微生物学采样-细菌

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1、1,微生物学样品采集方法,2,良好的样品采集、保存、运送是微生物检验质量保证最重要的前提条件。 采集的样品的质量常常决定了检验结果，从而直接影响食物中毒的处理工作。,3,食品卫生微生物学检验 GB4789.1-?总则,4 样品的采集 4.1 采样原则 4.1.1 根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程度等确定采样方案。 4.1.2 应采用随机原则进行采样，确保所采集的样品具有代表性。 4.1.3 采样过程遵循无菌操作程序，防止一切可能的外来污染。 4.1.4 样品在保存和运输的过程中，应采取必要的措施防止样品中原有微生物的数量变化，保持样品的原有状态。,4,4.2 采样方案 4

2、.2.1 类型 二级采样方案设有n、c和m值 三级采样方案设有n、c、m和M值 n：同一批次产品应采集的样品件数 c：最大可允许超出m值的样品数 m: 微生物指标可接受水平的限量值 M: 微生物指标的最高安全限量值 注1：二级采样方案-n个样品中 允许有c个样品其相应微生物指标检验值大于m值 注2：三级采样方案-n个样品中 允许全部样品中相应微生物指标检验值小于或等于m值； 允许有c个样品其相应微生物指标检验值在m值和M值之间； 不允许有样品相应微生物指标检验值大于M值。,5,按采样方案的结果判定,按三级采样方案设定的指标: n=5, c=2, m=100cfu/g, M=1000cfu/g

3、若5个样品的检验结果均小于或等于m 值（100cfu/g） 若2个样品位于m和M之间（100 cfu/g1000cfu/g） X,6,例1：婴幼儿配方粉微生物标准,CODE OF HYGIENICPRACTICE FOR POWDERED FORMULAE FOR INFANTS AND YOUNG CHILDREN （20042007）,微生物/采样方案 n c m M 致病菌 阪崎肠杆菌 30 0 0/100 g NA 沙门氏菌 60 0 0/25 g NA 加工卫生指标 菌落总数 5 2 500/g 5000/g 肠杆菌 10 2 0/25 g NA,7,例2：速冻预包装面米食品微生物指

4、标,8,4.2.2 各类食品的采样 按相应产品标准的规定执行 4.2.3 食源性疾病及食品安全事件中食品样品的采样 4.2.3.1 由工业化批量生产加工的食品污染导致的食源性疾病或食品安全事件，食品样品的采集和判定原则按4.2.1和4.2.2执行。同时，确保采集现场剩余食品样品。 4.2.3.2 由餐饮单位或家庭烹调加工的食品导致的食源性疾病或食品安全事件，食品样品的采集按GB14938中卫生学检验的要求执行。,9,GB4789.1-?总则 4.3 各类食品的采样方法,4.3.1 即食类预包装食品： 取相同批次的最小零售原包装，检验前要保持包装的完整，避免污染。 4.3.2 非即食类预包装食品

5、： 包装小于500g的固态食品或小于500mL的液态食品，取相同批次最小零售包装； 大于500mL的液态食品，应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体，使其达到均质后分别从相同批次的n个容器中采集5倍或以上检验单位的样品； 大于500g的固态食品，应用无菌采样器从同一包装的几个不同部位分别采取适量样品，放入同一个无菌采样容器内, 采样总量应满足微生物指标检验的要求。,10,4.3 各类食品的采样方法,4.3.3 散装食品或现场制作食品： 根据不同食品的种类和状态及相应检验方法中规定的检验单位，用无菌采样器现场采集5倍或以上检验单位的样品，放入无菌采样容器内, 采样总量应满足微生物指标检验的要求。 4.

6、3.4 食源性疾病及食品安全事件的食品样品： 采样量应满足食源性疾病诊断和食品安全事件病因判定的检验要求。,11,食源性疾病判定标准及处理总则 GB14938 修订要点1,3.1 术语 食源性疾病（foodbornedisease）:因摄入食物而导致的感染性或中毒性疾病。 食源性感染（foodborneinfection）：摄入被细菌、病毒或寄生虫污染的食物而引起的感染性疾病。 食物中毒（food intoxication ）:摄入被生物性毒素、化学性毒物污染或含有天然毒性成分的食物而引起的急性中毒性疾病。 食源性疾病暴发（foodbornedisease outbreak）：因摄入相同食物而

7、出现两例或两例以上症状相似病例的事件。 食源性疾病散发（foodbornedisease sporadic occurrence）: 单个病例罹患某种食源性疾病的事件，或两个及多个病例在时间、地点的分布及病例相互之间并无关联的单个事件。,12,食源性疾病判定标准及处理总则 GB14938 修订要点2,3.2分类 细菌性食源性疾病：摄入含有一定数量的食源性致病菌或细菌毒素（如沙门氏菌、肉毒毒素等）的食物，而引起的一类感染或中毒性疾病。 病毒性食源性疾病：摄入含有一定数量的病毒（如甲肝病毒、诺如病毒等）的食物而引起的一类感染性疾病。 寄生虫性食源性疾病：摄入含有一定数量的感染性寄生虫（如广州管圆线

8、虫、旋毛虫等）的食物而引起的一类感染性疾病。,13,食源性疾病判定标准及处理总则 GB14938 ?修订要点2,化学性食物中毒：摄入被某种化学毒物污染，或在加工制作过程中产生或误用某种化学毒物（如亚硝酸盐、钡盐等）的食物，而引起的一类急性中毒性疾病。 真菌毒素食物中毒：摄入被某种真菌毒素污染（如呕吐毒素、3硝基丙酸等）的食物，而引起的一类急性中毒性疾病。 有毒动物食物中毒：摄入含有有毒成分的动物性食物（如河豚鱼、有毒贝类等）所引起的一类急性中毒性疾病。 有毒植物食物中毒：摄入含有有毒成分的植物性食物（如毒蘑菇、菜豆等）所引起的一类急性中毒性疾病。,14,GB14938系列标准（113）,食源性

9、疾病判定标准及处理总则 食源性沙门氏菌病判定标准及处理原则 食源性金黄色葡萄球菌肠毒素中毒判定标准及处理原则 食源性副溶血性弧菌病判定标准及处理原则 食源性病原性大肠埃希氏菌病判定标准与处理原则 食源性变形杆菌病判定标准及处理原则 食源性蜡样芽胞杆菌病判定标准及处理原则 食源性肉毒梭菌病判定标准及处理原则 食源性椰毒假单胞菌酵米面亚种病判定标准及处理原则 食源性单核细胞增生李斯特菌病判定标准及处理原则 食源性空肠弯曲菌病判定标准及处理原则 食源性志贺氏菌病判定标准及处理原则 食源性阪崎肠杆菌病判定标准及处理原则,15,食物中毒现场调查常备用品,（1）采样工具：注射器、肛拭子、咽拭子、消毒棉签、

10、消毒纱布、调匙、勺子、夹子、镊子、剪刀、屠工用刀、酒精灯、标号用品、75%酒精、其它消毒灭菌器具等。 （2）样品容器：灭菌塑料袋、广口瓶、灭菌试管、灭菌粪便盒、样品冷藏设施等,16,食物中毒现场调查常备用品,（3）防护用品：工作衣或隔离衣、口罩、白帽子、手套、靴子等。 （4）调查用表：食物中毒个案调查登记表、调查结果汇总表、卫生监督文书等。 （5）检验设备：血平板、毒物快速分析设备、深部温度计等。,17,食物中毒现场调查常备用品,6）取证工具：照相机、录音机、摄象机等。 （7）参考资料：各种食物中毒诊断标准及处理原则、食品卫生相关法律法规、标准及其它有关专业技术参考资料等。 （8）其它：通讯工

11、具、交通工具、生活用品等。,18,微生物采样方法 -采样要求,应尽一切努力完成对中毒发生现场可疑中毒食品的样品采集工作，根据具体情况采集病人排泄物、呕吐物、血液样本、尿液。 样品采集、保存、运送是微生物检验最重要的前提条件。 采样的质量常常决定了检验结果，从而直接影响本次食物中毒的处理工作。,19,微生物采样方法 -采样品种,按临床症状和检验目的：呕吐物、血液、尿液、大便、剩余的食品、食品容器和加工用具表面涂抹等，可能条件下还应采集厨师和直接接触食品人员的手拭、肛拭等。 按现场具体情况进行：对腹泻病人要注意采集粪便和肛拭；对发热病人注意采集血液样品；对怀疑化学性食物中毒应采集血液和尿液；无剩余

12、可疑食品时应采集相关容器、用具、抹布等涂抹样品。,20,微生物采样方法 -采样人数,尽可能采集较多的人数：对一起发病规模较大的食物中毒事件一般至少应采集10-20名具有典型临床症状的病人的检验样品，同时应采集部分具有相同进食史但未发病者的同类样品作为对照。,21,微生物采样方法 -粪便,(一)、病人粪便标本的采集和运送 1. 选取有脓血、粘液部分的粪便3-5克，液体粪便则取絮状物2-5ml ，盛于灭菌的容器中，或用采便管采集腹泻病人大便，及时送检和接种。 2. 在无法获得粪便的情况下，可用经无菌生理盐水（或保存液）或增菌液用湿润的棉拭子插入肛门4-5cm深处（小儿2-3cm），轻轻转动一圈，擦

13、取直肠表面的黏液后取出，盛入运送培养基或保存液中送检。 * 注意为保证多个检验项目的开展，同一病人应至少采集2支肛拭。,22,微生物采样方法 -粪便,3.粪便标本应尽量在病程早期和治疗前采集；无论中毒病人是否已经服药，均应进行大便采集。同时应采集新鲜粪便。若无法获得时，可用采便管或棉拭子采集。 4. 标本采集后要立即送检。拖延送检可使病原菌数量迅速减少或杂菌过度生长，影响致病菌的检出率。 5.应采集严重腹泻中毒病人的大便。,23,微生物采样方法 -粪便,不同病原菌导致的腹泻，其粪便的性状不同，在采样过程中既要采集有价值的部分（如脓血部分），又要从大便性状上判断引起食物中毒的病因。 典型的黏液脓

14、血相兼大便：志贺菌 脓便：志贺菌、EIEC 血便：沙门、弯曲菌、志贺菌、EIEC 米泔样大便：霍乱 水样便腹泻：各种食物中毒 血水样大便 ：肠出血性大肠杆菌 阑尾炎症状：耶尔森菌,24,微生物采样方法 咽拭,1. 拟检查脑膜炎奈瑟菌时，应自鼻咽部采集标本。即用无菌的咽拭子（一端弯曲的金属棉拭子）由口腔进入伸向鼻咽部，到达咽后壁擦取标本。标本采集后应立即保温送检。,25,咽拭示范,咽拭子：将棉签檫拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签浸入4-5ml采样液中，尾部弃去。,26,微生物采样方法 鼻拭 漱口液,2. 拟检查流感等病毒等采集标本时，成人标本为咽喉漱洗液及鼻拭子。儿童为咽拭子。 采样液为20%

15、牛肉汤生理盐水，成人咽喉漱洗液用10ml，儿童咽拭子用3ml。 病人先咳嗽数次，然后将采样液倒入口内，仰头漱洗咽部约1分钟，吐回采样杯中，倒入无菌试管，塞紧塞子，再取棉拭子沾取鼻腔分泌物，放在同一采样试管中。 儿童采样用棉拭子涂抹咽壁及扁桃体，放入3ml采样液中，置冰瓶中立即送检。 注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有，则洗液和漱口液不应含有抗菌素。如为细菌检验，也不应有抗生素。,27,鼻拭示范,鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓缓转动退出。以同一拭子拭两侧鼻孔。将棉签浸入4-5ml采样液中，尾部弃去。,28,微生物采样方法 食品标本,（一）食品样品采集的基本要求 （1） 尽量采取中毒患者食用后的剩余食品； （2）无直接剩余食品时，采集可疑中毒食品的包装或者用灭菌生理盐水洗涤盛过可疑中毒食品的容器，取洗涤液； （3）采集同一加工场所加工的其它直接入口食品； （4）半成品或原料，若是化学性、有毒动植物食物中毒采集食品原料尤为重要； （5）调查人员应对食品加工场所进行认真全面搜查，以客观结果判断是否还存在剩余食品或者原料。,29,微生物采样方法 食品标本,（二）食品标本的采集方法 被污染的食品，采样前应先通过调查，基本上弄清污染物、污染范围和造成污染的