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1、病原菌的采样技术,广州市CDC 邓志爱,主要内容,如何正确采集和处理标本 选择合适的培养基和培养方法 常见病原菌标本的采集 食物中毒检材的处理,正确采集和处理标本 无菌操作 血液、脑脊液及穿刺液等-无菌操作 粪便、肛拭子和咽拭子等-避免杂菌污染 盛放容器 无菌容器 采集时间和部位 在使用抗菌药物之前；选择合适的部位,送检时间和方法 做好标记 填好送检单 立即送检 置运送培养基送检 4保存运送 35-37保温运送 安全防护 人、标本、环境,选择合适的培养基和培养方法 依据：标本来源、可能存在的病原菌 血液、脑脊液 1.部分标本直接涂片染色镜检 2.培养基：血培养瓶/管、BAP（血平板）、MAC（
2、麦康凯平板）/EMB（伊红美蓝平板）、CA（巧克力平板）、SA（沙保培养基） 3.培养方法：同时在需氧、厌氧和CO2环境培养,粪便、肛拭子 SS、MAC/EMB、TCBS 痰、咽拭子 1.可直接涂片染色镜检 2.BAP、CA、SA、BCYE（军团菌培养基） 3.在需氧、厌氧和CO2环境培养 尿 1.做细菌计数 2.BAP、 MAC/EMB、CA,脓液、分泌物 1.可直接涂片染色镜检 2.EB(增菌肉汤) 、BAP、MAC/EMB、 CA 3.在需氧、厌氧环境培养 生殖道标本 1.部分标本直接涂片染色镜检 2.EB、BAP、 MAC/EMB、CA、SA 眼耳口鼻标本 1.部分标本直接涂片染色镜检
3、 2.EB、BAP、 MAC/EMB、CA,常见病原菌标本的采集 血液、脑脊液 采血时间与次数 用药前24小时内采34次血液标本，可使细菌检出率高达99%； 一般在病人发热初期12天内或发热高峰时采集 采血部位 一般从肘静脉采血，亚急性细菌性心内膜炎等病人则从肘动脉或股动脉采血,采血量 成人510ml/次，婴幼儿15 ml/次 脑脊液 采集35ml/次， 35-37保温，立即送检,粪便标本 自然排便采集法 挑取有脓血、粘液或絮状物部分置采便盒/保存液/增菌液中送检 直肠拭子采集法 置C-B保存液/增菌液中送检,呼吸道标本 咽拭采集法 尽量避免口腔正常菌群污染 自然咯痰法 用清水反复漱口，用力自
4、气管深部咳出当日第一口脓痰，置无菌容器中尽快送检 小儿取痰法 气管镜采集法,胃内采痰法 结核病人可用此法采集 气管穿刺法 主要用于厌氧培养 呼吸道标本采集注意事项 痰液标本以晨痰为佳，咳前要充分漱口，减少口腔正常菌群的污染 采集的痰液标本必须是肺深部的痰液而不是唾液,标本采集后及时送检，以防某些细菌在外环境中死亡。作结核分枝杆菌或真菌培养的痰液如不能及时送检，应放入4 冰箱，以免杂菌生长 做结核分枝杆菌检查，最好收集24小时痰液 有1/4到1/2肺部感染的病人可能发生菌血症，可同时做血培养,尿液标本 中段尿采集法 肾盂尿采集法 确定菌尿是否来自肾脏 膀胱穿刺尿采集法 主要用于厌氧菌培养,食物中
5、毒检材的处理 肛拭 1.采用C-B保存液和液体硫乙醇酸盐培养基运送。 2.C-B管：检验人员在接到C-B管样后，应立即用旋涡振荡器充分振荡混匀，然后用无菌吸管分别吸取混悬液0.51ml放入11种增菌液增菌培养，病人肛拭同时接种于11种平板培养基直接分离培养。 3.液体硫乙醇酸盐培养基：置厌氧培养箱培养，病人肛拭同时接种血平板/SPS平板直接分离置厌氧培养箱培养。,食品 应以无菌操作取适量食品，分别放入12种增菌液管中增菌培养。产气荚膜梭菌、蜡样芽胞杆菌分别按国标GB4789.13、14-2003作菌落计数。,外环境 一般不采用直接分离培养。分别放入12种增菌液管中增菌培养。,呕吐物 需直接进行金葡肠毒素检测，用Mini VIDAS 全自动荧光免疫分析仪检测。同时进行细菌学检验。,12种增菌培养液： 亚硒酸盐增菌液/MM：培养沙门菌 牛肉汤：培养金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌 1%葡萄糖肉汤：培养链球菌 7.5%NaCl肉汤：培养金黄色葡萄球菌 嗜盐增菌液：培养副溶血性弧菌,碱性蛋白胨水：培养霍乱弧菌 肠道增菌液：培养致泻大肠埃希菌 GN增菌液:培养志贺菌、变形杆菌 LB1增菌液：培养单核细胞增生李斯特氏菌 布氏肉汤：培养空肠弯曲菌 硫乙醇酸盐培养液/脑心浸液：培养产气荚膜梭菌,
