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1、第3章 器官培养,植物组织培养学,第3章 器官培养,本章主要内容 根的培养 茎尖的培养 叶的培养,第3章 器官培养,(1)一般掌握离体根培养的取材部位和培养基的选择； (2)掌握茎尖培养的种类和操作步骤； (3)掌握茎段培养中材料的选择、处理及培养基的调整； (4)掌握离体叶片的培养步骤； (5)一般掌握胚胎培养的类型与各自的注意事项。,第3章 器官培养,本章教学目的与要求,器官培养的定义：,第3章 器官培养,研究器官的功能、分化、形态建成； 快速繁殖； 获得脱毒苗 种质保藏等,指植物某一器官的全部或部分或器官原基的离体培养，包括根、茎、叶、花、果实、种子等,培养目的：,第一节 根的培养,根培
2、养的意义: 1) 是进行根系生理研究的最优良实验体系; 2) 是研究器官分化、形态建成的良好体系； 3）可建立快速生长的根无性系。,第3章 器官培养,一、离体根的培养方法：,1、培养无菌苗 2、切取1.0cm的根尖 3、接种在White培养基或1/2MS培养基中暗培养 4、一周后，取侧根扩大培养，可得到离体根的无性系,第一节 根的培养,二、培养基：,无机离子较低的White培养基 或者2/3或1/2的MS、B5培养基,三、影响离体根生长的因素,第一节 根的培养,第二节 茎尖的培养,一、含义及意义 1、类型 茎尖分生组织培养：对长度0.1mm左右，含1-2个叶原基的茎尖进行培养，目的是获得无病毒
3、植株 普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养，目的是快速繁殖。,第二节 茎尖的培养,2、茎尖培养的意义,无性系快速繁殖； 培养无病毒苗，品种改良； 理论基础研究。,第二节 茎尖的培养,蝴蝶兰腋芽萌发,二、茎尖培养的一般方法,(一) 制备外植体 取1-2cm的枝条顶梢，去小叶-消毒-解剖镜下用解剖刀除去幼叶和叶原基，露出生长点，切下0.1-0.2mm长的茎尖(含1-2个叶原基) (二)培养基：一般为MS (三)培养方法： 1、固体培养法：试管培养,第二节 茎尖的培养,2、纸桥培养法,含义：用酒杯状的滤纸代替琼脂，使杯底朝上塞入试管中，与液体培养基接触，将离体茎尖置于滤纸上方进
4、行培养。,优点：培养基是液体培养基，营养物质能通过滤纸均衡而持久地供给外植体，有利于外植体的健康成长 ； 缺点：操作工艺复杂 。,第二节 茎尖的培养,三、茎尖分生组织培养与脱毒,见第八章 植物脱毒技术,四、普通茎尖培养与繁殖技术,概念：快速繁殖(微繁殖):用组织培养的方法，使植物的部分器官、组织迅速扩大培养，繁殖出大量幼苗的繁殖方法。 特点：繁殖速度快；使用材料少，生产效率高，省时省工；节约空间有利于工厂化生产；不受病虫害侵害。,第二节 茎尖的培养,（一）茎尖微繁技术的过程：分5个阶段,1、无菌培养体系的建立、 2、芽的增殖 3、中间繁殖体的增殖 4、诱导生根 5、试管苗的移植,第二节 茎尖的
5、培养,1、无菌培养体系的建立,初代培养建立的无性繁殖系包括： 茎梢、芽丛、胚状体和原球茎等。,外植体的制备,培养基,培养条件,第二节 茎尖的培养,2、芽的增殖 （1）顶芽和腋芽的发育,顶芽、侧芽生长，形成一个微型的小灌木丛状的丛生苗结构。 丛生苗的每个枝条转接继代，可迅速获得多数的嫩茎。这种繁殖方式称作微型扦插或无菌短枝扦插 优点：不经愈伤组织，所以最能使无性系后代保持原品种的特性。,第二节 茎尖的培养,图示茎段培养过程,植株再生,培养,（2）不定芽的发育,不定芽产生的途径： 外植体上直接产生 由外植体诱导的愈伤组织上产生。,第二节 茎尖的培养,外植体,脱分化,愈伤组织,再分化,器官原基,第二
6、节 茎尖的培养,由第二阶段芽的增殖产生的数量有限的芽、苗、原球茎称为中间繁殖体。 将之转接到新鲜的相同培养基上进行继代培养，3-4周转接一次，扩大培养。,3、中间繁殖体的增殖,茎的培养发育方向,腋芽萌发 脱分化后产生胚状体（原球茎） 脱分化后直接产生不定器官 脱分化后形成愈伤组织,第二节 茎尖的培养,4、壮苗和生根,壮苗目的：使增殖的嫩枝生根产生小植 株，以便移栽。,第二节 茎尖的培养,用White、1/2或1/3MS、B5等生根培养基。 降低N，P，K盐的量。 适当加大生长素（如NAA），不用或少用细胞分裂素，或在无激素的培养基上生根。 蔗糖降低到1.0-1.5%，以增强植株自养能力； 加入
7、1%左右的活性炭； 增加光强度，以提高小植株的光合能力。,第二节 茎尖的培养,试管苗生根的措施,(二) 影响茎尖培养微繁殖的因素,基因型 外植体的大小 供试植株的生理状态 芽在植株上的部位 供试植株的年龄 培养基 褐变 玻璃化,一、定义： 离体叶的培养是指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶等叶组织的无菌培养。,第三节 叶的培养,第3章 器官培养,叶培养的意义：,1、是研究叶形态建成、光合作用、叶绿素形成的好方法 2、通过叶组织的脱分化与再分化以证实叶细胞的全能性 3、通过叶组织培养，探索离体叶组织培养的条件和影响因素 4、建立体细胞快速无性繁殖体系 5、叶细胞培养物经诱变筛选突变体。,第三节
8、叶的培养,二、叶组织培养的方法,1、制备外植体： 幼嫩叶片-水洗-消毒- 无菌水洗。 2、影响培养因素： 1）6-BA和KT利于芽的形成；2,4-D利于愈伤组织形成。 2）极性：叶片腹面向上放置利于芽的分化 3）损伤：常从叶柄、叶脉的切口处形成愈伤组织和芽。,第三节 叶的培养,三、离体叶组织中再生植株发生途径,1、直接产生不定芽 2、离体叶 愈伤组织 不定芽 3、离体叶 愈伤组织 胚状体 不定芽 4、离体叶 小鳞茎或球状体 愈伤组织,第三节 叶的培养,番茄子叶培养,百合鳞叶培养,第三节 叶的培养,烟草叶片培养,叶的培养：,(1)植物器官培养的含义。 (2)离体根培养的方法、培养基、影响离体根生长的因素。 (3)茎尖培养的含义；茎尖培养包括普通茎尖培养和茎尖分生组织培养。 (4)纸桥培养的含义 (5)茎尖微繁一般的过程 (6)离体叶组织脱分化和再分化中，茎和芽分化主的4个途径 (7)试管苗诱导生根方法。,第3章 器官培养,本章小结：,谢谢!,第3章 器官培养,
