《HIV实验室~标准操作规程(SOP资料~)》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIV实验室~标准操作规程(SOP资料~)（30页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、#*文件名称 标准操作规程（SOP）文件类型SOP生效日期（年/月/日）修改日期（年/月/日）文件号页码2012-02-102012-02-10HIV002 1目 录LAB/SOP/01进口680型酶标仪仪器操作指南 LAB/SOP/02进口680型酶标仪软件操作帮助 LAB/SOP/03进口1575型洗板机简易操作流程 LAB/SOP/04电热恒温箱使用规程 LAB/SOP/05离心机使用规程 LAB/SOP/06生物安全柜使用规程 LAB/SOP/07消毒剂的配制 LAB/SOP/08废弃物品的消毒处理 LAB/SOP/09工作区的消毒 LAB/SOP/10实验室安全制度 LAB/SOP/
2、11实验室带入物品的安全要求LAB/SOP/12实验室带出物品安全要求 LAB/SOP/13实验室人员的管理和健康监护 LAB/SOP/14样品的运送和发放 LAB/SOP/15事故紧急处理 LAB/SOP/16潜在性感染材料的接收 LAB/SOP/17实验室安全操作要求 LAB/SOP/18实验标准操作程序1 LAB/SOP/19实验标准操作程序2 LAB/SOP/20实验室记录的标准操作程序 LAB/SOP/21保证数据完整性标准操作 LAB/SOP/22用电话、传真、E-mail报告结果的标准操作程序 LAB/SOP/23手提式电热压力蒸汽消毒器的标准操作程序 LAB/SOP/24样品的
3、采集、登记、处理、保存和运输 编号：LAB/SOP/24样品的采集、登记、处理、保存和运输1 样品的采集和处理艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。1.1 血清样品采集和处理1.1.1 用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，吸出血清备用。1.1.2 如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。1.2 抗凝血样品采集和处理1.2.1 用加有抗凝剂的真空
4、采血管（或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管），反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。1.2.2 应根据实验要求选用适当的抗凝剂，如CD4+/CD8+T淋巴细胞测定可选用K3EDTA、肝素或枸橼酸钠，HIV病毒分离、核酸定性/定量检测可选用K3EDTA或枸橼酸钠。1.2.3 用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在48h内分离PBMC和血浆，否则应在2448h内分离血浆和血细胞。1.3 采集样品注意事项1.3.1 采集样品原则上应按临床采血技术规范操作（试剂盒说明书有特殊要求除外）。1.3.2 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液；直接接触HIV感染者/艾
5、滋病（AIDS）病人血液/体液的操作,应戴双层手套。2 样品的保存2.1 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20以下，短期（1周）内进行检测的样品可存放于28。2.2 用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于-20以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80。2.3 用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测。3 样品的运送3.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。3.2 应采用WHO提出的三级包装系统3.2.1 第一层容器：装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明
6、样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。3.2.2 第二层容器：要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。3.2.3 第三层容器：放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）。3.3 血清和血浆样品应在28条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下1823运送。每一包装的体积以不超过50ml为宜。3.4 运送感染性材料必须有记录。3.5 如分离血浆仍有困难，可直接将
7、抗凝血-20以下冻存，采用冰壶冷藏运输，避免冻融。3.6 特殊情况下如需对个别样品进行复测，可以用特快专递形式投寄，但必须按三级包装系统将盛样品的试管包扎好，避免使用玻璃容器，以保证不会破碎和溢漏。4 样品的接收4.1 含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。4.2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。4.3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃
8、。并要将样品情况立即通知送样人。4.4 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。4.5 因特殊临床治疗导致自发荧光的样品不可用于荧光方法测试。4.6 接收样品时应填写样品接收单。艾滋病筛查检测登记表 登记日期 年 月 日标本编号(GB码)姓 名性别年龄婚姻状况人群特征通 讯 地 址采样日期检测日期检测结果结果报告日期报告人确认结果备注ELISAPA快速 文件名称 标准操作规程（SOP）文件类型SOP生效日期（年/月/日）修改日期（年/月/日）文件号页码2012-02-102012-02-10H
9、IV002 2 目 录LAB/SOP/25检测方法和步骤LAB/SOP/26生物诊断试剂使用记录和保存记录LAB/SOP/27实验质量控制与质量管理LAB/SOP/28检验结果解释与报告LAB/SOP/29保密LAB/SOP/30实验室数据、文件记录LAB/SOP/31实验室安全防护LAB/SOP/32不确定样品追踪和处理LAB/SOP/33实验室清理和消毒编号：LAB/SOP/25检测方法和步骤1. 目的：为HIV实验室各技术人员统一实验操作程序，保证实验质量，特制定本程序。2. 适用范围：适用于HIV实验室技术人员。3. 规范性引用文件：全国艾滋病检测技术规范（2004年版）。4 相关器材
10、设备：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒（双抗原夹心酶联免疫法）HIV（1+2）。5 安全防护器材与措施：一次性乳胶手套、隔离衣、口罩、帽子，接收或取用试剂时应把试剂视作感染性材料对待。首先穿好一次性隔离衣，戴好口罩、帽子，最后戴好乳胶手套后再接触试剂。6 检测方法与步骤6.1双抗原夹心酶联免疫法6.1.1 试剂名称：人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒6.1.2试剂厂家：北京万泰生物试剂有限公司6.1.3原理及用途：采用基因工程抗原gp41和gp36包被酶联板，用基因工程HIV-1和HIV-2嵌合抗原ENV18标记辣根过氧化物酶，与其他试剂组成试剂盒，应用双抗原夹心法检测人血清或血浆中的人类免疫缺陷病
11、毒抗体，用于献血员及高危人群中人类免疫缺陷病毒感染的筛查。6.1.4 试剂盒组成（96人份） 6.1.4.1.预包被板条 12孔8/8孔12 6.1.4.2.HIV酶标记物12ml1瓶6.1.4.3.阴性对照1ml1瓶6.1.4.4.阳性对照1ml1瓶6.1.4.5.25倍浓缩洗液80ml1瓶用去离子水或蒸馏水稀释 6.1.4.6.底物缓冲液8ml1瓶6.1.4.7.底物液8ml1瓶6.1.4.8.终止液7ml1瓶6.1.4.9.封口袋1个6.1.4.10.说明书1份6.1.5操作方法6.1.5.1. 加样：将预包被板条固定于板架上。每次试验设阴性对照2孔、阳性对照2孔，分别加入阴、阳性对照1
12、00ul；设空白对照1孔，不加样品。其余孔加入待测样品100ul。6.1.5.2. 温育：置37温育60分钟。6.1.5.3. 洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置3060秒，弃去孔内洗液，扣干。重复洗5次。6.1.5.4. 加酶：空白对照孔不加酶，其余孔加入酶标记物100ul。6.1.5.5. 温育：置37温育30分钟。6.1.5.6. 洗涤：弃去孔内酶标记物，重复洗5次（同操作步骤3）。6.1.5.7. 显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，置37温育10分钟。6.1.5.8. 终止：每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。在单波长450nm或双波长450nm/630nm下，用空白孔校零，再读取各孔OD值。6.1.6结果判读 96.1.6.1. 要求： 阳性对照OD值应 0.80 阴性对照OD值应 0.08（空白校零后）6.1.6.2. 临界值（C.O.）计算： 临界值（C.O
