血小板-抗原抗体检测

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1、血小板抗原抗体,广州医科大学附属第五医院输血科,目录,血小板相关疾病,血小板抗原,血小板抗体,抗体检测及交叉配血,血小板抗原,血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体,并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子. 血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原 血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）,血小板抗原,血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O型血小板和

2、A或B型血清温育，血小板就会带上A或B抗原。 不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异; 同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其生命力不受影响.,血小板抗原,白细胞抗原：HLA抗原 血小板存具有HLA-类抗原类抗原，主要是HLA-A和HLA-B位点的抗原（少量表达的HLA-C抗原）。 HLA-类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。,血小板抗原,血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA） 主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板特异

3、性抗原 高频率抗原以“a”表示，低频率抗原以“b”表示 人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发现以来，迄今已经检出24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,-17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。,血小板抗原,血小板抗原,血小板抗原,24个抗原主要分布在糖蛋白GPb，GPa，GPb，GPa以及CD109上 ； GPa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4，HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw，HPA-14b

4、w，HPA-16bw GPb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPb上携带 HPA-3和HPA-9bw；,血小板抗体,抗体检测及交叉配血,采取预防和治疗措施 避免流产、出血等,血小板相容性检测,抗原定型,抗体检测,建立血小板供者库,筛选基因型相容的供者 避免血小板抗体的产生,诊断血小板免疫性疾病,交叉配型,筛查血小板相容性供者,减少血小板输注无效 避免紫癜、出血和死亡,血小板抗原定型,血清学定型 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 缺点：特异性抗体来源困难 -人血清中血小板抗体通常为多特异性 -单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单

5、抗， 无其它HPA单抗。 基因定型 限制性片段长度多态性分析（RFLP） 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP),血小板抗体检测 血清学,ELISA法(酶联免疫试验) 血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA) 固相血小板免疫血清学试验(SPISA) 简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA) 流式细胞仪 改良抗原俘获(ELISA) 免疫荧光试验,简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA,简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA,直接测定法 血小板表面结合血小板抗体的测定 间接测定法 血清内抗血小板抗体的测定 交叉配血试验 选择配合

6、的血小板供体 质量控制 阴阳性对照,ELISA法(酶联免疫试验),单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。,血小板相关疾病,临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少症主要有5种： 血小板输注无效（PTR） 输血后紫癜（PTP） 新生儿同种免疫血小板减少症（FMAIT/NAIT） 被动免疫血小板减少症（PAT） 移植相关的同种免疫血小板减少症（TAT),血小板相关疾病,血小板免疫性疾病

7、血小板输注无效症 新生儿血小板减少症 输血后紫癜 自身免疫性血小板减少症 药物引起的血小板减少症 移植相关的血小板减少症,血小板抗原 同种异体抗原 HLA-I,HPA,ABH 同种抗原 GPb/a,CD36 自身抗原 GPb/a,GPb/ 药物依赖性抗原 肝素、奎宁等 非特异性抗原,临床病症 淤点 淤斑 流产 （颅内）出血 死亡,血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）,Platelet transfusion refractoriness, PTR: 患者接受充足治疗剂量（2.5x1011个/次）的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，处于血小板治疗不应状

8、态。一般临床上认为至少有2次及以上输注血小板效果不佳才能做出PTR诊断。,1.若输注后1小时 CCI 7500/L 12小时 CCI 6000/L 24小时 CCI 4500/L 连续3次，可判断为血小板无效输注 2.血小板恢复（回收率）百分率（PR%） 若输注血小板24小时后，PR%20%，可判断为血小板无效输注,由HLA抗体引起PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。 现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病率已经大为下降,血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）,非免疫学原因(67.3%) 发热 脾功能亢进 感染 药物作用 DIC 血小板的质量问题 免疫学原因(17.5%)

9、 HLA抗体 HPA抗体 ABO血型不合 血小板自身抗体 药物 预防 1.白细胞过滤 2.辐照 3. HLA和HPA配型输注,血小板相关疾病-血小板输注无效(PTR）,Platelet transfusion refractoriness, PTR: 患者接受充足治疗剂量（2.5x1011个/次）的血小板输注后，血液循环中血小板计数未见有效提高，临床出血表现未见明显改善，处于血小板治疗不应状态。一般临床上认为至少有2次及以上输注血小板效果不佳才能做出PTR诊断。,1.若输注后1小时 CCI 7500/L 12小时 CCI 6000/L 24小时 CCI 4500/L 连续3次，可判断为血小板无

10、效输注 2.血小板恢复（回收率）百分率（PR%） 若输注血小板24小时后，PR%20%，可判断为血小板无效输注,由HLA抗体引起PTR约占80%，其次为HPA或ABO抗体。 现由于临床广泛输注去白细胞的成分血治疗血液病，发病率已经大为下降,血小板相关疾病- 输血后紫癜,输血后血小板减少性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又称“输血后紫癜”, Post-transfusion purpura, PTP: 由于血小板输注后发生同种免疫反应所致，一般发病率低。 患者被输入不相容的血小板/全血或多次妊娠而产生血小板抗体，破坏输入的和自

11、身血小板而导致急性和暂时性血小板减少。患者多见于（95%)有多次妊娠或输血史的老年女性。,血小板相关疾病-输血后紫癜,HPA-1a是引起该病的主要抗原。我国绝大部分人为HPA-1a抗原阳性。 实验室检查：血小板计数降低、骨髓巨核细胞增生活跃、血清学检查血小板抗体存在但效价和病情无关。 本病输血小板无效，甚至有加重病情的危险，肾上腺皮质激素不能缩短病程，但是，有可能改善出血症状。 主要治疗措施为血浆置换或换血，换血浆优于换全血。在输血后血小板显著减少和发生严重出血症状时，应立刻做血浆置换，一次交换65%85%的血浆量，平均在15天后出血症状减退，血小板数目上升。 尽可能避免或减少输注血小板及含血

12、小板的血液制品。,血小板相关疾病- 新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT),胎儿血小板 怀孕或生产时进入母体循环 胎儿血小板刺激母体产生抗体 母亲IgG抗体通过胎盘进入胎儿体内使胎儿血小板致敏 血小板破坏增加 发生FAIT,血小板相关疾病- 新生儿同种免疫血小板减少症(FMAIT/NAIT),第一胎即可发病； 病死率约13%； 治疗：输入相合的血小板以提高患儿的血小板数，如找不到相合的血小板，可以输注经洗涤和辐射的母亲血小板，也可给患儿做放血治疗； 治疗前交叉配血：以母亲血清与供者血小板进行交叉配合试验； 预防：母亲在孕期可进行血浆置换,被动免疫血小板减少症及移植相关的同种免疫血小

13、板减少症,Passive alloimmune thrombocytopenia, PAT: 患者输入含有血小板特异性抗体的血浆，在数个小时之内出现血小板减少症，约一周后缓解。 一旦发现献血员血浆、血清中含有血小板特异性抗体应立即停止献血，这类献血员多为有妊娠史。 Transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAT: 器官接受者的淋巴细胞产生抗外来移植物（血小板）的特异性抗体；或供体器官中残留的淋巴细胞产生抗宿主血小板的抗体,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I

14、T P）ITP,发病机制 一、抗血小板抗体 约75%ITP患者可测到血小板相关自身抗体（PAIg），后者多为IgG、IgA也可是IgM。抗体通过Fab片段与血小板膜糖蛋白（Gpb/a等）结合。带有抗体的血小板接触到单核-巨噬细胞表面的FC受体，易被吞噬破坏。另外，抗血小板抗体对巨核细胞分化也有抑制作用。 二、 血小板生成时间缩短 ITP血小板生存可缩短至23天或更短，ITP患者血小板易在脾脏被扣留。脾脏可产生抗血小板抗体，脾内的巨噬细胞参与破坏血小板过程，切脾对相当部分的患者有效。,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）I

15、TP,急性型：儿童多见，初起有上感，主要为病毒细菌所致。可有寒热，全身皮肤粘膜出血(瘢点，紫癜或血肿)、内脏出血。1%患者颅内出血，危及生命，但大多数呈自限性，一般46周可自行缓解。 慢性型：主要见于40岁以下女青年，症状多在偶然中发现，也有皮肤粘膜的出血，内脏出血较少见，月经过多者可引起贫血。,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP,检测 LIFECODES PAKAUTO试剂盒,特发性血小板减少性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP,一、糖皮质激素 二、脾切除 三、免疫抑制剂 四、高剂量免疫球蛋白和血浆置换,血栓性血小板减少性紫癜(Thrombotic Thrombocytopenic Purpura，TTP),TTP是一种严重的弥散性血栓性微血管病，以微血管病性溶血性贫血、血小板聚集消耗性减少，以及微血栓形成造成器官损害（如肾脏、中枢神经系统等）为特征。之前TTP预后差，病程短，不及时治疗病死率8090%，随着血浆置换的临床应用，预后大大改观，病死率降至1020%。 临床的五大特征，即血小板减少性紫癜、微血管病性溶血