《【最新word论文】微小染色体维持蛋白5在甲状腺肿瘤中的表达与意义【临床医学专业论文】》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【最新word论文】微小染色体维持蛋白5在甲状腺肿瘤中的表达与意义【临床医学专业论文】（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1微小染色体维持蛋白 5 在甲状腺肿瘤中的表达与意义作者：王静马金龙王强修刘莹【摘要】目的： 检测微小染色体维持蛋白 5(Mcm5)在甲状腺肿瘤组织中的表达，探讨 Mcm5 在甲状腺癌诊断中的辅助作用。方法： 采用免疫组织化学法检测 10 例结节性甲状腺肿、15 例甲状腺腺瘤(FA)和 49 例甲状腺癌组织中 Mcm5 蛋白的表达。结果: Mcm5 只在甲状腺未分化癌(UTC)、髓样癌(MTC)和乳头状癌(PTC)中表达，其标记指数(LI)分别为29.1412.32，10.116.51，2.602.11，Mcm5 在甲状腺肿、 FA 中未见表达。Mcm5 蛋白表达在 UTC 与 FA 间，MT
2、C 与 FA 间，PTC 与 FA 间差异均有显著性(P0.05)；Mcm5 蛋白表达与甲状腺癌恶性进展有关，与患者的淋巴结转移无关。结论: Mcm5 可反映 UTC、MTC 和 PTC 中细胞的增殖活性，是辅助诊断甲状腺未分化癌、髓样癌及乳头状癌的有效指标。 【关键词】 甲状腺肿瘤微小染色体维持蛋白 5免疫组织化学Mcm5 protein expression in thyroid carcinoma【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression of minichromosome maintenance protein 5 (Mcm5
3、) in thyroid tumor tissues. Methods: The expressions of Mcm5 in 10 cases of thyroid nodular goiter, 15 cases of thyroid adenoma and 49 cases of thyroid carcinoma were detected by S-P immunohistochemical techniques. Results: Label Indexes of Mcm5 in undifferentiated carcinoma of throid (UTC), medulla
4、ry carcinoma (MTC) and papillary carcinoma(PTC) were 29.1412.32, 10.116.51，2.602.11, respectively. Mcm5 was negative in other tumor tissues. Mcm5 protein had significant difference between UTC and thyroid adenoma (FA), MTC and FA, and PTC and FA (P0.05). The expression of Mcm5 was related to the mal
5、ignant progression of thyroid tumors but was not correlated with the lymph nodes metastasisConclusion: Mcm5 might be regarded as a parameter in diagnosis of UTC, MTC and PTC for evaluating the degree of proliferating activity.【KEY WORDS】 Thyroid carcinomaMinichromosome maintenance protein 5Immunohis
6、tochemistry细胞的恶性增殖失调导致肿瘤的发生，目前对细胞生长调控机制的研究提出DNA 复制起始调控在细胞生长调控中占有核心作用。微小染色体维持蛋白(Minichromosome maintenance proteins ,Mcm)参与了 DNA 复制起始调控，国内外已有研究表明该家族成员 Mcm5 可作为不典型增生和肿瘤的生物学标记物1 ，2但目前国内尚未见有关其在甲状腺肿瘤组织中报道。我们应用 S-P 免疫组化技术检测甲状腺肿瘤组织中 Mcm5 的表达，旨在探讨甲状腺癌发生发展过程中 Mcm5 表达的意义，为甲状腺肿瘤良恶性鉴别诊断提供帮助。1资料与方法1.1临床资料研究标本取自
7、19972006 年山东省立医院和山东省肿瘤医院手术切除标本共 74 例。患者年龄 2075 岁，平均 45 岁；男 24 例，女 50 例。其中结节性甲状腺肿 10 例，甲状腺腺瘤 15 例，甲状腺癌 49 例。49 例甲状腺癌按 WHO 组织学分类，滤泡癌（FTC）13 例，乳头状癌（PTC）20 例，髓样癌（MTC）9 例，未分化癌（UTC）7 例。49 例甲状腺癌中淋巴结转移者 22 例。所有标本均做 4m 连续切片。1.2检测方法免疫组化试剂采用 SP 法，DAB 显色。SP 试剂盒和鼠抗人Mcm 单克隆抗体（浓缩型）均购自美国 Serotec 公司，工作浓度 1150。用已知宫颈癌
8、作阳性对照，PBS 代替一抗作阴性对照。1.3结果判定标准Mcm5 阳性染色定位于细胞核，出现棕黄色颗粒为阳性。增殖指数计算方法：随机选择 10 个高倍视野，观察 1000 个癌细胞，计算阳性细胞的百分比，则 Mcm5 标记值为：阳性细胞总和1000l00。1.4统计学方法所有数据采用均数标准差( xs) 表示, 两个均数比较用 t 检验。实验数据均采用 SAS 统计软件分析处理。2结果2.1Mcm5 在甲状腺肿瘤中的表达Mcm5 蛋白在 UTC、MTC 及 PTC 中均有阳性表达，FTC、腺瘤及结节性甲状腺肿中均为阴性。Mcm5 在 UTC、MTC 和 PTC 中的标记指数（LI）分别为 2
9、9.1412.32，10.116.51，2.602.11。与腺瘤比较，Mcm5 蛋白在 UTC、MTC 和 PTC 的表达差异均有统计学意义(P0.05)。见表 1。2.2Mcm5 与淋巴结转移的关系49 例甲状腺癌中，有淋巴结转移者 22 例，无淋巴结转移者 27 例。在有淋巴结转移组和无淋巴结组的 LI 分别为9.3211.88，5.2610.13(P=0.2125)。见表 2。3讨论真核生物中，为保证遗传物质精确传递到子代，一个细胞周期中 DNA 只能复制一次。DNA 复制的核心机制是在特定的复制起始点首先由一系列的复制起始因子主要包括起始识别复合物(ORC)、细胞分裂周期蛋白 6(Cd
10、c6)、Cdc10 依赖性的转录因子 1（Cdt1）和 Mcm2-7 顺序性装载于染色质上而形成复制前复合体(Pre-RCs)2 。G1/S 期，Pre-RCs 在至少两种激酶 CDK 和 Cdc7/Dbf4 作用下形成起始前复合体(Pre-ICs)，构建双向复制叉，从而构建 S 期 DNA 复制的能力33 。Mcm5 是保守于所有真核生物的微小染色体维持蛋白家族的一员，与 DNA 复制有密切关系。Mcm 基因是影响微染色体有丝分裂稳定性的主要基因4 ，其编码的 Mcm 蛋白家族由 6 个结构高度同源的亚单位组成，被认为是复制准许因子(RLF)中的一个重要成员。Mcm 蛋白之间可以相互作用，组
11、成不同的复合物形式，Mcm2/3/4/5/6/7、Mcm4/6/7、Mcm2/4/6/7 及 Mcm3/5，其中只有 Mcm4/6/7 有 DNA解螺旋酶活性、ssDNA 结合活性和依赖于 DNA 的 ATPase 活性，能在起始点能解开一段双链 DNA，并在复制叉的延伸中起关键作用。Mcm3/5 则有限制 Mcm4/6/7解螺旋酶活性的作用。Mcm 蛋白水平在细胞周期中是变化的，G0 期最低，G1 期与染色质结合在一起，G1 后期达峰值，进入 S 期，CDK 与 DDK 共同调节复制起始点并构建双向复制叉，Mcm 从染色质上不可逆地解离出，直至 M 期呈游离的微小染色体。DNA 解链后 AT
12、R、ATM 被激活，分别磷酸化 Mcm2、Mcm3，进而抑制 DNA再复制，同时 ATR、ATM 通过 Chk1、Chk2 下调 cdk2/cyclinE、Cdc25A 与Cdc7/Dbf4，从而抑制复制的起始及 DNA 的合成5 。Mcm 在复制期间不再装配前复制复合物，以防 DNA 复制在一个细胞周期内再次启动并确保每个细胞周期DNA 复制的起始和延伸仅发生一次。Mcm 蛋白除参与 DNA 复制外，在 DNA 转录、染色质重建及维持基因组稳定方面也发挥了重要作用。Mcm 蛋白复合物通过与RNA 聚合酶全酶之间的相互作用涉及转录调控，通过与 STAT1 转录活化结构的相互作用活化转录6 。大
13、量研究表明，Mcm 蛋白能够敏感而特异地反映细胞的增殖情况，是较 Ki67 更为可靠的增殖指标，在判断肿瘤的恶性度及评估预后方面具有重要意义7,8。 目前，国内鲜见有关 Mcm 蛋白家族在甲状腺肿瘤组织中表达情况的报道，国外的报道较少，结果也不一致。Teresa Guida 等9人检测 Mcm5 与 Mcm7 抗体在正常甲状腺、PTC 和 UTC 中的表达，并与 PCNA 对比，结果显示 UTC 中 Mcm5 表达阳性率为 65%，Mcm7 为 73%，均高于 PCNA，正常甲状腺及 PTC 为阴性。MarKC 等10提出 Mcm2 有助于临床鉴别诊断 MIFC 与 FA。本实验检测了该家族成
14、员 Mcm5 在 74 例甲状腺肿瘤组织中的表达。我们发现 Mcm5 在 UTC，MTC 及 PTC 中有特异性细胞核阳性着色，FTC、腺瘤及结节性甲状腺肿中均为阴性。UTC 恶性程度最高，其 LI 也最高 ，UTC 与腺瘤间差异有显著性(P0.05)，提示 Mcm5 是反映 UTC 细胞增殖的有效指标。其次，MTC 恶性程度仅次于 UTC，其 LI 较高 ，PTC 中 LI 最低 ，与其多分化较好有关。至于滤泡癌，本实验中 Mcm5 未检测到明显阳性着色细胞核，只在肿瘤侵袭边缘见有细胞质中度着色和轻度着色的个别细胞核，鉴于此，不作为阳性判断。Mcm5 在 MTC与腺瘤间，PTC 与腺瘤间差异
15、亦有显著性(P0.05)，提示 Mcm5 也是反映 MTC及 PTC 细胞增殖的有效指标。由此可见，甲状腺癌发生过程中呈过表达状态，随肿瘤恶性程度增高，其细胞增殖活性提高，表明癌细胞生长失控，DNA 合成紊乱，LI 能反映出癌细胞的恶性行为。我们分析发现，Mcm5 蛋白表达与甲状腺癌淋巴结转移无关。总之，Mcm5 参与了 UTC、MTC 与 PTC 的恶性进展，能反映其肿瘤细胞的增殖活性，有助于辅助诊断 UTC、MTC、PTC 与 FA。【参考文献】41 Freeman A, Morris LS, Mills AD, et al. Minichromosome maintenance prot
16、eins as biological markers of dysplasia and malignancyJ. Clin Cancer Res, 1999,5(8):2121-2132.2 Nishitani H, Lygerou Z, Nishimoto T, et al. The Cdt1 protein is required to license DNA for replication in fission yeastJ. Nature, 2000,404(6778):625-628.3 Lei M, Tye BK. Initiating DNA synthesis: from recruiting to activating the MCM comp lexJ. Cell Sci, 2001,114(8):1447-1454.4 Yu Z, Feng D, Liang C. Pairw
