1KGF 在乳腺癌的表达与临床意义作者：王秀梅 黎莉 郝静 张芳 王妍 刘友德【摘要】目的：探讨 KGF 蛋白在人乳腺癌的表达与意义，与临床病理因素及生物学指标的相关性方法：采用免疫组化方法检测 KGF 在 63 例乳腺癌组织中的表达，并与正常乳腺组织对照结果：63 例乳腺癌组织中 34 例肿瘤细胞表达KGF（54.0%） ，正常乳腺上皮细胞未表达（P＜0.01） ，在乳腺癌间质细胞和正常乳腺组织间质细胞表达率分别为 34.9%和 16.7%（P＞0.05） 其在肿瘤细胞中的表达与低分化相关，与 ER、PR 呈负相关，与 Ki67 呈正相关，与 Ki67 的协同表达与淋巴结转移正相关结论：KGF 在乳腺癌肿瘤细胞的表达可能促进乳腺癌的发生发展，并且与低分化、预后不良有关关键词】角质细胞生长因子乳腺肿瘤病理学，临床Expression of KGF in human breast cancer and its clinical significance【ABSTRACT】Objective:To investigate expression of keratinocyte growth factor(KGF)and its clinical significance in human breast cancer and their correlations with clinicopathological features and biomarkers.Methods:The expression of KGF in 63 cases of breast cancer and 30 cases of normal breast tissue were detected by immunohistochemistry.Results:Of the 63 cases of breast cancer,KGF was expressed in tumor cells in 34 cases(54.0%).While it was not detected in epithelial cells in normal breast tissue.The difference between them had remarkably statistical significance.The expression rate of KGF in mesenchymal cells in breast cancer and normal breast tissue was 34.9% and 16.7%.The difference between them was not remarkable.The expression of KGF in tumor cells had correlation with low differentiation degree,had a negtive correlation with ER and PR and a positive correlation with Ki67.The coexpression of KGF and Ki67 had a positive correlation with lymph node metastasis.Conclusion:The expression of KGF in tumor cells was possibly involved in the development of breast cancer,and had correlations with low differentiation degree and bad prognosis.【KEY WORDS】Keratinocyte growth factorMammary neoplasmsPathology,clinical近年来发现，角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）与癌症如肺癌［1］ 、乳腺癌［2，3］ 、卵巢癌［4］ 、前列腺癌［5，6］ 、结直肠癌［7］ 、宫颈癌［8］的发生发展密切相关。
已证实［2］重组人 KGF 以剂量依赖模2式明显地刺激正常乳腺和乳腺癌上皮细胞的增生，鼠成纤维细胞来源的 KGF 可促进 ER（+）乳腺癌细胞（MCF7 和 T47D）增生和迁移［3］ 本实验采用免疫组化的方法检测 63 例乳腺癌组织中 KGF 的表达以及其表达与 ER、PR、CerbB2、Ki67表达的相关性，结合临床病理因素，分析其临床意义1 资料与方法1.1 标本来源 山东大学齐鲁医院经病理检查确诊的乳腺癌 63 例，均为女性年龄 29~82 岁，中位年龄 49 岁Ⅰ期 19 例，Ⅱ期 37 例，Ⅲ期 7 例浸润性导管癌 44 例，浸润性小叶癌 7 例，粘液腺癌 2 例，导管内癌 8 例，小叶原位癌 2 例组织学分级采用 Nottingham 改良方案，低分化、中分化和高分化分别为 9 例、32 例、22 例30 例正常乳腺组织作为对照1.2 主要试剂 KGF 抗体（原液）购自美国 SantaCruze 公司，ER、PR、CerbB2、Ki67 抗体（工作液） 、SP 免疫组化试剂盒及 DAB 显色试剂盒均购自北京中杉公司1.3 检测方法 组织标本常规石蜡包埋，切片，烤片SP 免疫组织化学染色方法，按试剂盒说明进行染色，DAB 显色，苏木素复染。
用已知阳性切片作阳性对照，对 PBS 代替一抗作阴性对照1.4 结果判断 每张切片随机取 10 个高倍视野，每个视野观察 100 个细胞，阳性结果呈棕黄色或棕褐色颗粒，以阳性细胞比例的平均值定义为该肿瘤的阳性细胞百分比KGF 阳性细胞为细胞的胞质呈棕黄色，其比例在 10%以上为阳性ER、PR、Ki67 阳性细胞为细胞核呈棕黄色，CerbB2 阳性细胞为膜着色，以阳性细胞＞10%计作阳性1.5 统计学处理 采用 SPSS12.0 for Windows 统计软件包进行数据处理，采用卡方检验和 Spearman 相关分析2 结 果2.1 KGF 在乳腺癌及正常乳腺组织的表达 63 例乳腺癌组织中 34 例呈阳性表达，阳性率 54.0%（图 1A） ；30 例正常乳腺组织中上皮细胞均不表达，阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.01） KGF 在乳腺癌组织间质细胞的表达率为34.9%(图 1B） ，在正常乳腺组织间质细胞为 16.7%，两者差异无统计学意义（P＞0.05） 2.2 KGF 在肿瘤细胞的表达与临床病理因素的关系 KGF 在乳腺癌肿瘤细胞中的表达与患者的年龄、肿瘤大小、浸润程度、淋巴结转移及 TNM 分期均无明显相关（P＞0.05） ，与分化程度呈显著负相关（P＜0.01） 。
见表 1表 1 KGF 在肿瘤细胞中的表达与临床病理因素的关系临床病理2.3 KGF 在肿瘤细胞的表达与 ER、PR、CerbB2 及 Ki67 的关系 KGF 在肿瘤细3胞的表达与 ER、PR 表达呈负相关（P＜0.05） ，与 CerbB2 表达无明显相关（P＞0.05)，与 Ki67 表达呈正相关（P＜0.05） 见表 2表 2 KGF 在肿瘤细胞中的表达与生物学指标的关系生物学指标2.4 KGF 在肿瘤细胞表达与 ER 或 Ki67 的协同表达与淋巴结转移的关系 KGF在肿瘤细胞表达与 ER 的协同表达与淋巴结的转移无明显相关（P＞0.05） ，与Ki67 的协同表达与淋巴结的转移呈正相关（P＜0.05） 见表 3表 3 KGF 在肿瘤细胞的表达与 ER 或 Ki67 的协同表达与淋巴结转移的关系淋巴结转移3 讨 论KGF 是在 1989 年由 Rubin 等人从人胚胎性肺成纤维细胞的生长培养液中分离出来的，KGF 的 cDNA 序列表明它属于成纤维细胞生长因子（FGF）家族，即FGF7［9］ KGF 来源于间质细胞，与上皮细胞表面 KGFR 特异性地结合，以旁分泌的方式刺激上皮细胞有丝分裂。
间质细胞和上皮细胞的这种相互作用参与多种组织、器官如皮肤、胃肠、呼吸道、生殖系统的形成、发育及其预防与修复损伤［10，11］ 诸多实验结果显示，KGF 表达与肿瘤的发生发展存在密切关系，是影响预后的因素之一，寻找和探讨乳腺癌的预后因素和复发风险，是提高乳腺癌疗效的重要环节之一本实验用免疫组化方法证实 KGF 在部分乳腺肿瘤细胞胞质中表达，与 Tamaru［12］的报道符合，而正常乳腺上皮细胞无表达，符合 KGF刺激上皮细胞分裂增生的推理，以及作为影响预后和复发风险的因素之一本实验 KGF 在乳腺癌组织间质细胞与正常乳腺组织间质细胞的表达率无显著性差异，结合 KGF 在乳腺癌细胞中 高表达与正常乳腺上皮的不表达，推测在正常的乳腺组织 KGF 以旁分泌的方式发挥作用，而在乳腺癌组织中 KGF 自分泌和旁分泌同时存在，提示乳腺癌的发生发展在一定程度上与 KGF 的自分泌有关 KGF 在肿瘤细胞的表达与肿瘤细胞的分化程度呈显著负相关，分化程度越差，KGF 的表达率越高，与在喉癌［13］ 、非小细胞肺癌［14］的研究结论一致与ER、PR 的表达呈负相关（P＜0.05） ，提示肿瘤细胞表达 KGF 的患者预后较差。
KGF 的表达与 Ki67 的表达呈正相关（P＜0.05） ，与 Y Zhang［2］等体外实验证实 KGF 可促进乳腺癌细胞增生一致，此外 KGF 与 Ki67 的协同表达与淋巴结的转移呈正相关，提示预后较差体外实验显示鼠成纤维细胞来源的 KGF［3］和重组人 KGF［14］可促进 ER（+）乳腺癌细胞增生和迁移，本实验 KGF 与 ER 的协同表达与淋巴结转移无明显相关本实验证实了 KGF 蛋白在乳腺癌肿瘤细胞胞质中表达，推测乳腺癌的发生发展可能与 KGF 的自分泌有关，而且 KGF 在乳腺癌肿瘤细胞的表达与低分化、预后不良有关因此临床上检测 KGF 表达情况有利于乳腺癌分化程度及转归的评估，KGF 及其受体有可能成为新的靶点，为预防转移和改善预后提供指导参 考 文 献［1］Yamayoshi T,Nagayasu T,Matsumoto K,et al.Expression of keratinocyte growth factor/fibroblast growth factor7 and its receptor 4in human lung cancer:correlation with tumour proliferative activity and patient prognosis［J］.J Pathol,2004,204(1):110118.［2］Zhang Y,Sugimoto Y,Kulp SK,et al.Estrogeninduced keratinocyte growth factor mRNA expression in normal and cancerous human breast cells［J］.Oncol Rep,1998,5(3):577583.［3］Nguyen TN,Zang XP,Pento JT.Keratinocyte growth factor stimulates the migration and proliferation of breast cancer cells in a culture wounding model［J］.Pharmacol Res,2002，46（2）：179183.［4］Parrott JA,Kim G,Mosher R,et al.Expression and action of keratinocyte growth factor (KGF) in normal ovarian surface epithelium and 。