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1、分枝杆菌属及检验分枝杆菌属是一类细长或略带弯曲、为数众多（包括54个种）呈分支状生长的需氧杆菌。因其繁殖时呈分支状生长故称分枝杆菌。本属细菌的主要特点是细胞壁含有大量脂类，可占其干重的60%，这与其染色性、抵抗力、致病性等密切相关。耐受酸和抗乙醇，一般不易着色，若经加温或延长染色时间而着色后，能抵抗3%盐酸乙醇的脱色作用，故又称抗酸杆菌。需氧生长，无鞭毛，无芽胞和荚膜。引起的疾病均为慢性，有肉芽肿病变的炎症特点。分枝杆菌的种类较多，包括结核分枝杆菌、非典型分枝杆菌和麻风分枝杆菌。非典型分枝杆菌是一大群分枝杆菌的总称，与人类有关的非典型分枝杆菌主要有堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、戈分
2、枝杆菌、鸟分枝杆菌、蟾分枝杆菌、龟分枝杆菌、偶发分枝杆菌和耻垢分枝杆菌等。本属细菌无内外毒素，其致病性与菌体某些成分如索状因子、蜡质D及分枝菌酸有关。根据国际分枝杆菌分类研究组（IWGMT）的方案将本属细菌分为三类，即缓慢生长菌、迅速生长菌和不能培养菌。一、结核分枝杆菌在我国引起人类结核病的主要有人型和牛型结核分枝杆菌。（一）生物学特性1.形态与染色 结核分枝杆菌为细长或略带弯曲的杆菌。在培养基中可呈球状或丝状，陈旧培养物或干酪化的淋巴结中可见到分枝状。抗酸染色时因菌体含有大量脂类而不易着色，无论是否经碘液处理，着色后均不易被盐酸乙醇脱色，所以使菌体呈红色。本菌无芽胞、无鞭毛，近年发现有荚膜。
3、2.培养特性 本菌专性需氧，在无氧条件下迅速死亡，在5%10%CO2环境中可刺激其生长。烛缸不适合本菌培养，需用二氧化碳培养箱。培养温度适应范围较大，3540均可生长，最适温度为3537。最适pH为6.56.8。兼性胞内寄生菌，在细胞内外均可发育繁殖，强毒株可长期生存于巨噬细胞内。生长时还需适当的湿度。本菌生长缓慢，最快的分裂速度为18小时一代。在固体培养基上，一般需26周才能长出菌落。菌落呈干燥颗粒状，不透明，乳白色或米黄色，表面呈皱纹状，形似菜花。在液体培养基中生长较快，多为表面生长，形成菌膜，且干燥易碎而沉于管底。此种特性与菌体的疏水性有关。若在液体培养基中加入乳化剂聚山梨酯-80，则呈
4、均匀分散生长。有毒力菌株在液体培养基中可呈索状生长，无毒株则无此现象。结核分枝杆菌营养要求较高，必须在血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能生长。但经多次传代或长期保存的菌种，也能在营养较简单的培养基中生长。3.生化反应 各型结核杆菌均不发酵糖类，能产生过氧化氢酶，耐热触酶试验、聚山梨酯-80水解试验和耐热磷酸酶试验均为阴性，脲酶试验和中性红试验均为阳性。人型结核分枝杆菌烟酸试验、硝酸盐还原和烟酰胺酶试验均为阳性，借此可与牛型结核分枝杆菌鉴别。（二）临床意义1.致病性 结核分枝杆菌主要通过呼吸道、消化道和受损伤的皮肤侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病，其中以通过呼吸道引
5、起的肺结核最多见。肺部感染可分为原发性感染和继发性感染。肺外感染可发生在脑、肾、肠及腹膜等处。该菌不产生内毒素和外毒素和侵袭性酶。可在细胞内、外生长与大量繁殖，致病物质主要是荚膜、脂质、蛋白质。机体对菌体成分和其代谢产物引起免疫损伤以及变态反应，从而导致一系列组织学上的病理变化。2.Koch现象 结核的特异性免疫是通过结核分枝杆菌感染后所产生，试验证明，将有毒结核分枝杆菌纯培养物初次接种于健康豚鼠，不产生速发型过敏反应，而经1014天，局部逐渐形成肿块，继而坏死，溃疡，直至动物死亡。若在812周之前给动物接种减毒或小量结核分枝杆菌，第二次接种时则局部反应提前，于23天内发生红肿硬结，后有溃疡但
6、很快趋于痊愈。此现象为Koch在1891年观察到的，故称为Koch现象。3.结核菌素试验 利用型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。（三）微生物检验1.标本采集 根据感染部位的不同，可采集不同标本。结核患者各感染部位的标本中大多都混有其他细菌，为此应采取能抑制污染菌的方法。若作分离培养，必须使用灭菌容器，患者应停药12天后再采集标本。可采集痰、尿、粪便、胃液、胸水、腹水、脑脊液、关节液、脓液等。2.检验方法（1）涂片检查直接涂片包括：1）薄涂片：挑取痰或其他处理过的标本约0.01ml，涂抹于载玻片上，用萋-尼氏染色（热染法）或Kinyoun（冷染法）抗酸染色，镜检，报告方法：一：全视野
7、（或100个视野）未找到抗酸菌；：全视野发现39个；：全视野发现1099个；：每视野发现19个；：每视野发现10个以上（全视野发现12个时报告抗酸菌的个数）。2）厚涂片：取标本0.1ml，涂片，抗酸染色、镜检，报告方法同上。3）集菌涂片：主要方法有沉淀集菌法和漂浮集菌法。4）荧光显微镜检查法：制片同前。用金胺“O”染色，在荧光显微镜下分枝杆菌可发出荧光。（2）分离培养1）固体培养法：结核分枝杆菌的分离培养对于结核病的诊断、疗效观察及抗结核药物的研究均具有重要意义。培养前针对标本应做适当的前处理，如痰可做4%H2S04或4%NaOH处理2030分钟，除去杂菌再接种于罗氏培养基，375%10%C0
8、2培养，定时观察，至48周。此方法可准确诊断结核杆菌。2）液体培养法：Bacter-460半自动培养方法，Bact，Vitck-3D，全自动快速培养系统。3）噬菌体法。（3）基因快速诊断：PCR反向膜探针杂交，DNA探针，16s rRNA基因序列测定，高效液相色谱（HPLC）监测分枝菌酸。简便快速、灵敏度高、特异性强。但需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。（4）耐药性：结核杆菌对多种抗结核药物产生耐药性，对利福平耐药是由于rpoB的基因突变，链霉素耐药是和编码核糖体S12蛋白的rpsl基因发生突变以及编码16SrRNA的rrs基因发生突变，异烟肼的耐药与过氧化氢酶和过氧化物酶的失活有关。
9、（四）治疗原则 利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素为第一线药物。利福平与异烟肼合用可以减少耐药的产生。对于严重感染，可用吡嗪酰胺与利福平及异烟肼联合使用。二、非典型（非结核）分枝杆菌分枝杆菌属中除结核杆菌和麻风杆菌以外，均称为非结核分枝杆菌或非典型分枝杆菌。因其染色性同样具有抗酸性亦称非结核抗酸菌，其中有1417个非典菌种能使人类致病，可侵犯全身脏器和组织，以肺最常见，其临床症状、X线所见很难与肺结核病区别，而大多数非典型菌对主要抗结核药耐药，故该菌的感染和发病已成为流行病学和临床上的主要课题，与发达国家一样，我国近年来发生率也有增高趋势。以第群鸟-胞内分枝杆菌和第群偶发分枝杆菌及龟分枝杆菌为多
10、。三、麻风分枝杆菌麻风分枝杆菌（M.Leprae）简称麻风杆菌，是麻风病的病原菌。首先由Hansen于1937年从麻风患者组织中发现。麻风分枝杆菌亦为抗酸杆菌，但较结核杆菌短而粗。抗酸染色着色均匀，呈束状或团状排列。为典型的胞内寄生菌，该菌所在的细胞胞质呈泡沫状称麻风细胞。用药后细菌可断裂为颗粒状、链状等，着色不均匀，叫不完整染色菌。革兰阳性无动力、无荚膜和芽胞。麻风分枝杆菌是麻风的病原菌，麻风是一种慢性传染病，也是一种人畜共患病。早期主要损害皮肤、黏膜和神经末梢，晚期可侵犯深部组织和器官，此菌尚未人工培养成功，已用犰狳建立了良好的动物模型。本病在世界各地均有流行，尤以第三世界国家较为广泛。麻
11、风病根据机体的免疫、病理变化和临床表现可将多数患者分为瘤型，结核样型和界限类综合征。治疗原则：早发现，早治疗。治疗药物主要有砜类、利福平、氯法齐明及丙硫异烟胺。一般采用两或三种药物联合治疗。【例题】结核菌素皮肤试验用于检测A.型变态反应B.型变态反应C.型变态反应D.型变态反应E.非变态反应【正确答案】D【答案解析】结核菌素试验利用型变态反应的原理，检测机体是否感染过结核杆菌。 【例题】下列何种细菌在一定条件可形成L型菌A.军团菌B.支原体C.结核分枝杆菌D.流感嗜血杆菌E.衣原体【正确答案】C【答案解析】结核分枝杆菌在体内外经青霉素、环丝氨酸或溶菌酶诱导可影响细胞壁中肽聚糖的合成，异烟肼影响分枝菌酸的合成，巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌后溶菌酶的作用可破坏肽聚糖，均可导致其变为L型，呈颗粒状或丝状。
