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1、1,保健食品中摻加 西藥及類緣物成分之檢驗,2,報 告 大 綱,壹、前言 貳、材料與方法 參、未知類緣物之探討 肆、經驗分享-優質管理 伍、結果,3,近年來 保健觀念 深植人心，國際市場上保健食品盛行，其安全性也備受各國重視。 一般消費者認定食品是安全無副作用。 或有業者 為求速效 ，於保健食品中摻加西藥。 由於對使用之西藥劑量、藥物間相互作用不瞭解，消費者於不知情下長期服用，危害堪慮。 為保障消費者健康， 未許可於保健食品中摻西藥。,壹、前 言,4,貳、材料與方法,一、檢體來源 衛生機關抽(稽)查、衛生機關之消費者服務中心、司法檢警調機關、關稅局、其他,5,二、選定檢驗類別,因檢體來源甚為複
2、雜，潛在性基質干擾未知，且申請檢驗者 常未標明處方組成，摻加之西藥 標的成分 亦未知，且常摻加與治療效能無關未知成分，檢驗頗為困難。 為求 系統化快速檢驗，就治療效能、副作用或指定檢驗項目，選定(40)檢驗類別，推測可能摻加的西藥。,6,檢 驗 類 別,7,8,三、檢驗方法,取約一日服用量檢體，經處理後加適量95乙醇浸泡，以超音波於室溫振盪萃取30分鐘，靜置，取上清液過濾供作檢液。 取適量檢液，點注於TLC板 (Merck silica gel 60 F254)，以五種各為酸性、鹼性及不同極性之中性溶媒，於展開槽展開分離。,9,3. TLC板取出風乾後， 4. 以紫外燈254 nm及366 n
3、m檢視， 5. 刮取層析板上可疑斑點，加95% 乙醇，超 音波振盪溶解， 6. 置離心機離心。 7. 所得濾液再以紫外光分光光度計測其吸收圖譜。,10,11,8. 並與西藥標準品圖譜比對。篩選出摻加之可疑成分，再次與西藥對照標準品比對展開分離， 9. 視成分特性，噴上適當之呈色劑， 10. 觀察呈色後斑點顏色及Rf值，是否與對照標準品一致。 11.另配合以GC/MS、HPLC或LC/MS/MS進行追查確認。,12,呈 色 劑,Dragendorffs spray reagent 50%Sulfuric Acid-Ethanol spray reagent Iodine vapor Tetraz
4、olium blue spray reagent p-Dimethylaminobenzaldehyde spray reagent Ninhydrin spray reagent Anisaldehyde-Sulfuric Acid spray reagent 2,4-Dinitrophenylhydrazine spray reagent,13,p-Dimethylaminocinnamaldehyde spray reagent 5% Ferric Chloride spray reagent Iodoplatinate spray reagent Iodoplatinate （acid
5、ified）spray reagent 1% Mercurous Nitrate spray reagent Potassium Permanganate spray reagent Potassium Permanganate（acidified）spray reagent 1%Vanillin-Sulfuric Acid spray reagent,14,資 料 庫,合成藥物UV圖 : 419 種 藥材成分UV圖 : 61種 GC/MS : 519 種(實驗室自行建置) ， 275000 種(Wiley) ， 6000種 (PMW) ， LC/MS/MS : 367種(實驗室自行建置),1
6、5,摻西藥檢驗，因不斷改進方法，收集標準品，建立檔案，使檢驗工作 得以迅速精準的進行。 近來保健食品盛行，經檢驗 除部分添加許可上市藥品外，尚有未經許可之類緣物成分。 類緣物因首次出現，無法先行價購標準品建立數據比對，且標的成分物化性、其他添加成分 及 基質潛在干擾不明，異於例行鑑別檢驗； 需以基礎化學手法探討，檢體經純化、分離後 ，所得標的成分純化物，再測定各種儀器圖 譜，反覆推斷，方能確認結構。,參、未知類緣物之探討 一、緣 起,16,1. Acetildenafil （威而鋼 sildenafil analogue ） 2. Piperidenafil （樂威壯 vardenafil a
7、nalogue ） 3. Hydroxyhomosildenafil （威而鋼 sildenafil analogue ） 4. N-Desmethylsibutramine （諾美婷 sibutramine analogue ）,二、類緣物 檢出實例,17,UV spectra of sildenafil and acetildenafil (1),sildenafil,acetildenafil (1),18,精品PPT课件 浏览免费 下载后可以编辑修改。,同表寒肺热感冒，是风寒客于肌表，热邪壅肺所致的表寒里热证候。 表寒肺热感冒，或因肺热内蕴、复感风寒，或因表寒未解、入里化热、肺热为表寒
8、所遏而形成。 表寒肺热感冒，多以恶寒发热、咳嗽气喘、痰黄粘稠、烦躁为主症。 表寒肺热感冒因风寒客表，邪热壅肺，热被寒遏，不得透发，故形成表里寒热互相错杂的证候。伤寒论中的太阳表邪迫肺证、太阳表寒里热证等，即属此证范畴。 其临床表现为： 主症：恶寒发热，身痛；汗出、烦躁，口渴；咳嗽气喘。 次症：鼻塞、声重，头痛；咽喉肿痛；痰黄粘稠，鼻煽息粗；溲黄便秘。 舌脉：舌质红，苔白或薄黄；脉浮数或数。 凡具备主症、，或主症、和次症、，或主症、和次症、 ，并均见典型舌脉者，即可诊断为表寒肺热感冒。,专业精品课件,课件下载后可以编辑，欢迎下载收藏。,19,sildenafil,acetildenafil (1
9、),The LC/MS/MS ES+ daughter ion scan of sildenafil and acetildenafil (1),20,M-1: 465 m/z,M+1: 467 m/z,The LC/MS/MS ES+ / ES- mass scan of acetildenafil (1),Whats this compound ?,21,Conc. Partition with CH2Cl2 / H2O Alkalify : ammonia water pH = 89,MeOH extracted, filtrated,1 : Partiton,Sample,MeOH e
10、xt. residue,Partitioned with CH2Cl2 / H2O Acidify : 2 % HCl pH = 56,CH2Cl2 Layer H2O Layer,Conc.,CH2Cl2 Layer H2O Layer,Conc. Filtrated, Recrystalized by CH2Cl2,TLC checked Washed by H2O,acetildenafil (1) , white powder,CH2Cl2 Layer H2O Layer,22,The LC/MS/MS ES+ daughter ion scan of vardenafil and p
11、iperidenafil (2),piperidenafil (2),vardenafil,M+1: 460 m/z,23,UV spectra of vardenafil and piperidenafil (2),(2),24,2 : Column chromatography,EtOH ext. residue,Sample,Si-gel column CHCl3 MeOH,95%EtOH extracted filtrated,Conc.,Piperidenafil (2), white crystal,TLC, Conc. Recrystallized by MeOH,25,sild
12、enafil,Hydroxyhomosildenafil (3),The LC/MS/MS ES+ daughter ion scan of sildenafil and hydroxyhomosildenafil (3),M+1: 505 m/z,26,UV spectrum of sildenafil and hydroxyhomosildenafil (3),sildenafil,hydroxyhomosildenafil (3),UV 相似？,27,3 : Crystallization,powder sample extracted with 95% ethanol ultrason
13、ic shaking at room temp. for 30 minutes filtrated sample extract was stored at 4C overnight Hydroxyhomosildenafil (3), (white crystal ),28,The GC/MS fragmentation of sibutramine and N-Desmethylsibutramine(4),sibutramine,N-Desmethylsibutramine(4),-14 m/z,114,100,72,58,- 42 m/z,29,N-Desmethylsibutrami
14、ne(4),sibutramine,UV spectrum of sibutramine and N-Desmethylsibutramine (4),30,4 :Partiton,Evaporated to dryness in vacuum oven,N-Desmethylsibutramine (4), pale yellow liquid,Powder sample,Solved in H2O,Washed by H2O,Passed over anhydrous MgSO4,Alkalized with NaOH to pH 8 9,Filtrate, partitioned wit
15、h CH2Cl2,H2O layer CH2Cl2 layer,H2O layer CH2Cl2 layer,31,未知 標的成分 經分離純化 測定物化性 核磁共振儀（1H-NMR, 13C-NMR, COSY, DEPT, HMQC, HMBC） 紅外線吸收光譜儀（IR ） 質譜（HRMS, FAB） X-ray, EA等圖譜 判讀 確定構造,三、結 構 鑑 定(案例),32,The EIMS fragmentation of acetildenafil (1),M.W.466,Ex : 1,33,1H NMR spectrum of acetildenafil (1),N-CH2- (H-23),N-CH2- (H-30),-CH3 (H-31),3.7,2.3,0.9,34,13C NMR spectrum of acetildenafil (1),C=O (C-22),2O C,C-23,C-30,195,64 51,35,HMQC spectrum of acetildenafil (1),64 51,2.3,3.7,2O C,methylene,36,COSY spectrum of acetildenafil (1),N-CH2- (H-30),-CH3 (H-31),2.3,0.9,ethyl,-CH3 (H-31),N-CH2- (H-3
