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1、1 学号：学号：_ _姓名：姓名：_ _得分：得分：_ _ 1在应用农杆菌侵染植物叶片获得耐旱基因植株的实验步骤中，不需要的是（） A将耐旱基因导入农杆菌并通过农杆菌侵染植物叶片细胞 B利用标记基因和选择培养基的作用筛选导入耐旱基因的细胞 C用 PEG 诱导转基因细胞的原生质体融合后培养出愈伤组织 D将转基因幼苗栽培在干旱环境中以检验植株的耐旱性 2 基因组编辑技术是研究基因生物功能的重要手段， 下图是对某生物 B 基因进行定点编辑的过程， 该过程中用 sgRNA 可指引核酸内切酶 Cas9 结合到特定的切割位点，相关说法不正确的是（） A靶基因部分序列与 sgRNA 通过碱基互补配对原则进行
2、配对 B核酸内切酶 Cas9 可断裂脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键 C被编辑后的 B 基因与编辑前的 B 基因互称为非等位基因 D通过破坏 B 基因后生物体的功能变化可推测 B 基因的功能 3科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。以下有关基因工程的叙述， 不正确的是（） A基因工程至少需要两种工具酶，即限制性核酸内切酶和 DNA 酶 B作为目的基因的载体，要有一至多个限制酶切割位点，并能在宿主细胞中正常复制 C将目的基因导人不同类型宿主细胞的方法会有所不同 D目的基因会因需求不同而不同，载体也会根据实际需要而有所不同 4. 利用生物反应器生产某干扰素时，膀胱生物反应器相比于
3、乳腺生物反应器所具有的优点是 _。 5请根据资料回答问题： 2 资料 1：人体器官移植最大的难题是免疫排斥。猪细胞表面有一些人体没有的抗原，如-l， 3 半乳糖苷转移酶就是其中的一种，因此人体会对移植的猪器官产生免疫排斥反应。 资料 2:可利用基因打靶技术对猪细胞-l，3 半乳糖苷转移酶基因细胞进行改造，去除-l， 3 半乳糖苷转移酶引起的免疫排斥，主要过程如下： 第一步：从猪囊胚中分离出胚胎干细胞（野生 ES） 。需要改造的基因称为“靶基因” 。 第二步：在含有一段与靶基因同源的序列上，插入新霉素抗性基因（neo）完成打靶载体的构 建。 第三步：打靶载体导入胚胎干细胞，与含有同源序列的 DN
4、A 分子重新组合，发生置换，形成 突变 ES 细胞基因。 第四步：突变 ES 细胞筛选、增殖。 （1）除了经济易获取因素外，请写出科学家选择猪器官作为人体器宫移植供体的生物学依据 （写出其中一条即可）_。 （2）资料 2 基因改造过程中， “靶基因”是_，打靶载体的构建过程 相当于基因工程基本操作步骤中的_。插入新霉素抵抗基因后， “靶基因”不能表达的原因是_，插入的新霉素抵抗基因作为标 记基因起到_作用。 （3）利用_技术，使突变 ES 细胞增殖、分化，培育出不合成1，3 半乳糖苷转 移酶的猪器官，但得到的器官还不能直接移植入人体，原因是_。 （4）基因打靶技术给人体移植器官短缺难题的解决带
5、来了可能，该项技木能精准定位进行基 因改造是由于_。 3 6. 图 1 表示含有目的基因 D 的 DNA 片段长度（bp 即碱基对）和部分碱基序列，图 2 表示一种质 粒的结构和部分碱基序列现有 MspI、BamHI、MboI、SmaI 4 种限制性核酸内切它们识别的碱基 序列和酶切位点分别为 CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG （1）若用限制酶 SmaI 完全切割图 1 中 DNA 片段，其产物长度分别为。 若图 1 中虚线方框内的碱基对被 TA 碱基对替换，那么基因 D 就突变为基因 d。从隐 形纯合子中分离出图 1 及其对应的 DNA 片段， 用限制酶 Sma I 完全切割，
6、 产物中共有_ 种不同长度的 DNA 片段。 （2） 为了提高试验成功率， 需要通过_技术扩增目的基因， 以获得目的基因的大量拷贝。 该方法也是检测_多样性的最简单方法。 （3）若将图 2 中质粒和目的基因 D 通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应 选用的限制酶是_。 （4）在选出的大肠杆菌内基因 D 能成功表达的原因是_。其表达 产物是一条多肽链，如考虑终止密码，则其至少含有的氧原子数为_。 （5）为了筛选出成功导入含目的基因 D 的重组质粒的大肠杆菌，首先将大肠杆菌在含 _的培养基上培养，得到如图 3 的菌落。 再将灭菌绒布按到培养基上，使 绒布面沾上菌落，然后将绒布按到含另
7、一种抗生素的培养基上培养，得到如图 4 的结果 （空圈表示与图 3 对照无菌落的位置） ， 请在图 3 中圈出一个含目的基因的重组质粒的大 肠杆菌的菌落。 7. 科学家发现细菌细胞中存在清除入侵病毒 DNA 的功能系统 （见下图 1） ， 并发明了 CRISPR/Cas9 4 基因编辑技术，目前已成为生物科学领域最热门的基因操作技术。下图 2 是科研人员运用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术（其中表达载体 1 的作用是在受体细胞中控制合成 CRISPR 复合体， 表达载体 2 可以与相应 DNA 的同源区进行互换、重组） ，成功地将基因 A 精确导入到绒山羊细胞 内的甲、乙两个基因之间，并
8、和绿色荧光蛋白基因一起表达的过程示意图。请回答。 （1）由图 1 可知，a 过程需要的酶是_，CRISPR 复合体中 crRNA 的主 要功能是，而 Ca9 蛋白催化断裂的化学键 是。 细菌的这种清除能力的生理意义是。 （2）结合对图 1 的理解，图 2 中表达载体 1 首先要表达出含有序 列的 crRNA 和 Cas9 蛋白，以结合形成 CRISPR 复合体。 （3）根据图 2，基因表达载体 2 上需要加入：基因 A、绿色荧光蛋白基因、基因甲片 段、基因乙片段等四种 DNA 片段，这 4 种片段在载体上的正确排列顺序应是 _（用序号代表相应片段） 。 （4）实验室一般会将重组 DNA 导入山羊的胚胎干细胞中，以培育、筛选出转基因山羊，选 择胚胎干细胞作为受体细胞的主要依据是。 （5） 与传统的基因工程相比较， 运用 CRISPR/Cas9 基因编辑技术培育转基因生物的明显优点 是。
