抗凝物质与纤溶活性的检验

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1、抗凝系统检验 纤溶活性检验,抗凝系统检验,抗凝血酶 （AT） 蛋白C （PC） 蛋白S （PS） 组织因子途径抑制物（TFPI）（自学） 肝素、类肝素物质 血浆狼疮抗凝物 血浆凝血因子抑制物（自学）,抗凝系统检验,抗凝血酶 （AT） 蛋白C （PC） 蛋白S （PS） 组织因子途径抑制物（TFPI）（自学） 肝素、类肝素物质 血浆狼疮抗凝物 血浆凝血因子抑制物（自学）,抗凝血酶检测,Antithrombin activity, AT:A 发色底物法 Antithrombin antigen, AT:Ag 免疫火箭电泳 ELISA 免疫比浊法,AT活性检测原理：,发色底物法反应原理：,血浆中的凝

2、血酶抑制物,肝素辅因子II ，凝血酶特异的丝氨酸蛋白酶抑制剂,临床意义 AT降低： 遗传性AT缺陷: AD，易栓症（thrombophilia) Type,Type ，杂合子在40%-60%,遗传性AT缺乏的临床特点： 年轻（40-45）发生血栓 有静脉血栓家族史 复发性静脉血栓形成 少见部位的血栓形成 怀孕期间血栓形成 肝素抵抗,临床意义,获得性AT缺乏： 合成减少（肝病，早产儿） 丢失过多 （肾病综合征） 消耗增加 （ DIC） 药物诱导 （肝素、L-门冬酰胺酶） AT升高：口服抗凝药，急性出血期等,抗凝系统检验,抗凝血酶 （AT） 蛋白C （PC） 蛋白S （PS） 组织因子途径抑制物（

3、TFPI）（自学） 肝素、类肝素物质 血浆狼疮抗凝物 血浆凝血因子抑制物（自学）,APC,Domain structure of thrombomodulin,The protein C anticoagulant pathway,血浆蛋白C（PC）的检测,PC:activity , PC:A 凝固法（APTT） 发色底物法 PC:antigen , PC:Ag 免疫火箭电泳,血浆蛋白C（PC）活性检测,凝固法-APTT,chromogenic substrate assay,血浆蛋白C（PC）检测,PC活性检测方法评价,凝固法影响因素多，如存在狼疮抗凝物质、F活性升高、F变异等。 若存在AP

4、C抵抗时，血浆凝固时间假性缩短。可用乏PC的基质血浆进行稀释以纠正。 确诊遗传性PC缺乏，活性测定应选发色底物法。,血浆蛋白C（PC）抗原检测,ELISA,Classification of protein C deficiency,type，type 纯合子0-20%，杂合子50%,1. Hereditary protein C deficiency,2. Warfarin-induced skin necrosis（WISN),oral anticoagulant therapy with vitamin K-antagonists such as warfarin transient b

5、ut severe hypercoagulable state microvascular thrombosis,临床意义,3. Acquired protein C deficiency,DIC Liver disease Vitamin K-deficiency Malignancy Adult respiratory distress syndrome Neonatal period 4.Elevated PC levels Diabetes Nephrotic syndrome Late pregnancy Oral contraceptives,临床意义,抗凝系统检验,抗凝血酶 （A

6、T） 蛋白C （PC） 蛋白S （PS） 组织因子途径抑制物（TFPI）（自学） 肝素、类肝素物质 血浆狼疮抗凝物 血浆凝血因子抑制物（自学）,The protein C anticoagulant pathway,free PS:activity, FPS:A 凝固法：PT free PS:antigen, FPS:Ag 胶乳凝集比浊法 免疫火箭电泳,血浆蛋白S（PS）检测,Free PS activity assay-PT,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,PS,Free PS activity assay- 胶乳凝集比浊法,C

7、4bBP,Classification of protein S deficiency,Type insufficient quantity Type abnormal function Type increased clearance of free PS,临床意义 1. Increase with age 2. Acquired protein S deficiency Decreases during pregnancy, in neonates and use of oral contraceptives Decreases during DIC, liver disease Decr

8、eases during anti-vitamin K therapy,临床意义 3. Hereditary protein S deficiency Type II deficiency rare Type I and Type III different phenotypic expressions of the same protein S genotype about 140 different mutations have been reported No mutations found in about 40% of the patients,抗凝系统检验,抗凝血酶 （AT） 蛋白

9、C （PC） 蛋白S （PS） 组织因子途径抑制物（TFPI）（自学） 肝素、类肝素物质 血浆狼疮抗凝物 血浆凝血因子抑制物（自学）,血浆肝素及类肝素物质的检测,检测原理： 1. 甲苯胺蓝纠正试验TT+甲苯胺蓝 2. 血浆肝素定量发色底物法，抗a活性检测 UFH：抑制thrombin、FXa LMWH：抑制FXa,临床意义：,1. 肝素增多：抗凝治疗、体外循环、血液透析等 肝素浓度监测，0.2-0.4U/ml。 2. 类肝素物质增多：严重肝病、SLE、DIC、某些恶性肿瘤、 肾病综合征等,抗凝系统检验,抗凝血酶 （AT） 蛋白C （PC） 蛋白S （PS） 组织因子途径抑制物（TFPI）（自学

10、） 肝素、类肝素物质 血浆狼疮抗凝物 血浆凝血因子抑制物（自学）,狼疮抗凝物（Lupus anticoagulant，LA）,狼疮抗凝物是一种针对带负电荷磷脂的自身抗体，是抗磷脂抗体的一种 抗心磷脂抗体和抗2糖蛋白1抗体 在体外，可阻断凝血酶原转变成凝血酶，进而延长磷脂依赖性凝血试验的凝固时间 在体内，促进血液凝固,检测原理,RVVT or APTT LAC 筛查试验 延长 加入正常血浆后，仍延长 LAC 确认试验 加入过量磷脂中和LAC后，凝固时间缩短或恢复正常，确认血浆中存在LAC 比值计算：SR、CR、NLR,临床意义,LA阳性可见于： 自身免疫性疾病、复发性流产、磷脂综合征、易栓性疾病

11、、动静脉栓塞 、恶性肿瘤,纤溶活性的检验,1. 纤溶有关组分的检测 血浆纤溶酶原，PLG 血浆组织型纤溶酶原活化剂 血浆纤溶酶原活化抑制物 血浆2-抗纤溶酶 血浆纤溶酶-抗纤溶酶复合物 2. 纤溶降解产物的检测 血浆纤维蛋白（原）降解产物，FDPs D-二聚体 血浆鱼精蛋白副凝固试验，3P 血浆纤维蛋白肽B1-42与B15-42,血浆纤溶酶原（PLG）的检测,检测原理： PLG:A 发色底物法 PLG:Ag ELISA,临床意义 降低：纤溶活性增高 合成减少：肝实质损伤 消耗增多：DIC、溶栓治疗、原发性纤溶亢进等 异常PLG血症：活性降低，含量一般正常 遗传性PLG缺乏：极少见 升高：纤溶活

12、性降低 血栓前状态、血栓性疾病，某些恶性肿瘤、糖尿病,方法评价： 发色底物法简便、快速，影响因素多，反映纤溶的灵敏度较低,血浆组织型纤溶酶原活化剂（t-PA）检测,检测原理： t-PA:A 发色底物法 t-PA:Ag ELISA,临床意义,增高：纤溶活性增强 原发性与继发性纤溶亢进 减低：纤溶活性减低 高凝状态、血栓性疾病、手术、口服避孕药 溶栓治疗监测,血浆纤溶酶原活化抑制剂（PAI）检测,检测原理： PAI:A 发色底物法 PAI:C SDS-PAGE,利用t-PA-PAI形成1:1无活性复合物,临床意义,增高：提示发生血栓的风险增加 减低：提示出血的风险增加 PAI-1是急性时相反应蛋白

13、，与t-PA联合检测,纤溶活性的检验,1. 纤溶有关组分的检测 血浆纤溶酶原，PLG 血浆组织型纤溶酶原活化剂 血浆纤溶酶原活化抑制物 血浆2-抗纤溶酶 血浆纤溶酶-抗纤溶酶复合物 2. 纤溶降解产物的检测 血浆纤维蛋白（原）降解产物，FDPs D-二聚体 血浆鱼精蛋白副凝固试验，3P 血浆纤维蛋白肽B1-42与B15-42,凝血酶 因子a 非交联 交联 纤维蛋白原 纤维蛋白 纤维蛋白 纤溶酶 纤溶酶 纤溶酶,X、Y、D、E，B142， A、B、C、H,X、Y、D、E， B142， B 1542， A、B、C、H,X、Y、D、E， D-二聚体 DD/E、DY/YD YY/DXD等,FPA,FP

14、B,FDPs,D-二聚体,B142 B1542,临床应用：,升高：血栓前状态与血栓性疾病，eg. DVT、DIC、肺栓塞、心梗、脑梗等，妊娠期 原发性与继发性纤溶鉴别：D-二聚体、B1542 治疗监测： 溶栓治疗有效时，D-dimer先增高，后逐渐下降；含量持续升高或下降缓慢，提示药物用量不足。 DIC抗凝治疗中，高水平的D-dimer持续下降，间接说明凝血过程在减缓或中止，治疗有效；而持续升高说明治疗无效。,D-dimer与FDPs组合分析,纤溶活性正常,原发性纤溶,DIC, 溶栓治疗,FDPs假阴性？,血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验（3P）,原理：继发性纤溶时，形成可溶性FM-FDP复合物。鱼

15、精蛋白可使FM-FDP解离，FM-FM自行聚合沉淀，出现副凝固。 临床意义： 阳性：DIC早、中期 阴性：DIC晚期，原发性纤溶亢进 原发性与继发性纤溶鉴别 手工操作，现已少用。,习题,关于抗凝血酶的叙述，错误的是（ ） A.它是血浆的正常成分 B.它是一种抗丝氨酸蛋白酶 C.它可封闭Fa、Fa、Fa 、Fa、Fa的活性中心 D.它由肝细胞和血管内皮细胞产生 E.在缺乏肝素的情况下，它的抗凝作用更强,D-二聚体增高不见于下列哪种疾病（ ）。 A.肺梗死 B.下肢静脉血栓形成 C.DIC D.原发性纤溶亢进症 E.急性早幼粒细胞白血病,血浆PT明显延长时缺乏的凝血因子最可能是( )。 A.、 B.、 C.、 D.、 E.、,底物显色法的实质是（ ）。 A光电比色原理 B免疫法 C干化学法 D超声分析法 E比浊法,引起原发性纤溶的原因，下列哪一项是正确的。 A.因子a B.激肽释放酶 C.凝血酶 D.tPA E.SK,下列哪一组复合物是凝血酶原酶。 Aa、a、Ca2+、PF3 Ba、a、Ca2+、PF3 C、a、Ca2+ DF：Ag、：C E、a、Ca2+,THANK YOU,