微生物实验室质量控制2009课件

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1、卫生微生物实验室 的质量保证与质量控制,二00九年四月,微生物实验室,卫生微生物实验室 病原微生物实验室 临床微生物实验室 分子微生物实验室,微生物检测的定义,在特定的环境下(无菌)，采用适当的方法对样品中目标微生物进行增殖和培养，并对以放大后的目标微生物进行感官、生理、生化等到方面的特性分析和判定，以确定样品中目标微生物的量或质的特性的过程。,微生物检测涉及的要素,检验人员 检测经验的判断能力 检测设备 保证目标菌种的生长的外部环境 菌种试剂 保证目标菌种的生长的内部环境 检测方法 选择适宜目标菌种检测的方法 测试环境 保证操作过程不受外界干扰（保护样品和人员）,检验人员,检验人员需经过微生

2、物专业基础知识和无菌技术的培训后,方可上岗操作,并应了解本专业国内外的最新文献资料、参加专业培训，不断更新专业知识和提高检验质量，从实践中不断提高实验室质量管理规范，以保证检验工作科学、规范、优质、高效，确保数据准确和报告公正，实现实验室的标准化、规范化和管理科学化。,质量保证和质量控制的目的,质量保证 为使人们能确信某产品(这里指培养基)能满足规定的质量要求所必须的执行的有计划的和系统的活动。 质量控制 为达到质量要求所采取的作业技术和活动。 为监测整个检测的过程，排除在具体的技术操作中导致不满意的原因，以取得可靠的检测结果。,微生物实验室设施,微生物检验必须在无菌环境中进行，保持样品的原污

3、染状态，防止二次污染。在未普遍采用现代化的无菌隔离器技术之前，无菌室仍然是最常用的无菌环境之一，无菌室及配套的相关建筑设计应充分考虑其合理布局，操作安全，使用方便等条件。,微生物实验室布局,无菌室应远离交通干道、厕所及污染区，最好在二楼以上，应选上、下水道及其他安装适宜的位置。灭菌物品存放和传输、培养间、结果观察、阳性对照实验室和办公室等，要集中，减少污染，便于管理和使用。,微生物实验室布局,无菌操作间应具有单向流空气净化设备，无菌操作间面积不小于5m2,高度不超过2.4m,温度控制在1826，相对湿度40%60%。新鲜空气经高效层流过滤后进入操作间。洁净度级别为局部百级、周围环境万级。应保持

4、对环境形成正压，不同级别的洁净室之间的压差不低于4.9Pa，洁净区对与其相通的非洁净区的压差不低于10Pa。无菌室洁净度要定期检查沉降菌或浮游菌及悬浮粒子。,微生物实验室布局,无菌室内应六面光滑、平整、无缝隙、不起灰、耐腐蚀、易清洗，墙与地面、台面、墙壁之间连接处应呈凹弧形，不留死角，室内不安装上、下水道，进出口应为拉门，出入操作间和缓冲间的门不应直对。室内的电源总控制应设在室外。,微生物实验室布局,无菌室内采光的面积要大，照明灯应嵌装在天花板内，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯，缓冲间和操作间匀应设置紫外灯（22.5w/m3)，距实验台面高度不超过1m。,微生物实验室使用,无菌检查、

5、微生物限度检查、微生物效价检定应有专用的无菌室，不可混用，以免彼此干扰或交叉污染。 阳性对照实验以及具有危险性的毒菌、毒素等检验，如破伤风梭菌、黄曲霉毒素等检验，必须有单独使用的无菌间或生物安全柜，以便控制，防止传播。,微生物实验室使用,无菌室一般应设有一更、二更、缓冲间和无菌操作间。无菌室内应有人净、物净设施，所有实验器材应经过消毒处理后，通过物流间无菌传递系统进入无菌室，执行人流和物流分开。,微生物实验室的分级,根据中华人民共和国国家标准GB19489-2004实验室生物安全通用要求把所有操作的微生物因子的危害程度和采取的防护措施，将微生物实验室所处理样本的生物危险性程度将微生物实验室分为

6、四级： 级对生物安全隔离要求最低，级最高。以BSL-1、 BSL-2、 BSL-3、 BSL-4表示微生物实验室的相应生物安全防护水平。,微生物实验室的分级,级生物安全防护实验室： 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对健康成年人巳知无致病作用的微生物，如用于教学的普通微生物实验室等。 级生物安全防护实验室： 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人或环境具有中等潜在危害的微生物。,微生物实验室的分级,级生物安全防护实验室： 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于主要通过呼吸途径使人传染上严重的甚至是致死疾病的致病微生物及其病毒，通常巳有预防传染的疫苗。艾滋病病毒的

7、研究（血清学实验除外）应在级生物安全防护实验室中进行。,微生物实验室的分级,级生物安全防护实验室： 实验室结构和设施、安全操作规程、安全设备适用于对人体具有高度的危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明，目前尚无有效的疫苗或治疗方法的致病微生物及毒素。与上述情况类似的不明微生物，也必须在级生物安全防护实验室中进行。待有充分数据后再决定此种微生物或毒素应在级还是在较低级别的实验室中处理。,仪器设备,所用的各种器械及设备应按计量要求定期检测，全部设备应满足检测项目的要求，做到设备档案齐全，每台（件）设备需使用标签标识，需检定或校准的设备表明状态和有效期限，仪器使用作业指导书，手册和使用记录，环境监

8、测记录、维修记录等，以保证其正常使用。,仪器设备,无菌实验室配备的紫外消毒装置，使用前后进行照射消毒，要定期进行紫外线强度和空气质量监测，高效过滤器应定期进行风速监测，根据检测的情况，必要时予以更换处理。生物安全实验室，要正常进行管理维护和工作人员隔离防护。 高压蒸汽灭菌器除定期校验表压和温度外，应定期用生物指示剂对灭菌效果进行验证。,仪器设备,其他微生物学检验所用的仪器，如培养箱、电热恒温水浴箱、电热恒温干燥箱、酸度计、电子天平、微量加样器、光学光度计、冰箱、低温冰箱、光学显微镜、生物安柜等，应严格按规定进行检查。 培养箱内保持清洁，要定期进行细菌和霉菌的检查。,实验室维护,工作台面： 测定

9、样品前或开始工作前，必须用清洁剂（消毒剂）彻底消洁台面。 工作结束（样品制备、接种、转移）或当天工作结束后，台面要再清洁消毒。 处理致病菌性物质时，用75%的乙醇，7090%的异丙醇或次氯酸盐溶液消毒。,实验室维护,生物危害性物质： 所有物质用后立即置于厂商建议浓度的消毒液中（如5%的苯酚溶液），或直接扔到危害袋中。所有物质在121持续高压灭菌至少30分钟。 灭菌后按规定丢弃所有具器。遵守废弃物处理规定。,培养基的质量控制标准,培养基分类上属于体外诊断试剂。其质量控制的标准有： 中华人民共和国质量监督检验检疫总局商品化微生物培养基的质量保证SNCCLS-1996 中华人民共和国卫生部商业性微生

10、物养基质量检验规程WS/T232-2002(所谓商业性就是即买即用的一次性培养基) 中华人民共和国医药行业标准 YY/T 0577-2005,培养基的质量控制标准,中华人民共和国质量监督检验检疫总局培养基制备指南 第1部分实验室培养基制备和质量保证通则SN/T1538.1-2005 中华人民共和国药典2005年版 中国药品标准检验操作规范2005年版 中国合格评定国家认可委员会（CNAS-CL09:2006)检测和校准实验室能力认可准则在微生物领域的应用说明,培养基的质量控制标准,中华人民共和国质量监督检验检疫总局培养基制备指南 第2部分培养基性能测试实用指南SN/T1538.2-2007 中

11、华人民共和国食品药品监督管理局 国食药监械2008535号 培养基类产品分类界定等 综合上述的质量控制标准，下面主要以SN/T 1538的标准为主要内容简述一下培养基的质量保证与质量控制。,培养基制备指南:SN/T1538,SN/T1538.1-2005(2005-7-1实施) 第1部分：实验室培养基制备质量保证通则 提出要求并制定系统的控制计划 属于质量保证的范围 SN/T1538.2-2007(2007-10-16实施) 第2部分：培养基性能测试实用指南 为保证提出的质量要求所需要采取的技术操作 属于质量控制的内容,SN/T1538标准制定情况,本部分为SN/T1538的第1部分对应于：

12、ISO/TS11133-1:食品和动物饲料培养基制备指南-培养基制备指南-实验室培养基制备质量保证通则(2000英文版)与其的一致性程度 (2005-07-01实施） 本部分为SN/T1538的第2部分对应于： ISO/TS11133-2:2003食品和动物饲料培养基制备指南与其的一致性程度 (2007-10-16实施）,SN/T1538 标准的作用,为培养基质量保证和质量控制标准体系，有利于对培养基的标准化管理，提高实验室检测质量。 第1部分为质量保证和培养基质量基本要求。 第2部分为质量控制技术。 为中国实验室国家认可委员会（CNAS）合格评定微生物实验室认证工作提供参考依据。,培养基的类

13、型,各别成分培养基（自制培养基）： 实验室用不同的化学试剂或生物工程试剂按照一定的配方、比例配置而成的培养基。 即用型培养基（商业培养基）： 以即用形式置于容器中（例如：平皿、试管、安瓿或其它容器）供应的培养基。 脱水合成培养基（干粉培养基）： 不立即使用的干粉形式的（如：粉末、颗粒、冻干等形式）培养基。,培养基的分类,培养基是指以液体、半固体或固体形式，包含天然或合成成分，用于促进微生物的繁殖或保持其活力的物质组成。 培养基分类 按状态分类：液体、固体、半固体培养基。 按用途分类 运送培养基：保护和维持微生物活性，不含有使微生物增殖的物质。,培养基的分类,保存培养基；在一定期限内保护和维持微

14、生物活力，或使微生物在长期保存后容易复苏（如卵黄培养基）。 复苏培养基：能够使受损或应激的微生物修复、使微生物恢复正常生长能力，但不促进微生物繁殖的培养基（如缓冲蛋白胨水）。 增菌培养基（选择性：如胆盐乳糖增菌液、非选择性：如营养肉汤）。,培养基的分类,分离培养基 选择性分离培养基：支持特定微生物的生长而抑制其他微生物生长（如胆盐硫乳琼脂） 非选择性分离培养基：对微生物没有选择性的抑制作用（如营养琼脂） 鉴别培养基：能够进行一项或多项微生物生理学或生化特性鉴定试验（如三糖铁琼脂） 鉴定培养基：能够产生一个特定的鉴定反应而不需要做进一步确认实验的培养基（如MUG培养基）,培养基的质量保证,生产企

15、业提供的材料： 培养基名称、各种成分和增补剂名称、产品批号。 培养基使用前的PH值。 储藏条件和有效期。 技术数据清单。 质控证书（性能评价和所用的测试菌种）。 必要的安全及危害数据。,培养基的质量保证,实验室验收： 保存有效的培养基目录清单。 包装情况和完整性。 培养基的名称和批号。 接收日期、有效期。 首次开封日期。 内容物的感官检查(粉末的流动性、均匀性、结块情况和颜色变化)。,培养基的储存,例行常规检查（干粉培养基）： 容器密封性复查；首次开封日期；内容物感官检查。 使用前检查（商业性培养基）： 颜色是否发生变化？是否蒸发/脱水？ 是否有微生物污染？ 严格按照供应商提供的储藏条件、有效

16、期和使用方法进行培养基的保存和使用。 有计划购买，先购先用。,培养基的储存,成品培养基（系指配好待用的培养基,下同） 已分装好的培养基：避光、冷藏。 最终成分在使用前加入的培养基，冰箱保存不超过三个月，室温保存不超过一个月。 不稳定的选择性添加成分应在培养基制备的当天使用。 观察任意颜色变化，记录培养基蒸发或微生物生长情况。,培养基的实验室制备,使用商品化的脱水合成培养基时，应严格按照厂商提供的使用说明配置，如重量/体积、PH值、制备的数据、灭菌条件、操作步骤。 使用独立成分制备培养基时，按配方准确配置并记录配置步骤。,培养基的实验室制备,水：要求使用蒸馏水或相同质量的水，不含有抑制或影响微生物生长的物质。 称量和复水：防止培养基结块。 溶解和分装：适当加热重复搅拌。 pH值的测定和调整：使用 pH计。 1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L的盐酸溶液进行pH值的调整。,培养基的实验室制备,分装 灭菌 湿热灭菌：按使用说明规定进行 ，监控高压灭菌过程，保证灭菌温度，避免过度加热。 过滤除菌：真空负压或正压条件下进行，