生物化学与检验8课件

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1、1,第八章 体液蛋白质检验,人类白蛋白分子,2,本章内容概要：,第二节 体液蛋白质测定,第一节 概述,3,1、掌握血浆蛋白质的组成、功能及分类；个别血浆蛋白质（前 白蛋白、白蛋白）的来源和生理功能；血清总蛋白和白蛋白的 测定方法和原理。,2、熟悉急性时相反应蛋白的概念和种类；血清球蛋白和纤维蛋 白原的测定方法,3、了解其他蛋白质的来源和生理功能；尿液蛋白和脑脊液蛋白 的检测 。,本章教学要求：,4,第一节 概 述,机体蛋白质：,体液蛋白质的检测：,机体主要的 生物大分子,含量：人体固体成分的45%,种类：10万，30005000种/单细胞,功能：生长，代谢、血凝、运动、免疫、信息传递等,疾病发

2、生,体液蛋白质异常,5,要判断异常,首先要清楚正常的血浆蛋白质组成，功能及分类及特点,一、血浆蛋白质的组成、功能及分类,组成：,种类：1000种 500种 200种 含量：g mg g 来源：肝脏是蛋白质主要的加工厂,6,功能：,营养作用，修补组织蛋白; 维持血浆胶体渗透压：白蛋白维持75%80%的血浆渗透压； 作为PH缓冲系统的一部分：酸性或碱性蛋白质； 作为激素、维生素、脂类、代谢产物、离子、药物等的载体； 体液免疫防御系统：作为免疫球蛋白与补体等免疫分子； 催化作用：酶的本质； 代谢调控作用；作为底物，酶或中间产物抑制或激活组织蛋白酶； 参与凝血与纤维蛋白溶解；：除因子外均可,7,分类：

3、,依据来源、分离方法和生理功能,来源,肝生成：绝大多数血浆蛋白质,其他组织细胞生成：免疫球蛋白和蛋白类激素,8,分离方法,盐析法：白蛋白/球蛋白（pH7.0半饱和的硫酸铵溶液）,电泳法：,醋酸纤维素薄膜电泳：6种,琼脂糖凝胶电泳：13种,聚丙烯酰胺凝胶电泳：30种,SDS聚丙烯酰胺凝胶等电双向电泳：300种,分辨率增高,-,-,-,+,纤维蛋白原,醋酸纤维素薄膜,9,即时可用的蛋白质电泳标准,10,功能分类:,11,二、个别血浆蛋白质,结构： MW=54000，四个相同亚基构成的四聚体。 理化性质：p4.7，肝细胞合成，半寿期12 小时。 测定方法：免疫比浊法免疫扩散技术。,（一）前白蛋白（P

4、A） 急性时相反应蛋白,12,功能：营养指标，载体功能（甲状腺素维生素）。 临床意义： 敏感性高的指标； 降低：营养不良，肝功不全， 急性炎症，恶性肿瘤， 肝硬化及肾炎时。 参考值： 200400mg/L 。,13,结构：585个aa残基构成的单链多肽， MW=66458，含17个二硫键。 理化性质：pI=45.8，肝细胞合成但不储存，半衰期为15-19 天，占总蛋白的40%60%，p7.4时带负电。 测定方法：色素结合法:溴甲酚绿（BCG），溴甲酚紫（BCP）,盐析等。,（二）白蛋白（ALB） 急性时相反应蛋白,14,功能：营养作用，载体功能（高亲和力），维持血浆渗透压和正常p值。 临床意义

5、：合成受食物影响，敏感性较低。 降低:在营养不良，肝功不全，急慢性肝疾病时; 增高:少见,假性升高。 参考值：35-50 g/,15,结构：394个aa残基构成的单链多肽，含1012%的糖MW=5.5 万。 理化性质：pI值为4.8，占1-球蛋白区带显色的90。 测定方法：免疫化学法，电泳（酸性凝胶电泳或等电聚焦电泳），利用蛋白酶抑制能力测定等。,（三）1-抗胰蛋白酶（AAT） 急性时相反应蛋白,16,功能：蛋白酶抑制物（具有90的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，弹性蛋白酶，但此抑制作用有明显的p依赖性。 临床意义： 降低：血浆AAT仅见于胎儿呼吸迫综合症。 升高：炎症、术后，某些激素治疗后。

6、参考值： 0.831.99g/L,17,结构：181个aa残基构成的单链多肽， MW=4万，含45%的糖，其中唾液酸占11%12%。 理化性质：pI 值2.73.5，肝合成，脓毒症时粒细胞和单核细胞及某些肿瘤组织也可合成。 位于1-球蛋白区带。 测定方法：免疫化学法（扩散,浊度）,化学法（间接法），ELISA法等,（四）1-酸性糖蛋白（AAG） 急性时相反应蛋白,18,功能：与免疫防御功能有关，机制不详；抑制血小板凝集影响胶原纤维形成；参与脂类运输。 临床意义： 升高：急性炎症，组织损伤，风湿，肿瘤，AMI ，溃结时； 降低：营养不良降低, 严重肝损伤和雌激素作用。 参考值：.252.0g/L

7、 。,19,结构：590个aa残基构成的单链多肽， MW=6.5万万，含4%的糖。 理化性质：pI 值.7-.8，在白蛋白和1-球蛋白之间。胎儿肝卵黄囊合成，成人量微，升高由于肿瘤细胞合成。 测定方法：免疫化学法（扩散,火箭电泳）,ELISA等,（五）甲胎蛋白(AFP),20,功能：胎儿血浆主要蛋白质，调节肝细胞生长和脑细胞发育；抑制细胞和体液的免疫反应；维持正常妊娠，防止母婴排斥。 临床意义：胎儿产前监测（羊水或母血） 增高：原发性肝癌患者诊断和鉴别（80%原发增高）， 其他癌症也可见增高。 参考值：20-100g/L(成人) 5g/L(新生儿),21,结构： 两对肽链形成四聚体，有变异体。

8、 理化性质：肝合成， pI 值为4.1，电泳位a2 -球蛋白区带 测定方法：电泳法，免疫化学法（扩散,浊度）,化学法等,（六）结合珠蛋白(Hp) 急性时相反应蛋白,22,功能： 与红细胞中释出自由Hb 结合,防止Hb 从尿中丢失保存铁, 急性溶血后一周再生恢复。 高效的过氧化物酶。 需铁细菌的天然抑菌剂。 临床意义： 升高：急性时相反应； 降低：血管内溶血时；雌激素作用。 参考值：0.5-2.2 g/L,23,结构： MW=6280 万,分子量最大，由四个相同的亚基组成，含糖量约。 理化性质：肝细胞与单核吞噬细胞系统中合成，半寿期5 天。 测定方法：免疫化学等,（七）2-巨球蛋白(AMG),2

9、4,功能：与多种分子和离子结合，影响蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制剂具有选择性保护某些酶的作用）。 临床意义：婴幼儿及儿童比成人高； 升高：雌激素，低蛋白血症可使其含量升高； 降低：胰腺炎及前列腺癌时。 参考值：1.31-2.93g/L,25,结构： MW=12-16 万, 1046个aa残基构成的单链多肽，含糖约，每分子铜蓝蛋白可结合个铜原子。 理化性质：肝合成,巨噬细胞和淋巴细胞合成少量；pI 值为4.4， 具遗传基因多态性。 测定方法：免疫化学（扩散或比浊）等,（八）铜蓝蛋白(CER) 急性时相反应蛋白,26,功能：具氧化酶活性且起抗氧化剂作用，铜的无毒代谢库 临床意义： 增加感染,创

10、伤,肿瘤; 降低-营养不良，严重肝病及肾综;协助诊断Wilson 病 参考值：0.21-0.53g/L,27,结构： MW=7.7 万,单链糖蛋白，含糖约。 理化性质：肝细胞合成， pI 值为5.5-5.9,半寿期7 天，可逆结合多价离子如Fe,Cu,Zn,Co 等，一分子TRF 可结合两个三价铁。 测定方法：免疫扩散法，放免法和免疫比浊法等。,（九）转铁蛋白(TRF) 急性时相反应蛋白,28,功能：运输铁。 临床意义：血TRF 浓度受铁供应调节，缺铁TRF 升，铁治疗后恢复。可用于贫血的诊断和对治疗的监测。 降低:急性时相反应、慢性肝病、营养不良及蛋白丢失时； 升高：妊娠或雌激素会使其降低;

11、缺铁性低色素贫血。 参考值： 2.5-4.3 g/L (成人) 1.30-2.75 g/L (新生儿),29,结构： MW=11800， 100个aa残基构成的单链多肽，分子中含一对二硫键，不含糖。 理化性质： pI 值为5.7，淋巴细胞合成，存在细胞表面，特别是淋巴和肿瘤细胞。释放入血循环。半衰期107 分钟，几乎由肾小管回收。 测定方法：放射免疫化学等。,（十）2 微球蛋白(BMG),30,功能：分子量小，可自由通过肾小球滤过膜，在肾小管几乎全部重吸收，可监测肾小管功能；是HLA链的轻链部分。 临床意义：增高：肾功能衰竭，炎症及肿瘤时。 参考值：1.0 2.5 mg/L （血浆）,31,结

12、构： MW11.5-14 万，分子含个相同的亚基，亚基间靠非共价键连接成圆盘状多聚体。 理化性质：肝合成， pI 值为6.2，电泳位于 r 区带。 测定方法：半定量沉淀法（早），免疫化学法。,（十一）C-反应蛋白质(CRP) 急性时相反应蛋白,32,功能：结合多糖，磷脂和核酸；激活补体，抗凝。 临床意义：第一个认定的急性时相反应蛋白,是急性时相反应的一个敏感指标，在、创伤、感染、外科手术时含量迅速升高，达到正常的2000倍。 参考值： 8.0mg/L （血浆）,33,三、疾病时的血浆蛋白质,急性时相反应蛋白：在急性炎症或某些组织损伤时，有些血浆蛋白质含量会增高，有些会降低，这种现象称为急性时相

13、反应。而这些血浆蛋白质被称为急性时相反应蛋白。,（一）炎症、创伤,前述除了甲胎蛋白、2 微球蛋白和 2-巨球蛋白以外再加上纤维蛋白原的九种蛋白质,34,急性时相反应蛋白分类：,升高：其他种蛋白质。,降低：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白,35,急性时相反应机制： 当机体受到损伤或炎症时释放小分子蛋白质导致肝细胞 中上述蛋白质的合成增加或减少。,急性时相反应的应用： 急性时相反应时,血浆蛋白质的变化和创伤的时间进程有关，可用于鉴别急性、亚急性和慢性病理状态。,36,37,（二）肝脏疾病：,（三）肾脏疾病：,肾病早期,严重肾脏,选择性蛋白质丢失,非选择性蛋白质丢失,（四）风湿病：免疫球蛋白，1-酸性糖蛋

14、白，结合珠蛋白及升高,（五）遗传性缺陷：多由于编码相应蛋白质的基因发生突变或缺失。,非典型的急性时相反应，,急性肝炎,慢性肝硬化 见表8-3,38,39,第二节 体液蛋白质测定,总蛋白测定,个别蛋白质的测定,蛋白分离测定技术,发展趋势:,测定体液标本:,血浆：普遍,尿液，脑脊液和胸腹水等：有选择性的组织病变检查,40,免疫化学法特异定量个别蛋白质,体液蛋白质的测定方法概括：,常规：免疫浊度法、免疫扩散法，免疫电泳法， 微量：放射免疫测定（RIA），酶免疫测定法（ELA/ELISA）,41,电泳测定：,定量化学测定TPr，Alb,电泳 组成图谱 半定量 定量,染料结合法，UV法，折光法等,42,

15、一、血清总蛋白测定,假设：,、 纯多肽链，含氮量平均为16 % 、各种蛋白质与化学试剂反应性一致，仅为相对定量,43,测定依据：蛋白质测定一般利用蛋白质以下的结构或性质,1、元素组成测定：含N稳定； 2、重复的肽链结构：具有多个肽键； 3、酪氨酸和色氨酸与Folin-酚试剂反应显色或UV 吸收； 4、与色素结合的能力：与染料以离子键或共价键连接； 5、沉淀后借浊度测定：光度计测定； 6、光折射测定：折射仪测定。,44,方法：,1.凯氏定氮法参考方法 2.双缩脲法( 推荐) 3.酚试剂法 4.散射比浊法 5.染料结合法 6. UV 法 .折光测定法,45,1.凯氏定氮法参考标准方法(0.05mg N 0.3g pro),消化 用浓硫酸将蛋白质消化为硫酸铵；（耗时） 蒸馏 用碱性溶液碱化消化液并蒸馏挥发； 吸收 用酸性溶液（硼酸）吸收气态氨（使H+ ） 滴定 用已标定的无机酸滴（使H+ 恢复），计算总氮量 定蛋白（总氮量-非蛋白氮）6.25=蛋白含量,纳氏试剂：碘化汞和碘化钾的碱性溶液与氨反应生成淡黄棕色胶态化合物，其色度与氨氮含 量成正比。,原理：,46,评价：,优点：准确度高，精密度高，灵敏度高，是公认的参考方法。 缺点：操作复杂，费时，不适合常规检测，血清各蛋白含氮量会有所变化尤其是疾病时。,应用：标准蛋白的标定及校正其它常规方法,47,2.双缩脲法,原理：,蛋白质中的肽键（