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1、1,第三章 血浆蛋白质与含氮化合物 的 生物化学检验,2,第一节 血浆蛋白质 第二节 氨基酸代谢紊乱 第三节 核苷酸代谢紊乱,3,第一节 血浆蛋白质,定义： 血浆和组织液中蛋白质，是血浆固体成份中含量最多、组成复杂、功能广泛的一类化合物。,4,一、血浆蛋白质的功能及分类,（一）血浆蛋白质的功能,维持血浆胶体渗透压-清蛋白的主要功能 作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体 作为pH缓冲系统的一部分 营养、修补组织蛋白作用 抑制组织蛋白酶 在血浆中起催化作用 参与凝血与纤维蛋白溶解 作为免疫球蛋白与补体等免疫分子，组成体液免疫防御系统。,5,（二）血浆蛋白质的分类,1电泳分类法 醋酸
2、纤维素薄膜电泳一般可将血清蛋白质分为清蛋白、1、2、球蛋白5条主要区带。 2功能分类法复杂,运输载体类 免疫球蛋白 补体蛋白类 凝血因子类 蛋白酶抑制物 血清酶类 蛋白类激素,6,二、血清总蛋白及主要组分正常与异常电泳,人血浆总蛋白(total protein，TP)浓度为6080g/L 临床实验室采用的标本多为血清 测定血清TP的首选方法：双缩脲法 样品采集时，患者应置仰卧位，直立时升高。 静脉采血时止血带压迫静脉时间超过3min，TP也可上升10%。 剧烈运动后立即采血TP最多可升高12%。,7,正常血清蛋白电泳图谱增示意图及其扫描曲线,（一）血清蛋白电泳的正常组分,8,（二）异常电泳图谱
3、的临床意义,1. 异常血清蛋白电泳图谱分型 2. 典型异常血清蛋白电泳图谱 3浆细胞病与M蛋白,异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征,10,2典型异常血清蛋白电泳图谱,A 正常人 B 肾病综合征 C 肝硬化(-桥),D 肝硬化(不典型-桥) E 多发性骨髓瘤IgA型 F 多发性骨髓瘤IgG型,11,3浆细胞病与M蛋白,正常血清蛋白电泳上显示的宽区带主要成分:免疫球蛋白(Ig)。 浆细胞病（plasma cell dyscrasia） 异常浆细胞增殖，产生大量单克隆Ig或其轻链或重链片段，病人血清或尿液中可出现结构单一的M蛋白（monoclonal protein） 在蛋白电泳时呈现一个色泽深染
4、的窄区带，此区带较多出现在或区，偶见于区。,血浆蛋白质的性质功能及其与电泳区带的关系,13,三、血浆蛋白主要组分的生物化学检验,（一）前清蛋白 （prealbumin，PA） 1. 性质,分子量55kD 由肝脏细胞合成的糖蛋白 电泳时迁移在Alb之前 半寿期1.9d 生理功能：作为组织修补材料和运载蛋白,14,2. 检测 目前多采用免疫透射比浊法 3. 临床意义,（一）前清蛋白 （prealbumin，PA）,作为营养不良的指标,作为肝功能不全的指标 负性急性时相反应蛋白,PA: 200400mg/L 正常 PA: 100150mg/L 轻度缺乏 PA: 50100mg/L 中度缺乏 PA50
5、mg/L 严重缺乏,15,（二）清蛋白 （albumin，Alb）,1性质,585个氨基酸残基组成 分子量66.2kD 含17个二硫键，是唯一不含糖的血浆蛋白质 肝实质细胞合成 半寿期19d 血浆中含量最多的蛋白质,16,维持血浆胶体渗透压：血浆渗透压的75%80%由Alb维持 血浆中主要的载体蛋白，具有结合各种配体分子的能力 缓冲酸碱维持酸碱平衡作用 营养作用,2生理功能,3Alb的检测,染料结合法-国内最常用方法是溴甲酚绿法 电泳法 免疫法(免疫扩散法、免疫比浊法和RIA) 电化学测定法,17,4临床意义,（1）低清蛋白血症 1）Alb合成降低： 2）Alb的分布异常 3）Alb丢失 4）
6、Alb分解代谢增加 5）无清蛋白血症(analbuminaemia),（2）血浆Alb增高 （3）由Alb含量估计其配体的存在形式和作用（4）作为个体营养状态的评价指标 （5）Alb的遗传性变异,18,4临床意义,血浆Alb作为营养指标的评价标准 35g/L 正常 2834g/L 轻度缺乏 2127g/L 中度缺乏 21g/L 严重缺乏,19,（三）1-抗胰蛋白酶（1-AT或AAT）,基因定位于14q31-32.3 394个氨基酸残基组成 分子量52kD pI为4.8 含糖10%12% 在醋纤膜电泳中位于1区带 主要由肝细胞合成，单核细胞、肺泡巨噬细胞和上皮细胞也能合成 人血浆中主要的丝氨酸蛋
7、白酶的抑制剂,1性质,20,2ATT基因的遗传表型,常染色体共显性遗传，有多种遗传表型 现已发现至少有75种基因变体 主要根据电泳迁移率分类 移动快的AAT变体用字母表前面的字母表示 移动最慢的基因以PiZ表示。 F型-fast, M型-middle, S型slow 根据等位基因出现频率的不同，缺陷变体可进一步分为常见和少见两部分 最常见的缺陷变体为Z和S型 表现为以下基因型：ZZ、SS、SZ、MZ、MS。,21,3临床意义,PiZZ型、PiSS型甚至PiMS型常伴有早年（2030岁）出现的肺气肿 低血浆AAT可发现于胎儿呼吸窘迫综合征 ZZ蛋白聚集在肝细胞，导致肝硬化 PiZZ表型的新生儿中
8、10%20%在出生数周后易患肝炎，最后因活动性肝硬化致死 PiZZ表型的某些成人会发生肝损害,AAT缺乏：,AAT属急性时相蛋白，在炎症、感染、肿瘤、肝病时均显著增加。,AAT增加：,22,4AAT的检测,血清蛋白电泳 单向扩散试验 免疫散浊比浊 免疫透射比浊法。 对于AAT降低者可进一步采用等电聚焦电泳或分子生物学方法进行AAT表型分析。,23,（四）1-酸性糖蛋白（AAG）,181个氨基酸残基组成 分子量约40kD 属血浆中含糖量最高（达45%）、酸性最强的糖蛋白 pI为2.74.0 典型的急性时相反应蛋白 主要在肝脏产生, 某些肿瘤组织也可产生,1性质,24,2临床意义,目前主要作为急性
9、时相反应指标：在风湿病、恶性肿瘤及心肌梗死等炎症或组织坏死时一般增加34倍。AAG增高是活动性溃疡性结肠炎最可靠的指标之一。 AAG增高：糖皮质激素增加，包括内源性的库欣综合征和外源性强的松、地塞米松等药物治疗时，可引起AAG升高。 AAG降低：营养不良、严重肝损害、肾病综合征以及胃肠道疾病致蛋白严重丢失等情况下AAG降低。此外雌激素可使AAG降低。,25,31-酸性糖蛋白的检测,过氯酸和磷钨酸分级沉淀AAG后，测定蛋白质或含糖量再计算之。 免疫扩散 免疫比浊法,26,（五）结合珠蛋白 （haptoglobin，Hp）,一种急性时相蛋白和转运蛋白 在电泳中位于2区带 由与链形成22四聚体，链有
10、1及2两种，而1又有1F及1S两种遗传变异体，两种变异体仅为一个氨基酸残基差异,1性质与遗传表型,27,结合珠蛋白的遗传表型,28,2功能,运输血管内游离的血红蛋白(Hb)到网状内皮细胞降解，防止Hb从肾脏丢失而为机体有效地保留铁，并能避免Hb对肾脏的损伤。,29,3临床意义,Hp浓度下降见于： 溶血性疾病如溶血性贫血、输血反应、疟疾。Hp参考值范围较宽，须连续观察以监测溶血是否处于进行状态。 对于溶血性疾病合适的组合检测项目包括血浆Hp、LD和游离Hb。血管外溶血不会使Hp发生变化。 严重肝病患者，其Hp合成减少。 Hp浓度升高见于： 属急性时相反应蛋白，当烧伤和肾病综合征情况下，血Hp常明
11、显升高。,30,4Hp的检测,放射免疫扩散法 免疫比浊法,定量检测,Hp亚型,聚丙烯酰胺凝胶电泳 等电聚焦电泳,31,（六）2-巨球蛋白 （ 2-macroglobulin ，2-MG或AMG）,血浆中分子量最大的糖蛋白，约为720kD，含糖量约8% 由肝细胞、单核细胞和星形细胞合成 半寿期约5d 包括补体C3和C4在内的一组血浆蛋白的主要成员，为硫酯键血浆蛋白家族。 主要特性是能与多种离子和分子结合，特别是能与蛋白水解酶结合而抑制酶的活性 可选择地保护某些蛋白酶活性,1性质,32,2临床意义,不属于急性时相反应蛋白。 低清蛋白血症，尤其是肾病综合征时，2-MG含量可显著增高 2-MG水平降低
12、见于：严重的急性胰腺炎和进展型前列腺癌治疗前,免疫比浊法,32-MG的检测方法,33,（七）铜蓝蛋白（ceruloplasmin，Cp）,含铜的2球蛋白 由1046个氨基酸残基组成 含糖约8%9.5% 每分子结合68个铜原子，由于含铜而呈蓝色 95%的血清铜存在于Cp中，其余5%呈可扩散状态 血循环中的Cp可认为是铜的无毒性代谢库,1性质,34,（七）铜蓝蛋白（ceruloplasmin，Cp）,血浆铜的转运 具有铁氧化酶作用，将Fe2+氧化为Fe3+，调节铁的运输、利用和氧化还原反应 抗氧化作用，抑制膜脂质被金属离子的过氧化作用,2功能,35,（七）铜蓝蛋白（ceruloplasmin，Cp
13、）,Cp浓度减少有关的疾病：包括Wilson病、营养性铜缺乏和Menkes病（遗传性铜吸收不良）。 属于急性时相反应蛋白：在妊娠、感染、创伤和肿瘤时血浆浓度增加。但在营养不良、严重肝病及肾病综合征时往往下降。,3临床意义,36,一种常染色体隐性遗传病 因血浆Cp减少，血浆游离铜增加，铜沉积在肝可引起肝硬化，沉积在脑基底节的豆状核导致豆状核变性，该病又称为肝豆状核变性 该病的原因不全是Cp减少 大部分患者可有肝功损害并伴神经系统症状 不及时治疗，此病是进行性和致命的，宜及时诊断 可用铜螯合剂-青霉胺治疗 Wilson病诊断标准：Cp下降，血清总铜浓度降低、游离铜增加和尿铜排泄增加，肝中铜的含量升
14、高,Wilson病,37,放射免疫扩散法 散射免疫比浊法 透射免疫比浊法,4. Cp的检测,38,（八）转铁蛋白（transferrin，TRF）,分子量约79.6kD 为单链糖蛋白，含糖量约6% 电泳位置在区带 等电点5.55.9 主要由肝细胞合成 半寿期为7d 能可逆地结合多价阳离子，每分子TRF可结合2个Fe3+ 血浆中TRF的浓度受食物铁供应的影响,1性质,39,多采用免疫比浊测定法,2临床意义,用于贫血的鉴别诊断 负性急时相反应蛋白：在炎症、肿瘤时常随着Alb、前清蛋白同时下降 作为营养状态的一项指标,3检测,40,由肝细胞合成的典型急性时相反应蛋白 由5个相同亚基非共价结合成盘形多
15、聚体 分子量为115140kD 电泳分布在慢区带 在钙离子存在下，结合多种细菌、真菌及原虫等体内的多糖物质以及磷酸胆碱，卵磷脂和核酸 在钙离子缺乏情况下，结合多聚阳离子 与抗体相似，可引发对入侵微生物对细胞的免疫调理作用和吞噬作用 可识别、结合从损伤组织中释放的毒性物质，然后解毒或从血中清除 本身在发生调理作用后被分解,（九）C-反应蛋白(C-reactive protein，CRP),1性质,41,第一个被认识的急性时相反应蛋白，是急性时相反应的一个极灵敏指标 血浆中CRP浓度在急性心肌梗死、创伤、感染、炎症、外科手术、肿癌浸润时迅速显著地增高 CRP是非特异性指标，主要临床用途： 筛选器质
16、性疾病 评估炎症性疾病的活动度和疗效监控 识别系统性红斑狼疮、白血病和外科手术后等并发的感染 监测肾移植后的排斥反应等,2临床意义,42,散射免疫比浊法 透射免疫比浊法 酶免疫分析法 荧光免疫分析法,3检测,43,四、急性时相反应蛋白,AAT AAG Cp CRP Hp 1-抗糜蛋白酶 血红素结合蛋白 C3 C4 纤维蛋白原,显著升高 或升高,降低,PA Alb TRF,急性负相时相反应蛋白,44,氨 基 酸 代 谢 库,氨基酸代谢概况,第二节 氨基酸代谢紊乱,一、体内氨基酸代谢,45,二、氨基酸代谢紊乱的种类,原发性氨基酸代谢紊乱：由于参与氨基酸代谢的酶或其他蛋白因子缺乏而引起的遗传性疾病 继发性氨基酸代谢紊乱：与氨基酸代谢有关的器官如肝、肾出现严重病变而导致的。 氨
