《abo血型分子基础与应用课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《abo血型分子基础与应用课件（40页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、ABO血型分子基础与应用,江西省血液中心 李国良,ABO血型基本知识,Landsteiner 1900年发现ABO血型 是目前35个血型系统中最为重要的一个血型系统 种表型抗原：、 ABO血型抗原主要分布在红细胞上，同时分布在白细胞、血小板和组织细胞上 分泌型ABO血型抗原为半抗原，分布在唾液、血清、尿液、精液和羊水等中 ABO血型抗原存在发育的过程,成人与新生儿ABO抗原数量比较,ABO血型基本知识,血型抗原为糖蛋白和糖脂构成的多态性多糖链 ABO血型抗原的蛋白结构：前体物质+H物质(L岩藻糖）+/-特异性糖（N-乙酰半乳糖胺/D-半乳糖）,ABO血型鉴定,ABO亚型,发现ABO亚型 ABO
2、血型鉴定时正反定型不符 正反定型是相符的, 但某些反应的强度较弱 没有血液系统的疾病, 正定型在试管法中应该有“ 4 +”强度的凝集, 否则极有可能是ABO亚型 反定型, 凝集强度2 +, 甚至仅存在冷反应性不规则抗-A或抗-B, 这也提示有可能存在亚型。 通过反定型减弱预判亚型的可靠性远低于正定型减弱,ABO亚型,正定型的凝集强度与凝集状态 A2 亚型与合格的人源抗-A试剂反应, 可以达到4 +, Ax形成的凝集一般 2 +, 混合视野凝集中凝集的红细胞 50%, 通常判定为A3 或B3 型, 混合视野凝集中凝集的红细胞10%, 则通常判定为“Aend”或“ Bend”。 部分亚型红细胞和抗
3、体在4 放置10-30 min后, 凝集强度会显著增强,各种A亚型血清学表现,各种弱A亚型的鉴别程序,ABO亚型的分布,最常见的ABO亚型存在于A型人群中, A型个体大多数属于A1 型, 少数属于Aint、A2 型。,ABO亚型的分布,Aint可以看做是A1 和A2型的过渡型, 数量多于A2 型 除去A1、Aint、A2 型之外, 其他ABO亚型相当罕见, 根据现有数据, 在我国约为1.5/1万或略多, 而且B亚型的数量明显多于A亚型 类孟买型在我国不同区域人群中的分布比例约为1/8 000 1/16 000,ABO亚型的分布,ABO血型基因,ABO位点 9q34.19q34.2 7个外显子，
4、跨越基因组DNA 18kb 外显子17 ，28bp 691bp不等 主要编码顺序：exon 6 和 exon 7,ABO血型基因,ABO抗原不是ABO基因的直接产物 A基因：(1, 3)N-乙酰氨基半乳糖基转移酶 B基因：D半乳糖基转移酶 O基因：无有效的基因产物,ABO血型基因,ABO基因的参比序列：A*101 在A1基因的基础上核苷酸突变糖基转移酶改变影响催化活性抗原改变 A和B基因DNA序列有7个碱基不同，其中个引起氨基酸的替换，分别是176、235、266和268 O基因在261位单碱基缺失造成移码突变，终止密码提早出现，其它序列与A相同,ABO基因在cDNA和氨基酸上的差异,A1 a
5、llele (A*101) A1 allele (A*102)nt467(CT)=aa156(proleu) B allele nt291(AG)； nt526(CG) =aa176(ArgGly)； nt657(CT)； nt703(GA) =aa235(glySer)； nt796(CA) =aa266 (leuMet)； nt803(GC) =aa268(GlyAla)； nt930(GA)。 O allele (O*101) nt261(Gdel) =framshift O allele (O*102) nt261(Gdel) =framshift , nt297(AG), nt646
6、(TA), nt681(G A), nt771(CT), 829(GA),中国汉族群体ABO基因分布,O/B基因杂交产生Ax表现型,母亲B型，父亲O型，孩子A型，属于明显的一级父源排除关系。Suzuki et al.提出母亲生殖细胞系形成时发生B和O1等位基因交换，形成B-O融合基因，编码一个有A转移酶活性的基因产物，因为第7外显子来自O1基因，与A1基因第7外显子具有相同的序列。,常见A亚型的分子基础,常见B亚型的分子基础,cisAB与B（A）的分子基础,极少数人类个体的一条染色体中同时存在一个cisAB或B（A）基因，它编码的酶可以同时催化A抗原和B抗原的合成。 cisAB或B（A）是从一
7、个亲本遗传而来的，因此即便其基因型是cisAB / O或 B（A） / O，也会表现为AB型，若与O型血的人（基因型O / O）生育，子女的血型可能是AB或O，而不像通常AB型血与O型血的父母只能有A或B型血的子女。,cisAB与B（A）的分子基础,CisAB与B（A）4个关键位置氨基酸替代 A糖基转移酶: AAAA B糖基转移酶: BBBB cisAB酶： AAAB ；BBAB等 B(A)酶：BABB ；BBBB等,孟买型与类孟买型的分子基础,孟买型 属H缺乏的非分泌型，其个体红细胞和分泌液中均检测不到ABO抗原。,类孟买血型 是H缺乏的分泌型，其特点是红细胞表面缺乏ABH抗原，而在唾液等分
8、泌液中却可以找到ABH血型物质。,ABO血型亚型与突变基因关系,ABO亚型的基础是基因改变 ABO突变基因种类远远多于根据ABO血清学亚型数量, 目前发现的形成亚型的突变基因超过100种(Genbank中登记的超过200种） 每1种ABO亚型可以由多种不同的突变的ABO基因决定, 不同的基因型之间往往可产生细微的血清学表现差异 血清学表现存在个体差异, 相同的突变基因可产生略有不同的血清学结果 严格划分不同ABO亚型的突变基因比较困难,ABO血型亚型与突变基因关系,血清学检测易受主客观因素的影响，常常遇到和任何现有亚型血清学特点均不能完全相符的情况，在没有确切的证据证明为1种新的ABO亚型之前
9、，根据其主要的血清学特点,，将其纳入现有的亚型框架 合理的定义ABO亚型，可以使我们大致了解该1份血标本表达的ABO抗原强度, 是否存在或容易产生不规则抗-A、抗-B及抗-H, 是否存在相应血型物质等线索, 对其临床意义、遗传特性的判断等也能提供很有意义的信息 已有报道，符合血清学特点的ABO亚型，基因检测结果与之不符,ABO血型基因的临床应用,解决出现血型表型分型困难及出现的输血等困难 血型基因分型的优点： 不受检材限制，各种有核细胞如毛囊、组织块、血痕、羊水等都可作为检材而不必考虑表达问题, 不受血清中自身抗体、不规则抗体的影响 不受疾病的影响，某些疾病如肿瘤、白血病等引起的血型抗原表达异
10、常所致的血型“转变”可直接定基因型 可快速解决血型鉴定中的假凝集、弱凝集(如细菌污染、血浆蛋白紊乱等所致)现象,ABO血型基因的临床应用,新生儿及胎儿溶血病产前诊断 早期鉴定胎母血型不合有助于实施干预治疗 早期产前诊断标本主要为羊水细胞，羊水细胞多为死亡的细胞，存在不同程度的降解，基因检测要求内参对照以确保结果准确 母体血浆获得胎儿的样本，应注意评估可能出现的母体的污染问题，检测母体血浆和细胞的位点以保证结果的准确性,ABO血型基因的临床应用,作为个体特异性的遗传标志物 用于血型不合造血干细胞移植后嵌合体监测，指导血型不合移植后临床输血支持治疗 家系遗传学分析,ABO血型基因检测技术,核心技术
11、：聚合酶链反应 PCR-RFLP PCR-SSP DNA序列测定,PCRRFLP,原理： PCR扩增出包含突变位点的特定片段 利用突变位点特异的限制性内切酶消化ABO基因扩增产物 特定的片段经凝胶电泳检测便能获得的特征 以组合的方式鉴定基因型。,PCRSSP,目前最常用的基因分型技术，PCR 扩增产物通过凝胶电泳进行分析。 根据基因座特异的SNP特征设计相应的序列特异性引物 PCR扩增产物的有无是鉴定特异性等位基因的基础 本法也存在一定假阳性率，有学者选择在SSP的末端即SNP位置的倒数第或第个位置上设计错配以提高引物的扩增特异性。 注意选用不具外切酶活性的TaqDNA聚合酶，否则容易出现假阳
12、性扩增。目前有单管扩增的PCR检测模式，也有多重PCR同管扩增的模式,PCRSSP,ABO基因测序,通过PCR扩增基因的主要片断，对产物进行序列分析，对照标准基因片断，分析基因突变的碱基以确定血型 结果准确可靠 需要特殊的仪器设备 操作复杂，成本高,一个带有B(A)700CG突变的 B(A)02家系,700G,700C,703A/G,703 A,B(A) 02 (700CG),B/O individuals,nt640,nt641,Normal B 101 allele,B(A) 640AG allele Genbank accession: DQ124679,B(A) 641TC allele Genbank accession: DQ124678,血清学方法与DNA技术相互补充,一个CisAB核心家系,O (OO),A2Bx (CisAB/O),A2Bx (CisAB/O),O (OO),血清学：A2Bx 基因分型：A*102/O 序列测定： nt.467(CT) = aa156(ProLeu), nt.803 (GC) = aa.268(GlyAla） 结论：CisAB*01/O,谢谢！,
