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1、诊断病理学基本知识,病理学的研究对象,（一）人体病理学研究对象 尸体解剖（Autopsy） 活体组织检查（Biopsy） 细胞学检查（Cytology） （二）实验病理学研究对象 动物实验（Animal Experiment） 组织和细胞培养（Tissue and Cell Culture）,诊断病理学的概念 临床实际工作中，许多病例的疾病诊断有赖于对病变器官或组织的病理检查，这种检查称为活体组织检查(biopsy)。病理学关于这方面的实践和理论范畴称诊断病理学或外科病理学。,一、病理诊断的重要性与局限性,（一）重要性 1建立在全面系统病理检查基础上的病理诊断是疾病诊断的“金标准”； 2有计划
2、的定期活检有助于了解疾病的动 态变化和疗效判断； 3系统、完整的病理资料有助于认识新的 疾病或疾病类型。,（二）局限性 1形态学的局限性 只能对有形态学改变的疾病，尤其是对 有特征改变的疾病作出诊断。对无明显 形态学改变的功能性或代谢性疾病，病 理学检查不能确诊；,同病异形和同形异病： 同一疾病在不同病例常呈不同形态。 不同疾病常呈相同或极相似形态。 疾病形态的复杂多变导致病理诊断的复杂性。 鉴别诊断有赖于临床资料和病理鉴别诊断技术。 2小块活检组织的“代表性”有限。 3病理医生的主观性 病理诊断受病理医师的经验和思维方式影响，带主观性和经验性。,二、病理标本的采集和送检,（一）活检小标本 1
3、淋巴结活检,当一组淋巴结肿大时，各个淋巴结的病变常常是不同步的。 若多组淋巴结肿大，勿取腹股沟淋巴结； 若一组多个淋巴结肿大，勿取最小淋巴结； 尽可能将淋巴结完整取出； 若疑为淋巴瘤，勿要求冰冻报告。,2勿用电灼作病理取材 3取材时注意： 善于识别病灶； 勿仅取坏死组织； 勿过度挤压组织，活检钳必须锐利； 若剖腹作病理活检，待得到阳性病理 报告后关腹； 刮宫标本必须全部送检。,（二）肿物或器官切除标本送检 无论术前有无病理诊断，手术标本都应送检。术前活检的病理诊断往往有局限性甚至有误，最后诊断应根据肿物或器官的全面检查作出。,肿物或器官切开的方法： 肿块 沿最长径线切第一刀，以后切面与第 一刀
4、平行。 乳腺 沿肿块中央与乳头连线切第一刀。 肺叶 沿肺门作冠状切开。 食管 沿病灶对侧纵行切开。,胃 沿胃大、小弯剪开 肠 沿病灶对侧纵行剪开 子宫 沿宫颈向宫底作冠状切开 肾 沿肾门作冠状切开 重点检查部位或细微病灶要作标记，并在 送检单上说明。,(三）术中冰冻切片,送标本作冰冻切片检查的原则： 只有当临床须根据冰冻切片病理报告决定手术方式或范围时才送标本作术中冰冻检查； 剖腹活检 免疫荧光检查等标本须作冰冻切片，但 不必作术中冰冻检查；,（四）体液(胸腹水、尿、脑脊液、痰)的送检： 新鲜（2小时内）送检或冰箱储存； 勿加固定液； 沉淀物必须送检； 指导病人取痰。,(五)送检单填写重点内容
5、： 术中所见或病灶描写；冰冻送检单须说 明送检物是何种组织； 刮宫标本须说明末次月经日期； 疑血液病标本须说明外周血像和骨髓涂片 结果 临床诊断 可能诊断1，2，3；尽可能不 要写“肿块性质待查”，“发热原因待查” 旧病理号，以前病理诊断； 住院号；姓名；年龄；,三、标本的固定 （一）固定的意义 使各种酶灭活，防止组织自溶。保 存细胞亚结构，促进各种化学成分在 原位凝固沉淀。 （二）固定的时机 越快越好，最迟不超过离体后2小时 （三）固定液种类和选择,110%福尔马林 1份体积市售福尔马林加9份体积缓冲液 （PH7.4）一适用于手术及活检标本固定； 295%酒精 适用于细胞涂片，刷片固定 34
6、%戌二醛 适用于电镜标本固定 4特殊固定液，如糖原固定液，等,（四）固定液的量 大于标本的4倍体积，或固定液水平面 高于标本 （五）哪些标本不必固定？ 术中冰冻检查标本； 肾穿刺标本； 免疫荧光、某些免疫组化检查标本； 肌病标本,四、病理标本的长期保存 根据不同目的用不同方法 液体保存 石蜡包埋 塑料包埋 液氮保存 低温冰箱（低于-20保存）,五、病理检查的基本过程 第一天 肉眼检查、取材，固定、脱 水、浸蜡。 第二天 石蜡包埋，切片，染色，初验 第三天 复验，发出病理报告 第四、五天 复杂疑难病例需补取材， 特殊 检查、会诊 ：临床技术操作规范(2004年)规定病理报告于5个工作日内发出,六
7、、病理报告的形式 （一）肯定诊断的报告 （二）未完全肯定诊断的报告，需结合临床其他资料综合判断 1.倾向性诊断 2.可能性诊断 （三）描述性报告 （四）否定性报告,七、病理报告阴性或差错的原因 1）取材失当 2）制片质量差 3）病理医生经验不足或阅片匆忙草率 4）疾病形态的复杂性和病理检查的局限性 若病理报告与临床不符，临床与病理医生必须沟通，讨论。 正确评价病理科的功过。,病理学技术,1. 组织化学 2. 免疫组织化学 3. 电子显微镜 4. 基因芯片、组织芯片 5. 激光显微切割 6. 原位分子杂交、原位荧光杂交 7. 比较基因组杂交,一、免疫组织化学的概念 免疫组织化学是在免疫学和组织化
8、学的基础上发展起来病理学技术。用特异性的单克隆或多克隆抗体检测组织切片中是否存在相应抗原。,特异性抗体在适当条件下与组织切片中的抗原结合后，通过标记在抗体分子上的酶将显色剂氧化，显色物质沉淀在抗原抗体结合的部位从而显示抗原所在的位置（细胞膜、细胞核、胞浆）和抗原的多寡或强弱。,二、免疫组化的基本原理,组织抗原,第一抗体（鼠抗人）,第二抗体（羊抗鼠）,过氧化物酶,氧化底物 生成棕色产物,玻片,卵白素生物素过氧化物酶法,可用免疫组织化学方法检测的抗原包括人体和病原微生物的各种抗原成分。 免疫组织化学技术可作为核酸原位杂交的技术基础。,三、免疫组化技术在诊断病理学中的应用 1. 肿瘤分类的鉴别诊断而
9、不是肿瘤与非肿瘤或良恶性肿瘤的鉴别诊断 2. 肿瘤相关标志的检测 3. 某些病原微生物的检测，如HPV、CMV、 EBV、HBV等,铬粒素A(Cg.A) 突触素(Syn)s-100蛋白 神经元特异性烯醇化酶 NSE 胶质纤维酸性蛋白 GFAP,神经内分泌标记,胶质瘤,神经内分泌肿瘤,波形蛋白（Vimentin）,间叶组织标记,肌动蛋白(actin) HHF35 结蛋白(desmin),肌源性肿瘤,间叶组织肿瘤,间皮,间皮瘤,CEA,腺癌,上皮性肿瘤,细胞角蛋白（CK）,上皮组织标记,常用免疫组化标志,HBV感染,HBsAg HBcAg,CMV感染,CMV,HPV感染,HPV-Ag,某些微生物标
10、记,胃肠间质瘤,CD117（C-kit）,抑癌基因突变或过表达,P53，P21,肿瘤增殖活性,Ki-67 ,PCNA,生殖细胞肿瘤,胎盘硷性磷酸酶(PLAP),前列腺癌,PSA，P504S,肝癌，内胚窦瘤,AFP,乳腺癌，宫内膜病变,PR，ER，CerbB2,某些肿瘤相关标记,淋巴瘤 B淋巴瘤 T淋巴瘤 霍奇金淋巴瘤 NK/T淋巴瘤,白细胞共同抗原（LCA） CD20 CD79 CD3 CD45RO（UCHL1） CD30 CD15 CD56,淋巴造血组织标记,四、免疫组化检测成功的关键因素 1、标本固定 标本的及时、充分固定是免疫组化检测成功的前提 固定液：10%福尔马林 固定时间：24-48小时为佳 2、抗体效价 3、实验操作技术 临床医生要了解、关心、支持病理科工作，使病理科更好为临床服务。,
