螺旋体等及真菌（检验）课件

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1、第十八章 螺旋体(Spirochete),是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。 介于细菌和原虫之间,分类： 螺旋体目 螺旋体科 八个属（） ，三个属为致病性螺旋体,第一节 分类与命名,疏螺旋体属（）：螺旋310个，稀疏、粗、浅，不规则。 如：奋森疏螺旋体 密螺旋体属（ ）：螺旋814个、细密、深、规则、两端尖直。 如：梅毒螺旋体 钩端螺旋体属（）：螺旋细密、规则，两端或一端呈钩状。 如：问号状钩端螺旋体,问号钩端螺旋体：致病 双曲钩端螺旋体：无致病性,第二节 钩端螺旋体(Leptospira),一、临床意义,1. 致病物质： 内毒素样物质（ELS）/脂多糖样物质（LLS

2、) 溶血素 细胞毒性因子（GTF） 细胞致病作用物质,2. 所致疾病 钩体病（打谷黄），自然疫源性疾病，人畜共患病 传染源和储存宿主：鼠类、幼猪 传播途径：皮肤粘膜接触疫水、胎盘、消化道、吸血昆虫 易感人群：农民、饲养员、矿工,临床表现 寒热酸痛一身软， 眼红腿痛淋巴大。 （尤其是腓肠肌压痛明显）,形态染色： 具有细密而规则的螺旋，菌体一端或两端弯曲成钩状 Fontana镀银染色：棕褐色 图 电子显微镜：轴丝，“内鞭毛” 暗视野显微镜：观察活标本可见运动,二、生物学特性,抗原构造 属特异性抗原 群特异性抗原 型特异性抗原 显微镜凝集试验（） 凝集素吸收试验（） 基因组,培养特性 营养要求高；

3、常用Korthof培养基（柯索夫培养基），生长缓慢； 最适温度为2830；最适pH为7.27.6； 在液体培养基中呈半透明云雾状生长； 在固体培养基中形成透明、不规则、直径约2mm的 扁平菌落。,抵抗力：在自然界存活力强 耐潮湿、耐碱（NaHCO3碱化尿液）； 对热敏感； 对普通化学消毒剂敏感； 对青霉素敏感。,（一）检验程序 见图18-2 （二）标本采集： 第一周内取血 第二周取尿液或脑脊液,三、微生物学检验,（三）标本直接检查 1. 直接显微镜检查 暗视野显微镜检查 普通光镜检查（Fontana镀银染色） 直接免疫荧光法检查 2. 核酸检查：PCR、特异DNA探针法,（四）分离培养及鉴定

4、Korthof培养基 暗视野检查、镀银染色，血清学鉴定。 （五）抗体检测 1. 显微镜凝集试验（凝集溶解）： 已知钩体+血清 小蜘蛛样凝集 血清中补体含量高 凝集稍后溶解 效价1:300， 取双份血清，抗体效价呈4倍增高,2. 间接凝集试验： 已知钩体+炭粒（乳胶）+待测血清 结果 炭粒(1:8)；乳胶(1:2) 3. 酶联免疫吸附试验 （六）动物试验：标本豚鼠腹腔接种 1. 35d 腹腔抽取液暗视野 2. 36天 取心脏血检查及分离培养 3.死亡动物解剖：,第三节 密螺旋体属,梅毒螺旋体(T.pallidum,TP),一、临床意义,（一）致病物质 外膜蛋白：粘附作用 荚膜样物质：表面粘多糖和

5、唾液酸 透明质酸酶,所致疾病 1、传染源和宿主都是人 2、传播途径： 先天梅毒：胎盘 后天梅毒：性接触 3、疾病特点： （1）后天梅毒（获得性梅毒）：,分为三期： 期梅毒（初期，初疮）无痛性硬下疳，病灶中有大量螺旋体，传染性极强，可48周自然愈合， Ab（+/-），活检（+）图 期梅毒（中期）硬下疳后28周全身皮肤粘膜梅毒疹，淋巴结肿大，有螺旋体，传染性极强，此期可反复，Ab（+），活检（+） 图 期梅毒（晚期）累及全身，基本损害为慢性肉芽肿，大片溃疡，梅毒瘤，危及生命，无螺旋体，传染性小，Ab（+），活检（-）图,先天梅毒 （胎传梅毒） 经胎盘进入胎儿所致 多发生于妊娠4个月之后 表现：流产

6、、早产、死胎、先天畸形（马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎、神经性耳聋）,二、生物学特性,1、形态与染色：图 814个致密规则的螺旋，两端尖直，运动活泼，Fontana镀银染色呈棕褐色 2、培养：尚未成功（人工无生命培养基）,3、抵抗力：极弱 对温度敏感，50 5min,4 3天死亡； 对干燥敏感； 对肥皂、青霉素敏感。,三、微生物学检验,1、检验程序 见图18-5 2、标本采集 分泌物、渗出液、穿刺液、组织块 期梅毒取下疳分泌物 期梅毒取梅毒疹渗出液或淋巴结穿刺液 先天性梅毒：脐血,3、标本直接检查 直接显微镜检查 核酸检测 4、体外培养 5、抗体检测 （1）非密螺旋体抗原试验：VDRL试验和R

7、PR试验 （2）密螺旋体抗原试验,（1）非密螺旋体抗原试验,VDRL(性病研究实验室）试验 原理： 胆固醇（载体）+心脂质（抗原）致敏颗粒 检测血清中的反应素 表现：絮凝块状物 结果需要低倍显微镜观察,RPR（快速血浆反应素环状卡）试验 原理 活性炭颗粒（载体）+心脂质（抗原）致敏颗粒检测血清中的反应素 表现：黑色凝集块 结果可肉眼观察,FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收）试验 FTA-ABS-DS（梅毒螺旋体荧光抗体双染色）试验 MHA-TP（抗梅毒螺旋体抗体微量血凝）试验 ELISA（血清学诊断首选试验） TPPA梅毒螺旋体抗体明胶颗粒凝集试验（筛查阳性标本确诊试验）,（2）密螺旋体抗原

8、试验,第十九章 支原体(Mycoplasma),是一类缺乏细胞壁，呈多形性，能通过细菌滤器，并能在无生命培养基中独立生长繁殖的最小的原核细胞型微生物。,支原体科：支原体属(Mycoplasma)、脲原体属(Ureaplasma) 对人致病的支原体：肺炎支原体、溶脲脲原体（解脲脲原体）、人型支原体、生殖器支原体、穿通支原体等,分类与命名,一、临床意义,（一）致病物质及机制 黏附素：粘附和定植功能 多糖荚膜：抗吞噬作用 3. 毒性代谢产物（如神经毒素、超氧离子、氨等），引起细胞损伤 4. 超抗原,（二）所致疾病,二、生物学特性,1、形态结构 A.无细胞壁，呈多形性 B.细胞膜胆固醇含量高 C.某些

9、支原体具有荚膜 D.某些支原体具有顶端结构，与侵袭性有关 2、抗原结构 糖脂抗原和蛋白质抗原,3、培养特性 营养要求高：胆固醇、脂肪酸 pH要求：7.68.0，低于7.0会死亡， 溶脲脲原体 5.56.5 气体环境：5% CO2 生长缓慢，可形成“荷包蛋样”菌落 在液体培养基中呈极浅淡的浑浊,支原体与细菌L型比较,5、生化反应,6、抵抗力 A.对理化因素的抵抗力比细菌弱； B.作用于细胞壁的抗生素无效； C.对作用于胆固醇的药物敏感； D.对阻止蛋白质合成的抗生素敏感。,三、微生物学检验,（一）检验程序 （二）标本采集 ：痰、咽拭子、鼻咽洗液、血清标本、尿、精液、分泌物等。 （三）标本直接检查

10、 1标本涂片 2. 核酸检测： PCR,（四）分离与鉴定 1、分离培养 2、鉴定：生化反应、血清学试验 （五）抗体检测 ELISA、补体结合试验、间接血凝试验、冷凝集试验,第二十章 衣原体(chlamydia),是一类严格细胞内寄生，具有独特发育周期，并能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。,分类与命名,四个种： 沙眼衣原体 鹦鹉热衣原体 肺炎衣原体 家畜衣原体,一、临床意义,1.致病物质 蛋白质、LPS 促进衣原体吸附易感细胞，侵入机体 阻止吞噬体和溶酶体融合，使衣原体得以生存 类似G-菌感染的炎症反应和迟发性变态反应 使细胞释放IL-1类细胞因子，导致机体损伤,2.致病机理 入侵机体吸附易感细

11、胞细胞内陷形成包涵体衣原体分裂繁殖破坏细胞释放感染其它细胞,3、衣原体及其所致疾病 肺炎衣原体致病性: 1、经飞沫（呼吸道）传播。 2、主要引起青少年急性呼吸道感染，以肺炎多见，也可致气管炎、咽炎。 3、肺炎衣原体慢性感染可能与冠心病有关。 鹦鹉热衣原体致病性： 1、呼吸道传播。 2、引起呼吸道感染和肺炎。,沙眼衣原体的致病性: 1. 沙眼：间接或直接接触传播。 2. 包涵体结膜炎：经产道或污物而感染。 3. 泌尿生殖道感染：由性接触传播。 4. 沙眼衣原体肺炎：多见于婴幼儿，经呼吸道感染 5. 性病淋巴肉芽肿：主要由性接触传播。,1、圆形或椭圆形，G- ，不易着色，Giemsa 染色呈紫色。

12、图 2、能通过细菌滤器；有DNA和RNA两种核酸；有肽聚糖组成的细胞壁。 3、酶系统不够完善，活细胞内才能生长繁殖。 4、有独特的生长发育周期，类似二分裂方式繁殖。 5、 抵抗力较弱，多种抗生素能抑制其生长。,二、生物学特性,发育周期： 原体 -始体-原体 原体（EB）：小球形颗粒，具有细胞壁， 是发育成熟的衣原体，为胞外形式， 具感染性，无繁殖能力， 在细胞内的空泡中发育 始体（网状体，RB）：圆形，较大，无细 胞壁，是繁殖体，不具感染性，在细胞内的空泡中繁殖为 原体,包涵体,易感细胞内含繁殖的,始体和子代原体的空泡,表212 原体和网状体的性状比较,三、微生物学检验,标本采集 痰、咽拭子、

13、血液、分泌物、精液等 标本直接检查 1.直接显微镜检查 ：观察有无包涵体 包涵体即指在易感染细胞内含增殖的网状体和子代原体的空泡。成熟的包涵体含大量的原体，包涵体为嗜碱性，用Giemsa染色时呈蓝色或暗紫色，用碘染色时包涵体呈棕褐色，而其他细胞则不着色，有利于鉴别。,衣原体包涵体,2酶免疫检测 3胶体金法检测衣原体 4核酸检测：核酸杂交；PCR,（四）分离培养与鉴定 1、分离培养：细胞培养分离、鸡胚培养 2、鉴定 （五）抗体检测：补体结合试验（CF）、间接血凝试验（IHA）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等，常用CF和ELISA法。,第二十一章 立克次体(Rickettsia),-立克次体 (

14、Rickettsia)是一类专性活细胞内寄生的G-原核细胞型微生物。,一、临床意义,内毒素 磷脂酶A 造成微循环障碍 常以节肢动物为传播媒介或储存宿主 大多是人畜共患病病原体，引起以发热、出疹为特征的疾病,致病性立克次体及其所致疾病,病原体 所致疾病 媒介 传播方式 普氏立克次体 流行性斑疹伤寒 人虱 虱粪经伤口感染 莫氏立克次体 地方性斑疹伤寒 鼠蚤 蚤粪经伤口感染 立氏立克次体 落基山斑点热 蜱 蜱叮咬 贝氏立克次体 Q 热 蜱 接触、呼吸道等 恙虫病立克次体 恙虫病 恙螨 恙螨幼虫叮咬 查菲埃立克体 人单核细胞埃立克体病 蜱 蜱叮咬 五日热巴通体 战壕热 人虱 虱粪经伤口感染,二、生物学

15、特性,大小介于细菌与病毒之间，能通过细菌滤器 呈杆状或球状，G- ，Giemsa染色成紫红色 图 同时含DNA和RNA含两种核酸，行二分裂繁殖 具有细胞壁和细胞膜,微荚膜具粘附和抗吞噬作用 专性细胞内寄生 生长缓慢，常接种鸡胚（卵黄囊）培养 对四环素、强力霉素等抗生素敏感,三、微生物学检验,标本采集 ： 病人血液标本 活检或尸检材料 标本直接检查 1、免疫荧光检测 2、核酸检测,分离培养与鉴定 1、动物接种、细胞培养、鸡胚卵黄囊 2、鉴定 抗体检测 1、外斐反应 Weil-Felix 反应（外斐反应） 大部分立克次体与普通变形杆菌某些菌株（X19、Xk、X2）的菌体抗原有共同的抗原成分，故可用这些变形杆菌的菌体抗原与不同稀释度的患者血清做凝集反应，诊断立克次体病。,外斐反应,2、IFA试验 3、ELISA 4、CF试验 5、其他 MA、IHA和LA试验等,第二篇 临床真菌学,原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较,第二十二章 真菌学总论,第一节 生物学性状,1. 形态结构 单细胞真菌-圆形或椭圆形 酵母型真菌：以芽生方式繁殖 类酵母型真菌：以芽生方式繁殖，有假菌丝,多细胞真菌-又称丝状菌或霉菌，由