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1、1,第三章 生物化学检验实验室基本知识,2,本章内容概要：,第一节 实验用纯水 第二节 实验用玻璃仪器 第三节 实验方法的选择 第四节 实验方法的评价 第五节 实验的诊断性能评价,3,教学目的和要求：,1、掌握实验用纯水的三级标准；实验方法的分级、标准品分级及相互之间的联系；实验误差的定义、分类和表示方法；方法评价实验尤其是回收实验和干扰实验的原理和操作；诊断性能评价的指标。,2、熟悉纯水的制备方法；实验方法选择的的原则和步骤；方 法评价的基本内容和步骤；方法评价的指标；参考值和医学决 定水平的概念。,3、了解水的纯度检查；方法性能判断的指标；受试者工作曲 线的应用和用途。,4,第一节 实验用
2、纯水,天然水,自来水,实验用纯水,经简单的物理、化学方法处理，除去悬浮物质和部分无机盐,经蒸馏、电渗析等处理，除去杂质,(悬浮物,胶体物质,溶解物质),5,一、纯水的制备方法,蒸馏法:,优点:设备简单,缺点:1、挥发性物质难以去除；2、耗能大，耗能水多； 3、需注意管道清洁,纯度： 25时1105cm,如何 安装：,6,离子交换法：,氢型强酸性阳离子交换树脂 (RSO3H，R为母体) ，其中的H+与Ca2+、Na+等金属离子发生交换反应，而将钙、镁离子除去,氢氧型强碱性阴离子交换树脂(RNOH，R为母体)，其中的OH-与水中的CL-、碳酸根等阴离子发生交换反应，而将它们除去：,7,优点: 除了
3、可去除杂质离子以外兼具吸附电中性杂质和过滤颗粒杂质的作用。,缺点:,纯度： 25时5106cm,2、由于离于交换为可逆反应，故去离子水并非绝对不含离子,1、设备较复杂，成本较高；,8,电渗透法,在电场作用下水中各种阳离子趋向阴极，各种阴离子趋向阳极但阳离子只能透过阳膜而被相邻的阴膜所阻，阴离子与此相反这样，在一些隔间内集中了阳离子和阴离子，即形成含盐多的浓水，在另一些隔间内由于阴、阳离子的迁出降低了含盐量形成淡水,9,1、不需要消耗化学药品，设备简单，操作方便。,消耗电能，当原水中盐浓度过低时，溶液电阻大，用电渗 析也不经济,纯度:25时104105cm,2、对于含盐量高的海水等用此法比用离子
4、交换法更为经济,优点:,缺点:,10,炭吸附法:,活性炭是一种非常优良的吸附剂，它是利用木炭、各种果壳和优质煤等作为原料，通过物理和化学方法对原料进行破碎、过筛、催化剂活化、漂洗、烘干和筛选等一系列工序加工制造而成。,11,1、设备简单，操作方便。,纯水制备效率低.,仅作为各种制备纯水配套的一种措施.,2、它具有物理吸附和化学吸附的双重特性,可以有选择的吸附气相、液相中的各种有机物质.,优点:,缺点:,12,超滤膜法,特点:仅能除去胶体细菌等大分子物质和悬浮物,所得水还需进一步纯化.也是作为各种制备纯水配套的一种措施.,13,混合纯化系统,医用超纯水设备,实验室纯水系统,橱下式全自动逆渗透纯水
5、机,特点:多种方法混合纯化,可获得纯度很高的二级甚至一级纯水.,14,二、水的纯度检查,用电导仪或兆欧表测定其电导率或电阻率,用特定试剂检测水中残留的Ca2+、Mg2+、CI-、SO42- 、硅酸盐等成分的含量,微生物含量检测,单位：,电导：西门子（s） 电导率： scm-1 电阻： 电阻率：cm,15,CAP:美国病理学家学会,实验用纯水标准,16,NCCLS:美国临床实验室标准化委员会,17,级水:临床实验室用水,一般实验检验; 级水:特殊实验如酶活性测定、电解质分析等; 级水:用做仪器、器皿的自来水清洁后冲洗.,实验用纯水的用途,18,实验用纯水的贮存、运输和使用:,一般选用聚乙烯或聚丙
6、烯桶（瓶）贮存，贮存时间不 宜太长，使用时应避免一切可能的污染，切勿用手接触纯 水或容器内壁.,盛装药品,试剂,19,第二节 实验用玻璃仪器(了解),20,第三节 实验方法的选择,选择准确可靠的实验方法,为临床提供准确可靠的信息,临床生化检验分析,实验方法选择的目的 实验方法的分级 标准试剂的分级,保证,21,一、实验方法选择的目的,根本目的： 各实验室按照方法选择的原则结合自身条件，确定合适的某项目的检测方法。 保证拟使用的检测方法在正式应用于临床分析病人标本之前，对方法性能及可能引入的误差进行了解，作出初步评估。,22,二、实验方法的分级,分级依据：IFCC根据分析方法的准确性与精密度的不
7、同。,决定性方法 参考方法 常规方法,分为三级：,23,（一）决定性方法definitive method,定义： 是指准确度最高，系统误差最小，经过详细的研究，没有 发现产生误差的原因或在某些方面不够明确的方法，其测定结 果与真值最为接近。,主要方法：,重量分析法、中子活化法、同位素稀释-质谱分析法（ID-MS）,24,应用： 由于技术要求太高，费用昂贵，这类方法不直接用于鉴定 常规方法的准确性，只用于评价参考方法与一级标准品。,储氢重量分析仪 (北京英格海德分析技术有限公司),25,（二）参考方法reference method,定义： 是指准确度与精密度已经被充分证实，且经公认的权威机构
8、（国家主管部门、相关学术团体和国际性组织等）颁布的方法。这类方法干扰因素少，系统误差很小，有适当的灵敏度、特异度、较宽的分析范围并且线性良好，重复测定中的随机误差可以忽略不计。,主要方法：,原子吸收分光光度法、火焰光度法、免疫化学法，离子交换层析法等,26,应用： 能在条件优越的实验室作常规分析，主要用于鉴定常规方法，评价其误差大小、干扰因素并决定是否可以被接受；用于鉴定二级标准品和为质控血清定值；用于 商品试剂盒的质量评价。,27,（三）常规方法（routine method ）,定义： 应具有足够的精密度、准确度和特异度，有适当的分析范围，经济实用， 其性能指标符合临床或其它目的的需要。,
9、主要方法： 溴甲酚绿法、双缩脲法、J-G法等。,应用： 临床常规检验使用，常规方法在作出评定以后，经有关学术组织认可，可以作为推荐方法（recommended method ） 。,偏差已知方法,偏离未知方法,28,29,三、标准试剂的分级,标准试剂（标准品）的定义：,国际标准化委员会将标准品（参考物， reference material）的定义暂定 为：它的一种或几种物理或化学性质已经充分确定；被用于校正仪器或用 于评价一种测定方法的物质，并将其分成三级。,标准品的应用：,方法评价、仪器校正、常规分析的质量控制,30,标准品的分级：,一级标准品 二级标准品 控制物,31,（一）一级标准品（
10、原级参考物）,定义： 是已经确定的稳定而均一的物质，其数值已由决定性方法确定或由高 度准确的若干方法确定，所含杂质已经定量。,应用： 用于校正决定性方法，评价和校正参考方法以及为“二级标准品”定值。,32,（二）二级标准品（次级参考物）,定义： 这类标准品可以是纯溶液（水或有机溶剂的溶液），也可以存在于相 似基质中。可由实验室自己配制或为商品，其中有关物质的量由参考方法 定值或用一级标准品比较而确定。,应用： 主要用于常规方法的标化和控制物的定值。,33,（三）控制物（质控物）,用二级标准品和常规方法测定，用于常规质量控制，以控制病人标本的测定误差。控制物不能用于标定仪器或方法。,定值血清：在
11、发生问题时查找原因,未定值血清：一般情况下使用,另：用二级标准品和常规方法测定，然后定值经过修正后得到校准品。,34,决定性方法 一级标准品 参考方法 二级标准品 常规方法 控制物,35,四、实验方法选择的原则,总原则： 从实际出发，根据实验室的条件和检测要求确定适当的方法。,条件优越的实验室：参考方法,一般临床化学实验室实验室：常规方法或使 用方便的参考方法,36,尽量选用国内外通用方法或推荐方法，便于方法 的规范化和质量控制，重点考虑实用性和可靠性。,常规方法选择时的原则：,37,（一）实用性,微量快速、方法简便、安全可靠、成本低廉,（二）可靠性,所选方法具有较高的精密度、准确度和较大的检
12、测能力，保证测定结果的准确性能满足方法允许误差限度的要求。,标本l、试剂ml,38,五、实验方法选择的步骤,（一）广泛查阅文献：,（二）选定侯选方法：全面认识该法。,（三）侯选方法的初步试验：,根据方法选择的要求，比较各种方法,39,初步试验包括：简单 标准曲线和重复性 质控血清和新鲜标本的重复实验 析浓度不同的标本，并与公认的参考方法的结果对比.,初步试验目的: 使工作者熟悉有关技术,掌握各分析步骤要点,判断能否适合本室条件要求.根据所获得的资料确定是否有必要作进一步研究。,初步试验,40,第四节 实验方法的评价,初步试验,判断符合实验要求,系统评价,决定该方法是否可接受,分析评价试验测得结
13、果和 比较方法性能判断的标准,实验方法系统评价的过程:对实验误差的测定,41,一、实验误差,定义:指量值的给出值与其客观真值之差.,(一)实验误差的分类:依据来源性质,实验误差,系统误差 SE,随机误差 RE,恒定系统误差 CE,比例系统误差 PE,广泛性,不可求,另：粗大误差,42,系统误差（systematic error， SE）,定义:指一系列测定值对真值存在同一倾向的偏差。,特点: 具有单向性，而没有随机性，常有一定的大小和方向； 一般由恒定的因素引起，并在一定条件下多次测定中重复出现； 当找到引起误差的原因，采取一定措施即可纠正，消除系统误差能提高测定的准确度。,43,分类: CE
14、：指由干扰物引起的使测定值与真值存在恒定大小的误差，误差大小与被测物浓度无关，而与干扰物浓度相关。 PE：指相对于被测物浓度有相同的百分比误差，误差的绝对量与被测物浓度成正比。,引起误差的原因： 方法误差：最严重，最难避免； 仪器和试剂误差：可以采取措施避免。,44,随机误差（random error，RE）,特点: 误差没有一定的大小和方向，可正可负，数据呈正态分布； 具有不可预测性，不可避兔，但可控制在一定范围内； 当分析步骤越多，造成种误差的机会越多； 随测定次数增加，其算术均数就越接近于真值。,定义:指在实际工作中，多次重复测定某一物质时引起的误差。,45,由测定仪器、试剂、环境等实验
15、条件的改变以及分析人员操作习惯等因素的变化而引起。,系统误差,随机误差,引起误差的原因,引起误差的原因：,46,(二)实验误差的表示方法：,平均误差：算术平均偏差，用dm表示,标准偏差（标准差）：表示精密度的较好的指标。,绝对误差和绝对偏差：,dm=di/n=X- /n,di2,=,N-1,绝对误差=X-T,绝对偏差=X-X,47,相对误差和相对偏差：,变异系数（coefficient of variation，CV）,相对误差=,X-T,T,100%,相对偏差=,X-X,X,100%,CV=,S,X,100,比较各组数据间的变异情况,CV 离散度 精密度,48,49,二、方法评价的基本内容和
16、步骤,(一)方法评价的基本内容,基本内容:通过实验途径，测定并评价方法的精密度和准确度。,评价试验的过程:就是对误差的测定。,精密度和准确度,误差,方法评价指标不可直接测定,实际测定可直接测定,方法评价试验,50,(二)方法评价步骤,评价前实验:研究候选方法的最适条件。 初步评价:批内和日内重复性试验、回收试验、干扰试验 最后评价:依顺序作日间重复性试验，方法比较试验和总体判断方法是否可接受 。 评价后实验:如方法可接受，则进行临床相关研究. 方法应用:建立质控系统，培训操作者，引人常规工作等 。,随机误差,系统误差,方法性能判断,诊断学评价,51,三、方法评价指标,精密度、准确度、特异度和干扰以及检测能力等,（一）精密度（Precision）,定义:表示测定结果中随机误差大小程度的
