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1、无名高热 的理论及其解决思路,近年来猪越来越难养、病越来越多！,根本原因何在？,猪群的健康状态下降,两大免疫抑制性疾病,猪繁殖与呼吸综合征 (蓝耳病PRRS),猪圆环病毒2型感染 (PCV-2),猪蓝耳病(PRRS),1.PRRS的危害,2.目前的流行特点,3.关于病毒的血清型,4.如何诊断？,5.疫苗使用存在的问题？,6.PRRSV 致病机制,7.利用猪只免疫及攻毒试验测试 PRRS免疫营养剂的功效性,蓝耳病(PRRSV disease),呼吸与繁殖综合症 Porcine respiratory disease complex (PRDC),母猪流产及死亡症状 Sow Abortion an
2、d Mortality Syndrome (SAMs),仔猪多系统综合衰竭消耗症 Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome (PMWS),蓝耳病毒的感染,哺乳期,怀孕期,保育期,育肥期,症状：发烧、嗜睡、厌食、无乳、发情不顺,链球菌、TGE 圆环病毒,圆环病毒、猪瘟 沙氏杆菌、巴氏杆菌 副嗜血杆菌,圆环病毒、 附红细胞体 放线杆菌AP,除此而外，公猪也会感染PRRSV,已感染PRRS的精虫,未感染PRRS的精虫,PRRSV与猪瘟免疫,感染PRRSV后对猪瘟抗体有很大的免疫抑制性,泰国病理学家 Kesdangsakonwuti 等人(2005),也就是
3、说,即使您打了猪瘟疫苗,因为PRRSV的侵袭,使猪瘟疫苗失去了保护力,用猪瘟病毒攻毒时,照样引起感染猪瘟而死亡!,结论：,PRRSV潜在的危害很大 猪群的生产性能下降 猪群免疫力下降 呼吸道疾病发病率上升 继发感染增多 母猪发情障碍、滞后产现象增多,PRRS病毒的血清型,国际上分美洲型和欧洲型 我国分离的毒株都属美洲型 我国猪群中还未发现欧洲型毒株,如何诊断?,明确猪场各阶段猪群的蓝耳病病毒感染率（用ELISA试剂盒进行抗体监测） 监测感染动态情况（每季度1次），是否升高或降低 出现繁殖障碍问题，应同时检测（胎儿体内、母猪血清中）病毒和抗体，单纯的抗体阳性并不能说明就是由蓝耳病造成的繁殖障碍,
4、当一个猪场符合以下3点时应诊断患PRRS,1.猪群表现典型的PRRS症状及有PRRS患病史,2.猪群出现PRRS病变,3.患病猪中找到PRRS病毒,如果仔猪出现典型的临床症状、病变、血液中有PRRS抗体时，又知该猪群没有注射PRRS疫苗的则可诊断患有PRRS。,疫苗使用存在的问题：,1.使用活疫苗造成蓝耳病暴发已是不争的事 实（国内外均有实例）,2.活疫苗的返强、变异、重组可产生新病毒,3.免疫接种猪造成疫苗毒的持续性感染和长 期带毒；引起免疫猪场和猪群处于长期感 染状态,PRRSV 致病机制,猪的肺泡巨噬细胞上的Heparinlike接受器与PRRS病毒母体蛋白的接合情况(Involveme
5、nt of the Matrix Protein in Attachment of Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus to a Heparinlike Receptor on Porcine Alveolar Macrophages),pSn = receptor for PRRSV,PRRSV,Sialo-adhesin protein (涎黏着蛋白),Heparinlike Receptor,Nucleus 核,ORF5 ORF6,MhcII,MhcI,MhcI,MhcII,CD8+ cell,CD4+ cell,NT
6、domain 结合部位,Host cells, Antigen present cells,利用猪只免疫及攻毒试验测试 PRRS免疫营养剂的功效性,(1)猪只免疫及攻毒试验,组别,1st immunized 2nd 3rd challenge,高剂量 低剂量 空白组,2128 days,Half-dose,Half-dose,Full-dose,Immunization and challenge in pigs model,Group coating antigen IgM-ELISA titres (S/BK) IFA titres NT titres H dose group 310 1
7、030 1632 1632 L dose group 3 10 16 832 BK group Negative CTL 1 1 8 8,(2)各试验组免疫三次后2周(9周龄)之血清免疫力价分析,(3)攻毒后(14-DPC)临床症状及健康情形：,攻毒后之DPI-14之临床症状(P8),疫苗组，于攻毒后一至二天内都有一至二头发生40.5以上发烧反应，但是二周后大都回复原来之40.3以下，攻毒后(H)及(L)显然大多较活泼健康、不再咳嗽、皮毛渐渐恢复亮丽，而(BK)对照组之猪只咳嗽现象比较频繁。以下表为攻毒后114-DPC观察之将康状态及患病情形,健康状况与临床症状观察指标表,每只动物每日需作10
8、项观察指标，每个观察项目正常为1点，每日总计正常为10点，最严重的临床症状为30点，死亡40点。,攻毒后之14-DPC依观察项目计分之临床症状,*：观察10项之临床症状，每一组6头猪分别给分后取其平均值后分别填入表格，T为10项临床症状之总分。,攻毒后之21-DPC依观察项目计分之临床症状,(4)试验猪只在免疫及攻毒后重量变化情形,攻毒,*:The blood samples of tested pigs can be detected PRRSV infected by RT-PCR running,(5)猪只攻毒试验后病毒血症检出情况,组别 疫苗名称 头数 2-DPC 7-DPC* 14-
9、DPC 21-DPC,H 6 0 2 1 0,L 6 0 2 2 0,BK Placebo 6 1 3 6 3,(6)各试验组攻毒后21DPC解剖后肺脏之病变严重性分析,猪只攻毒后，第21天起进行试验猪只之屠体解剖，观察肺部之肉眼病变结果可知，空白组之6头猪都有明显的间质性肺炎，坏死病变症状之病变指数Lesion score约在15-40，高剂量组有一肺脏病变严重，可能有二次感染发生，其指数约在25左右，其他5头的指数都在15以下。,各组的6头猪只其肺脏病变指数,(7)各试验组攻毒后21DPC解剖后分析肺脏组织切片病理分析间质性肺炎之严重性,结论：,由猪只免疫及攻毒试验模式可知：,高剂量及低剂
10、量的PRRS免疫营养剂经前二次半剂量及第三次全量免疫仔猪后，该免疫的猪只对于PRRSV（5 T-type1;TCID50 = 104)攻毒皆具有相当强的保护力！,PRRSV 感染途径与免疫营养增强剂的开发策略,多重感染路径： Step1. 上呼吸道及下呼吸道上皮细胞感染路径 Step2. 呼吸道周边组织的monocyte（单核球）, macrophage（巨噬细胞）感染路径 Step3. Antibody dependent enhancement (ADE) of phagocytosis,可以诱发产生较高的中和力价。 减低PRRS vaccine 抗原过敏性问题。 可以有效诱发T细胞免疫机
11、制。 （1）诱发中和力价之液体或粘膜免疫反应机制 （2）诱发细胞免疫机制清除被感染的细胞,PRRSV 感染途径与免疫营养增强剂的开发策略,千呼万唤始出来,免疫营养增强剂制作原理,Procedure of V.S.P:,Effective DNA,免疫营养增强剂的特点:,1.明确、稳定、纯粹的抗原。,2.免疫反应高度的特意性，只有针对有效抗原产生 抗体，对无关抗原没有反应。,3.免疫应答可以精确检测出来。,4.采用的电脑合成技术很简便。,5.有高度的精确性（高抗体并非一定是有效的抗 体，蛋白抗体才是有效的高抗体）。,6.采用生化技术(非疫苗技术)，不会产生没必要的抗 原及抗体。,7.高度的重复性，每批产品成份一样，稳定性高。,强疫肽的使用方法（肌肉注射）：,后备母猪：进场（留种）-2 ml（一剂）,经产母猪：生产前6周 -2 ml（一剂） 生产前4周 -2 ml（一剂）,出生仔猪：1-2周龄 -2 ml（一剂） （对母源抗体没有干扰）,种 公 猪：每年2-3次 -2 ml/次（一剂）,免疫营养增强剂使用成果,台湾某规模猪场2005年断奶仔猪存活率,经过使用免疫营养增强剂产品后存活率,猪场全面净化方案,良好 饲养管理,预防及 正常免疫,定期 抗体检测,充足的 营养,谢谢大家,
