾体药物：分子结构中含 有取代苯基的一类羧酸化合物。,邻氨基苯乙酸类,芳基丙酸类,吲哚乙酸类,苯并噻嗪甲酸类,其他非甾体抗炎药,1 典型药物分类与理化性质,一、水杨酸类,典型药物,水杨酸 (salicylic acid),游离羧基,酚羟基，发生三氯化铁反应,苯环,游离羧基,阿司匹林 (aspirin),酯键,苯环,pKa = 3.49,直接中和法 两步
2、滴定法,水解后生成水杨酸杂质,水解后才发生三氯化铁反应,双水杨酯,甲芬那酸,二、邻氨基苯甲酸类,有强烈绿色荧光,三、邻氨基苯乙酸类,双氯芬酸钠,有刺鼻感,布洛芬,ibuprofen,四、芳基丙酸类,五、吲哚乙酸类,吲哚美辛,六、苯并噻嗪甲酸类,吡罗昔康,其他非甾体抗炎药,对乙酰氨基酚,结构分析,包括：芳酸、芳酸酯、芳酸盐 共同点： 苯环、羧基 不同点：不同的取代基（如酚羟基、芳伯氨基、卤原子、杂环等）,主要理化性质,1.性状：固体，有一定的熔点。 2.溶解性：几乎不溶于水，易溶于有机溶剂。碱金属盐易溶于水，难溶于有机溶剂。,3.酸性：,芳酸具游离羧基，呈酸性，其pKa在36之间，属中等强度的酸
3、或弱酸； X、NO2、OH等吸电子取代基存在使酸性增强。水杨酸阿司匹林苯甲酸； CH3、NH2等斥电子取代基存在使酸性减弱。,邻位取代间位、对位取代，尤其是邻位取代酚羟基，由于形成分子内氢健，酸性大为增强。 芳环取代的脂肪酸类，酸性较弱。如双氯芬酸、布洛芬等。,4.易水解 具有酯键和酰胺键的药物均可发生水解。 可用剩余碱量法测定含量，如美洛昔康。 5.紫外、红外特征吸收光谱 分子中具有苯环和特征官能团，具有紫外和红外特征吸收。 6.基团或元素特性 酚羟基、芳伯氨基、卤素、硫元素等。,2 鉴别试验,一、与三氯化铁的反应,1.水杨酸反应,紫堇色,a.反应极为灵敏。,b.反应适宜的pH值为46 ，在
4、强酸性下配合 物分解。,阿司匹林,+,+,+Fecl3,紫堇色配位化合物,水解后鉴别,对乙酰氨基酚 蓝紫色,2.酚羟基反应,二、缩合反应,硫酸,二硝基苯肼,酮洛芬,腙,橙色,三、重氮化偶合反应,芳香第一氨的反应,HCl,Ar-NH2,重氮盐,偶合,红色,对乙酰氨基酚 贝诺酯,贝诺酯,水解,重氮化,偶合,四、氧化反应,甲芬那酸,黄色(绿色荧光)(JP13),K2Cr2O7,深蓝色棕绿色,H2SO4,五、水解反应,1.阿司匹林,酯结构水解,2.双水杨酯,双水杨酯,NaOH,煮沸,水杨酸钠,稀HCl,水杨酸,（白色）,沉淀在醋酸铵试液中可溶解,六、特征元素的分析,1.氯元素 双氯芬酸钠+碳酸钠 炽灼
5、灰化 加水煮沸 过滤 滤液显氯化物鉴别反应 2.硫元素 美洛昔康于试管中炽灼，产生的气体能使湿 润的醋酸铅试纸显黑色。,1.紫外分光光度法,最大吸收波长（和/或最小吸收波长） 吸光度法 吸光度比值法,七、光谱法,对照图谱对照,药品红外光谱集,水杨酸的红外吸收光谱图,2.红外分光光度法,八、薄层色谱法 比较供试品溶液与对照品溶液的比移值,九、HPLC 比较供试品溶液与对照品溶液的保留时间,3 特殊杂质检查,阿司匹林中游离水杨酸及有关物质的检查,1.阿司匹林中游离水杨酸的检查,来源：生产过程中乙酰化不完全，或贮藏过程中 水解产生 。,ChP2005方法：铁盐比色法（稀硫酸铁铵 ）,原理：阿司匹林结
6、构中无酚羟基，不与高铁盐反应; 水杨酸有酚羟基，则可与高铁反应呈紫堇色。,缺点：供试品溶液制备过程中阿司匹林可水解生成 新的游离水杨酸。 ChP2010采用HPLC检查。 原料药和制剂均需检查游离水杨酸，限量各不相同。,2.阿司匹林中有关物质的检查,指除游离水杨酸外的合成原料苯酚及其他合成副产物。 色谱条件：与检查“游离水杨酸”的流动相不同。 要求：除水杨酸峰外，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（0.5%） 。,杂质对照品法,方法： 供试品供试品溶液 杂质对照品对照品溶液,供试品,对照品,判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。 优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度
7、高、直观性强。 缺点：需要杂质对照品。,2.主成分自身对照法（高低浓度对比法）,方法：,（）,判断：,供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）,4 含量测定,本类药物原料药的含量测定：酸碱滴定法 制剂的含量测定：紫外-可见分光光度法和HPLC法,一、酸碱滴定法,1.直接滴定法阿司匹林,原理: 阿司匹林分子中有游离羧基，具弱酸性，可用标准碱溶液直接滴定。,方法: 取本品约0.4g, 精密称定, 加中性乙醇 (对 酚酞指示液显中性) 20mL溶解后, 加酚 酞指示液3滴, 用氢氧化钠滴定(0.1mol/L) 滴定。每 1ml的氢氧化钠滴定(0.1mol/L) 相当于18.02m
8、g的C9H8O4 。,生成的钠盐是强碱弱酸盐，偏碱性。,（2）指示剂为何选用酚酞？,讨论:（1）溶剂为何使用中性乙醇？,使用乙醇：a.使供试品易于溶解;b.防止酯水解 使用中性乙醇：乙醇对酚酞显酸性，扣除乙醇的 酸性对测定的影响。,（3）操作事项,滴定过程中不断振摇，防止局部水解 。,（4）特点 操作简便，但缺乏专属性，酸性物质有干扰。,不适合用于水杨酸含量较高的样品测定。,（5）滴定度的计算,2. 剩余量滴定法,美洛昔康有烯醇式结构，显酸性，可用氢氧化钠滴定液滴定，但在一般溶剂中溶解性差。用定量过量的氢氧化钠滴定液溶解后，用盐酸滴定液回滴定剩余的氢氧化钠。,美洛昔康,【含量测定】取本品约0.
9、4g，精密称定，精密加氢氧化钠滴定液（0. lmol/L)25ml，微温溶解，放冷，加中性乙醇（对溴麝香草酚蓝指示液显中性）100ml ，加溴麝香草酚蓝指示液10滴，用盐酸滴定液（0.lmol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml氢氧化钠滴定液（0.lmol/L)相当于35.14mg的 C14H13N3O4S2。,3. 水解后剩余滴定法阿司匹林,原理: 阿司匹林酯结构在碱性条件下易于水解, 加入定量过量的氢氧化钠滴定液, 加热 水解, 剩余的碱用硫酸滴定液回滴定。,方法：取本品约1.5g，精密称定，置烧杯中，加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)50.0ml，混合，缓缓煮沸10min
10、 加酚酞指示液，用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并将滴定结果用空白试验校正。每lml的氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于45.04mg的C9H8O4 。,讨论：（1）为何做空白试验？如何操作？,氢氧化钠在加热时易吸收CO2，生成碳酸盐。 使测定结果偏高。 不加入样品，其余操作步骤和加样一致。,（2）滴定度如何计算？,阿司匹林：氢氧化钠=1:2,T=0.5180.161/2=45.04(mg/ml),F：硫酸滴定液的校正因子,4. 两步滴定法ChP2005 阿司匹林片和肠溶片,原理: 阿司匹林片中加入少量稳定剂（酒石酸或枸橼酸）, 制剂过程中分解产物（水杨酸、醋酸）均消耗氢氧化钠。
11、因此，不能采用直接滴定法，采用先“中和”再“水解滴定”的两步滴定法。,第一步 中和,酒石酸 枸橼酸 水杨酸 醋酸,+NaOH ,酒石酸钠 枸橼酸钠 水杨酸钠 醋酸钠,第二步 水解后剩余滴定,反应摩尔比为11,+NaOH,定量过量,方法,中和: 取本品10片，精密称定，研细，精密称取片粉适量(约相当于阿司匹林0.3 g)，置锥形瓶中，加入中性乙醇20ml，振摇使溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)至溶液显粉红色。 此时中和了存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐。,水解和测定: 在中和后的供试品溶液中，精密加氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加热15mi
12、n并时时振摇，迅速放冷置室温，用硫酸滴定液 (0.05mol/L)滴定，结果用空白试验校正。每 1ml氢氧化钠滴定液 (0.1mol/L) 相当于18.02 mg的C9H8O4 。,讨论: （1）优点 消除了酸性杂质的干扰,（2）反应的摩尔比 阿司匹林:氢氧化钠1:1 T=0.1180.16=18.02mg/ml,（3）含量计算,F：硫酸滴定液的校正因子,5. 非水溶液滴定法,吡罗昔康具有吡啶环，显碱性。 【含量测定】取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml使溶解，加结晶紫指示液1滴，用高氯酸滴定液（0.lmol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每l ml 高氯酸滴定
13、液（0 .lmol/ L ) 相当于 33.14 mg的C15H13N3O4S。,二、紫外-可见分光光度法,1. 直接紫外-可见分光光度法,原理:药物在某一波长处有最大吸收，采用 对照品法或吸收系数法进行含量测定。,A,C L,USP（29）测定阿司匹林胶囊的含量。可将阿司匹林与水杨酸和其他中性碱性杂质分离。,2. 柱分配色谱紫外分光光度法,1.色谱柱的制备：,硅藻土3g和新制碳酸氢钠液（112）2ml的混合填充剂,2.对照溶液：用冰醋酸氯仿溶液（1100） 供试液：样品的氯仿溶液盐酸-甲醇（150 ）,3.样品上样、氯仿洗涤,乙酰水杨酸和水杨酸成钠盐保留于柱上，不 被氯仿洗脱。氯仿可除去中性或碱性杂质。,乙酰水杨酸游离，被氯仿洗脱。水杨酸酸性 较强，醋酸不能使其游离而保留在色谱柱上。 5.收集洗脱液，280nm波长处测定吸收度，按 对照法计算含量。,4.冰醋酸-氯仿液（1100）洗脱,三、HPLC法 大多采用离子抑制-反相高效液相色谱法测定,学习要点：,本类药物的结构和性质； 主要芳酸类药物的鉴别、检查和含量测定（滴定法）的原理与特点。,
