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1、1,封闭抗体检测的临床意义,郑州大学第三附属医院 贾莉婷 2011年9月,2,主 要 内 容,一、流产 二、反复性自然流产（RSA） 三、封闭抗体的检测 四、 RSA淋巴细胞免疫治疗,3,一、流 产（1）,流产定义 凡妊娠不足28周，体重不足1000克而妊娠终止者，称为流产。 根据流产发生的时间分为式 早期流产：流产发生于妊娠12周前 晚期流产：流产发生于妊娠1228周 流产又分：为人工流产和自然流产,4,一、流 产（2）,流产病因 遗传基因缺陷：在早期流产时，染色体异常， 约占5070% 母体因素：包括母体全身性疾病、生殖器官 疾病、内分泌功能失调、创伤、 不良习惯等 免疫因素 环境因素,5
2、,一、流 产（3）,流产病理 胚胎死亡 底蜕膜出血 胚胎与蜕膜层分离 排出,6,一、流 产（4）,流产的临床表现 流产的主要症状是阴道出血及腹痛，根据流产发生的时间不同，症状不一样。 早期流产：先阴道出血后腹痛 晚期流产：先腹痛后阴道出血,7,一、流 产（5）,流产的类型 先兆流产：少量阴道出血，轻微下腹痛，无肉样出； 查体和B超：宫口未开，胎儿胎心良好 难免流产：在先兆流产的基础上，阴道流血量增多或阴 道流液、腹痛加剧，流产已不可避免。 不全流产：难免流产继续发展，使部分胚胎组织排出体外，还 有部分组织残留于宫腔内嵌于子宫颈口，影响子宫 收缩，容易引起大量出血甚至导致失血性休克。 完全流产：
3、 先有流产症状，然后胎儿胎盘完整排出 稽留流产：胚胎或胎儿已死亡滞留于宫腔内尚未排出者 习惯性流产 反复性流产 流产感染：指流产合并生殖器官局部或全身感染,8,二、反复性自然流产（1）,反复性自然流产 定义：指自然流产连续或不连续发生2次或2 次以上者,约占总妊娠数的0.5%3.0% 英文：recurrent or repetitiue dpontaneous abortion，RSA 习惯性流产（habitual abortion） 连续流产3次或以上者,9,二、反复性自然流产（2）,流产复发率,10,二、反复性自然流产（3）,RSA病因（1） 解剖因素：1215的妇女子宫畸形、宫 腔粘连、
4、子宫肌瘤、子宫腺肌病、 宫颈机能不全等 内分泌因素：1020的妇女黄体功能不 全、多囊卵巢综合征、高泌乳素 血症、甲状腺疾病等 遗传因素：38的夫妇染色体异常；自 然流产中70%胚胎存在染色体异常,11,二、反复性自然流产（4）,RSA病因（2） 感染因素：占50。明确诊断需要进行血清 或分泌物TORCH、支原体、衣原 体等病原微生物的检测 男方因素：染色体异常、酗酒、吸烟等因素 可影响精子质量，进而引起RSA 免疫因素：原因不明RSA约占40%60%，其中 80%与免疫因素有关。 免疫因素在自然流产中的作用倍受关注,12,二、反复性自然流产（5）,RSA免疫因素 自身免疫性 约13与自身抗体
5、特别是抗磷脂抗 体（APL）有关，另外还可能与存在 抗精子抗体、血型不合等有关。 强烈的凝血活性 血栓形成 APL 直接造成血管内皮细胞损伤 流产 抑制滋养细胞的功能 影响胚胎着床 同种免疫性 主要是 封闭抗体,13,14,三、封闭抗体的检测（1）,封闭抗体的概念 是人类白细胞抗原、滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原等刺激母体免疫系统，所产生的一类IgG型抗体。 antiphospholipid antibody，APLA blocking antibodies，BA APLA产生机制 由于HLA基因的遗传多态性，个体之间细胞膜表面的HLA抗原分子相容性概率很低，构成了同种免疫。 母体对妊娠胚胎作为
6、异体抗原的辨识，能刺激母体产生足够以维持妊娠所需的APLA。,15,三、封闭抗体的检测（2）,APLA功能 保护和刺激胎盘细胞生长、分化。 APLA 类型 抗温B细胞抗体 抗冷B细胞抗体 抗特异性抗体 抗滋养层及淋巴细胞交叉反应抗原抗体 抗Fc受体的抗体 抗父体的补体依赖性抗体,16,三、封闭抗体的检测（3）,正常母-胎免疫状态 父源性HLA抗原 母体免疫系统 封闭抗体 妊娠成功 母-胎耐受 RSA母-胎免疫状态 识别低下型：封闭抗体缺乏为主要特征 识别过度型 识别紊乱型 RSA母-胎免疫紊乱结局 封闭抗体形成不足 滋养细胞伪装无效 滋养细胞不能生长、分化 滋养细胞死亡 激活II、III、IV
7、、V免疫紊乱,17,三、封闭抗体的检测（4）,APLA在机体中的作用 APLA中和同种异体抗原，防止辅助T细胞识别胎儿抗原而不使胎儿受到排斥 APLA封闭同种抗原刺激淋巴细胞产生巨噬细胞移动抑制因子 APLA直接作用于具有免疫能力的细胞如:CTL细胞、NK细胞等，抑制淋巴细胞反应（MLR） APLA直接结合到靶细胞的抗原上，从而降低它们对受体细胞参与的免疫反应的敏感性。,18,三、封闭抗体的检测（5）,总之， APLA封闭母体淋巴细胞对滋养层的细 胞毒作用，阻止母亲免疫系统对胚胎的攻击， 是人 类成功妊娠不可缺少的重要前提（保护性抗体）。 若APLA产生不足，母体对胎儿产生强烈的排 斥现象，发
8、生于孕早期可出现反复自然流产，孕晚 期则可出现妊娠高血压疾病、胎儿宫内生长受限、 甚至出现胎死宫内等。 因此，反复自然流产患者检测APLA非常必要！,19,三、封闭抗体的检测（7）,封闭抗体的检测方法 细胞毒试验 ELISA法 流式细胞术,20,标本： 患者不抗凝全血、丈夫抗凝和不抗凝全血各1管 方法 1、对照管：丈夫抗凝血100+丈夫血清50l+CD 3 、 CD 4 、CD 8 单克隆抗体20l 2、测定管：丈夫抗凝全血100+患者血清50l+CD 3 、 CD 4 、CD 8 单克隆抗体20l 孵育30min，加入红细胞溶解液3ml，PBS洗涤1次； 流式分析对照管和测定管CD +3/C
9、D +4 /CD +8 细胞比例 计算公式 封闭效率（%）= 对照管 - 测定管CD比例 结果判断 1、三项中只要有一项出现负值，提示封闭抗体缺乏 2、封闭抗体阳性：三项全部正值，提示正常,三、封闭抗体的检测（6）,21,对照管,22,测定管,23,24,四、 RSA淋巴细胞免疫治疗（1）,淋巴细胞免疫治疗概况 （Lymphoeyte immunology therapy, LIT） 1970-1979年 Beer开始LIT的实验动物研究 1978年 用于RSA妇女 流产次数越多或IVF失败次数越多，免疫紊乱越严重 自身免疫问题（APL阳性，ANA阳性），使LIT的有效性减少60 。,25,四
10、、 RSA淋巴细胞免疫治疗（2）,LIT治疗适应症 对于RSA、多次IVF失败的患者，首先应排除解剖、内分泌、感染、遗传、自身免疫等因素 男方未感染乙肝、丙肝、爱滋、梅毒等传染病 对该类患者进行封闭抗体检查，如果患者封闭抗体为阴性，则可选用丈夫淋巴细胞主动免疫疗法进行治疗。,26,四、 RSA淋巴细胞免疫治疗（3）,治疗流程（1） 门诊医师在接诊后要仔细询问病史，对患者进行了各项检查后，决定是否采用该方法。 与患者进行沟通，取得夫妇双方同意。 在治疗前，需检测男方是否感染乙肝、丙肝、爱滋、梅毒等传染病，结果正常才能做免疫治疗；抽血与免疫注射需避开女性月经期。 男方按预约早晨空腹抽血2030ml
11、，严格无菌操作下分离提取淋巴细胞，调整淋巴细胞浓度；当日下午女方接受淋巴细胞免疫治疗。,27,四、 RSA淋巴细胞免疫治疗（4）,治疗流程（2） 嘱咐夫妇双方于 34周后，再按预约时间接受免疫治疗，3次为一个疗程。 一个疗程结束后，复查封闭抗体。医师根据封闭抗体水平决定是否安排妊娠，或进入下一疗程治疗；治疗期间应避孕。 如封闭抗体仍为阴性，则需继续注射治疗，直至转为阳性后再考虑受孕，妊娠后继续一个疗程。,28,四、 RSA淋巴细胞免疫治疗（5）,LIT后的局部表现 第一次注射部位可有红、肿、痒等反应，可38 第二次注射部位的反应比第一次轻。 有效维持时间 通常维持终生 免疫后半年如果未能妊娠，检测淋巴细胞抗体，阴性 或不足者再次强化。 80RSA或IVF失败夫妇在12个月内妊娠；60在3个月内妊娠；15需进行第三次免疫。 LIT的副作用 到目前为止，未发现对母、儿的副反应。,29,总 结,RSA病因复杂，半数不明原因，封闭抗体作为一种保护抗体，对妊娠维持作用较大，使用父方淋巴细胞诱导APLA产生，可有效提高妊娠率，为患者解决忧患。,30,谢谢!,
