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1、第十章 生物碱类药物的分析,一类存在于生物体内的含氮有机化合物，绝大部分存在于植物体内，少数存在于动物体内。,生物碱,第一节 结构与性质,一、苯烃胺类 本类药物的结构特征为N在侧链上，为脂肪胺。性质：1.碱性较强，与酸易成盐：盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱 2.旋光性：盐酸麻黄碱，左旋；盐酸伪麻黄碱，右旋 3.紫外吸收：芳环 4.氨基醇结构：双缩脲反应,盐酸麻黄碱,盐酸伪麻黄碱,二、托烷类,硫酸阿托品,氢溴酸山莨菪碱,性质：1.水解性：水解产生莨菪酸和莨菪碱 2.碱性较强，与酸易成盐：硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱 3.旋光性，氢溴酸山莨菪碱为左旋体，阿托品为外消旋体,三 、 喹啉类,硫酸奎宁,性质：
2、1.碱性 组成：喹啉环+喹核碱 喹核碱碱性较强，与硫酸成盐 2.旋光性 奎宁左旋体，奎尼丁右旋体,盐酸吗啡,磷酸可待因,四 异喹啉类,性质1.吗啡结构：酚羟基显酸性，叔胺基团显碱性 2.吗啡溶解性：既可溶于氢氧化钠溶液又可溶于盐酸溶液 3.可待因：无酚羟基，不能溶于氢氧化钠溶液,硝酸士的宁,利血平,1,1,2,2,五、吲哚类,性质：1碱性：均含有两个碱性氮原子，士的宁N1碱性较强，与硝酸成盐；利血平N1空间位阻，碱性较弱，不能成盐。 2水解性：利血平含有酯键，弱碱或受热条件下易水解 3还原性和荧光性：利血平在光照和氧气存在下极易被氧化，氧化产物为黄色，并带有黄绿色荧光，进一步氧化，显蓝色荧光,
3、咖啡因,茶碱,性质： 几乎不显碱性 茶碱显酸性，可溶于碱性水溶液,六、黄嘌呤类,第二节 鉴别试验,一、一般鉴别试验 （一）沉淀反应： 生物碱类药物在酸性水溶液中，可与生物碱沉淀剂反应，生成难溶于水的物质 常用的生物碱沉淀试剂为： K2HgI4、KBiI4、I2KI、二氯化汞、磷钼酸、硅钨酸等。,（二）显色反应,生物碱+生物碱显色试剂=呈现不同颜色 显色试剂：浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、甲醛硫酸等 磷酸可待因的鉴别： 取本品1mg，置白瓷板上，加含亚硒酸2.5mg的硫酸0.5ml，立即显绿色，渐变蓝色。,（三）熔点测定法,例：磷酸可待因（10版药典） 加入20NaOH溶液至白色沉淀出现，用玻璃棒摩擦
4、器壁使沉淀完全，滤过；沉淀用水洗净，在105干燥1小时 ，依法测定，熔点为154-158。,（四）紫外吸收光谱法 （五）红外吸收光谱法 （六）薄层色谱法,（1）双缩脲反应 芳环侧链氨基醇结构的特征反应 盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱,蓝紫色,二、特征鉴别试验*,（2）Vitali反应,托烷类生物碱的特征反应 莨菪酸结构 硫酸阿托品，氢溴酸东莨菪碱 硫酸阿托品,加发烟硝酸5滴,水浴蒸干,放冷,加乙醇23滴润湿,加固体KOH一粒,显深紫色,（3）绿奎宁反应,C6位含氧喹啉类生物碱 在此生物碱的微酸水溶液中，加微过量溴水或者氯水，再加氨溶液，应呈翠绿色。,硫酸奎宁,溴水或者氯水,氨试液,翠绿色,（4）紫脲
5、酸铵反应,黄嘌呤类生物碱,（五）与芳醛缩合显色反应,吲哚类生物碱的特征反应 与香草醛缩合：利血平+香草醛=玫瑰红色 与对二甲氨基苯甲醛缩合： 取利血平约0.5mg，加对二甲氨基苯甲醛5mg，冰醋酸0.2ml与硫酸0.2ml，混匀，即显绿色，再加冰醋酸1ml，转变为红色。,（六）吗啡生物碱的特征反应,1、甲醛-硫酸反应 Marquis反应,含酚羟基的异喹啉生物碱的特征反应：盐酸吗啡,2、还原反应 盐酸吗啡+稀铁氰化钾=伪吗啡+亚铁氰化钾 亚铁氰化钾+三氯化铁=亚铁氰化铁，显蓝色,第三节 特殊杂质检查 一、利用药物和杂质在物理性质上的差异,硫酸奎宁中“氯仿- 乙醇中不溶物”的检查,硫酸阿托品中“莨
6、菪 碱”的检查*,利血平中“氧化产物” 的检查,利用旋光度的差异,利用溶解行为的差异,利用对光选择性吸收的差异,二、利用药物和杂质在化学性质上的差异,（一）酸碱性的差异 硫酸阿托品中其他生物碱的检查 原理：其他生物碱的碱性比阿托品弱 方法：取本品0.25g，加盐酸溶液1ml溶解，用水稀释成15ml，分取5ml，加氨试液2ml，不得立即发生浑浊。,二、利用药物和杂质在化学性质上的差异 1、盐酸吗啡中阿扑吗啡的检查,本品,2、磷酸可待因中吗啡的检查 原理：吗啡与亚硝酸钠反应产物在氨碱性条件下显黄棕色 方法：取本品0.1g，加盐酸溶液使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15分钟，加氨试液3ml
7、如显色，与吗啡标准液5.0ml，用同一方法制成的对照液比较，不得更深。,三、色谱法,硫酸奎宁中其它金鸡纳碱的检查（p147自学） 检查方法：供试品溶液自身稀释对照法 有关物质的检查 方法：HPLC,非水溶液滴定法 提取酸碱滴定法 酸性染料比色法 置换酸碱滴定法 紫外分光光度法,一、非水滴定法（非水碱量法）,(一)原理 指示剂或电位法确定终点 置换反应：强酸置换弱酸,一、非水滴定法（非水碱量法）,(二)测定方法 取供试品，加冰醋酸10-30ml溶解。 供试品若为氢卤酸盐，应再加5%醋酸汞的冰醋酸溶液3-5ml 加指示剂，用高氯酸滴定液滴定,一、非水滴定法（非水碱量法）,(三)注意事项 除水：加入
8、酸酐，吸收冰醋酸及高氯酸中的水分 温度：滴定液浓度受温度影响 滴定终点：电位法或指示剂法,一、非水滴定法（非水碱量法）,(四)适用范围 Kb 10 -8 pKb8-10时，宜选冰醋酸作为溶剂； pKb为10-12时，宜选冰醋酸与醋酐的混合液作为溶剂； pKb 为12以上时，选用醋酐作为溶剂。,一般均预先在溶液中加入Hg(Ac)2 的冰醋酸溶液，以消除氢卤酸对滴定的干扰。,理论量13倍,1. 氢卤酸盐的测定,汞污染,取本品约 0.15g，精密称定为0.1511g，加冰醋酸 10ml，加热溶解后，加醋酸汞试液 4ml 与结晶紫指示液 1滴，用高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）滴定至溶液显翠绿色
9、，消耗高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）8.25ml，并将滴定的结果用空白试验校正，空白消耗高氯酸滴定液（0.1002mo1/L）0.81ml 。每 1ml 高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于 20.17mg 的C10H15NO HCl。求含量,盐酸麻黄碱含量测定 ChP(2010),生物碱的硫酸盐，在冰醋酸介质中只能被滴定至生物碱的硫酸氢盐。,2. 硫酸盐的测定,（1）硫酸阿托品 取硫酸阿托品约0.5g，精密称定，加冰醋酸与酸酐各10ml溶解后，加结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液滴定，至溶液显纯蓝色。 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为11,（2）硫酸奎宁 取硫酸奎宁约0.2g，
10、精密称定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液1-2滴，用高氯酸滴定液滴定至溶液显蓝绿色。 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为13,（3）硫酸奎宁片 取硫酸奎宁片10片，除去糖衣后，精密称定，研细，精密称取适量，置分液漏斗中，加氯化钠0.5g与0.1mol/L氢氧化钠溶液10ml，混匀，加氯仿50ml，振摇10分钟，静止，分取三氯甲烷液，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，加酸酐5ml与二甲基黄指示液2滴，用高氯酸滴定液滴定至终点。 HClO4直接滴定时，反应摩尔比为14,因HNO3具有氧化性，可使指示剂变色，一般电位法指示终点。,3. 硝酸盐的测定,无影响，直接
11、测定。如磷酸可待因。,4. 磷酸盐及其有机酸盐的测定,（一）原理,二、提取酸碱滴定法,适用于碱性比较强的的药物分析。(pKb=6-9),（二）操作方法,取供试品溶于水或稀矿酸中，加入适当的碱性试剂使生物碱游离，再用合适的有机溶剂分次振摇提取，合并提取液，用水洗涤除去混存的碱性试剂和水溶性杂质，再用无水硫酸钠或植物胶脱水，滤过，即得游离生物碱的有机溶剂提取液,磷酸可待因糖浆的含量测定,用内容量移液管，精密量取本品10ml，以水洗出移液管内的附着液，置分液漏斗中，加氨试液使成碱性，用氯仿振摇提取至少4次，第一次25ml，以后每次各15ml，至可待因提尽为止，每次得到的氯仿液均用同一份水10ml 洗
12、涤，洗液用氯仿5ml 振摇提取，合并氯仿液，置水浴上蒸干，精密加硫酸滴定液(0.01mol/L) 25ml，加热溶解，放冷，加甲基红指示液2 滴，用氢氧化钠滴定液(0.02mol/L)滴定。每1ml 的硫酸滴定液(0.01mol/L)相当于84.88mg的C18H21NO3H3PO43/2H2O。,碱化试剂 最常用氨试液* 优点：使大部分生物碱游离，不会和生物碱发生反应，不易乳化，易挥发，易除去，无干扰。,（三）注意事项,2. 提取溶剂 （1）提取溶剂选择的原则 对生物碱溶解度大，而对其他共存物溶解度尽可能小；与生物碱及碱化试剂不起任何反应。 （2）常用的提取溶剂 最常用氯仿*,3.滴定指示剂
13、,要求：变色范围在酸性区域的指示剂；被滴定生物碱的化学计量点，应在选用的指示剂变色范围内。,注：甲基红：4.2-6.3，溴酚蓝：3.0-4.6,三、酸性染料比色法,生物碱与某些酸性染料，在一定PH条件下可定量结合显色，然后用比色法测定含量。 特点：灵敏度高、方便，并且具有一定专属性和准确性。适用于含量较低的样品测定。*,（一）基本原理,在适当的介质中，,BH+ .In- （水相）,B+H+ BH+,HIn H+In-,BH+ .In- （有机相）,+,供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于硫酸阿托品2.5mg ），置50ml量瓶中，加水振摇使硫酸阿托品溶解并稀释
14、至刻度，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。 对照品溶液的制备：另取硫酸阿托品对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。,例：硫酸阿托品片（05版药典）,测试方法： 精密量取供试品溶液与对照品溶液各2ml，分别置预先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液2.0ml，振摇提取2 分钟后，静置使分层，分取澄清的三氯甲烷液，照紫外-可见分光光度法（附录A），在420nm的波长处分别测定吸光度，计算，并将结果与1.027 相乘，即得供试量中含有(C17H23NO3)2H2SO4H2O的
15、重量。,(C17H23NO3)2H2SO4H2O标示量%=,Ax/AR CR 50 1.027 平均片重,W标示量,100%,1.027：质量换算因数，指1g无水硫酸阿托品相当于硫酸阿托品的量。由下式求得：,(C17H23NO3)2H2SO4H2O的分子量,(C17H23NO3)2H2SO4的分子量,=1.027,（三）影响测定结果的因素,关键：酸性染料与有机碱能否定量的形成离子对，并完全被有机溶剂提取。* 1.水相最佳PH值的选择： 使生物碱均形成阳离子，且酸性染料电离足够阴离子。,2.酸性染料,种类的要求：与生物碱定量结合；生成的离子对在有机相中溶解度较大，而染料自身在有机相中不溶或很少溶解；生成的离子对有较高吸光度。 常用：溴麝香草酚蓝、甲基橙、溴甲酚绿等,3.有机溶剂的选择,要求：对离子对的提取率高；不能或极少与水互溶。 常用三氯甲烷、二氯甲烷等。 4.水分的存在 完全无水,5.有色杂质的干扰和排除,为了防止有色杂质的干扰。可对酸性染料进行处理：用有机溶剂提取，除去有色杂质。,四、置换酸碱滴定法 五、紫外分光光度法,
