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1、药有限公司质量操作编号：密级Agilent1260高效液相色谱仪标准操作规程版本号：执行日期：下次修订时间：文件内容：1、目的12、范围13、职责14、内容15、变更记载和原因4颁发部门：质量部发放范围：质量部 生产部 物流部 人事行政部 设备动力部修订人审核人审核人质量部部门质量部质量部质量部质量部姓名签名日期1.目的：能正确使用仪器,确保化验结果的准确度、精密度，延长仪器使用寿命。2.范围：适用于Agilent1260高效液相色谱仪及色谱数据工作站的操作。3.职责：质量控制检验员。4.内容：4.1 开机：4.1.1 打开计算机，登陆windows操作系统。4.1.2 打开主机各模块电源（从
2、上至下），待各模块完成自检后，再双击桌面“仪器1联机”图标,进入化学工作站，从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面。4.1.3 把各流动相放入溶剂瓶中。4.1.4 旋开排气阀（逆时针），右单击“四元泵”图标出现快捷键，点击“方法”选项进入泵编辑画面。将泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%，打开泵，排出管线中的气体23分钟，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止,查看柱前压力。4.1.5 依此切换到B、C、D溶剂分别排气。4.1.6 将泵的流量设到0.5ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。4.1.7 再将泵的流量设到0.8ml/min，
3、2分钟后将泵的流量设到1ml/min，冲洗色谱柱2030分钟。4.1.8 把缓冲液换成流动相，待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况。4.2 数据采集方法编辑：4.2.1编辑样品信息：由“运行控制”进入“样品信息”，设定操作者姓名，样品数据文件名等。4.2.2编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项.选中项单击“确定”进入下一画面“方法注释”，编辑好单击“确定”进入下一画面“选择进样源”，选中Als单击“确定”进入下一画面“设置方法”进行参数设定。4.2.3四元泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1ml/min,在“溶剂”处输入比例，如：B：80%(A=100-B-C-D
4、)，在右面注释栏中标明各溶剂的名称；设置“停止时间”和“后运行时间”，在“压力限值”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子如：250bar，在“时间表”添加编辑梯度。4.2.4进样器参数设定：在进样模式中输入进样量xxul。“标准进针” 只能输入进样体积此方式无洗针功能。“针清洗后进样” 可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。4.2.5进样器进样程序参数设定：选中使用进样程序，在“函数”中添加相应函数即可按程序进样。4.2.6 TCC（柱温箱）参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度,并选中它,右侧选中“与左侧相同” 使柱温箱的温度左右一致。4.2.7
5、VWD（紫外检测器）参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如0.1min(2s),再设置“停止时间”和“后运行时间”。4.2.8 ELSD(蒸发光检测器)参数设定： 一般检测，雾化室温度设定为50，汽化室温度设定为90， 流速设定为1.2ml/min，对于未知样品，雾化室温度应从低到高摸索确定，其他参数默认即可。4.2.9仪器曲线设置：默认即可。4.2.10 配置ELSD（蒸发光检测器） 打开联机工作站，选择菜单栏“仪器”下“仪器配置”，在弹出的对话框中的可配置模块中选择Varian ELSD(380/
6、385-LC)，点 键将ELSD添加入“已选择的模块”，再选中其中的ELSD点“配置”键，在弹出的对话框中选择确定，在“已选择的模块”中选择VWD【G1314F】点击 （去除）键，点击确定，弹出对话框显示“重新启动后配制将生效！其他更改可能丢失！”，点击“确定”。然后重新启动工作站即可。4.3.11 配置VWD（紫外可见检测器） 打开关联工作站，选择菜单栏“仪器”下“仪器配置”，在弹出对话框中的可配置模块中选择“自动配置”，然后在弹出的对话框中选择“确定”，再选择IP地址项，输入IP地址：192.168.254.11，等待配制成功后，重启工作站即可。4.3 数据处理：4.3.1 从“视图”菜单
7、中单击“数据分析”进入数据分析画面4.3.2 从“文件”菜单选择“调用信号”选中您的数据文件名，单击“确定”。4.3.3 谱图优化,从“图形”菜单中选择“信号选项”从“范围”中选择“自动量程”及合适的显示时间单击“确定”,或选择“自定义量程”调整,反复进行直到图的比例合适为止。4.3.4积分:从“积分”中选择“自动积分”,积分结果不理想,再从菜单中选“积分事件”，选项选择合适的“斜率灵敏度,峰宽,最小峰面积,最小峰高”.从“积分”菜单中选择“积分”选项则数据被积分.如积分结果不理想则修改相应的积分参数直到满意为止。单击保存图标将积分参数存入方法。4.3.5 校正表设计：点击“校正”菜单中的“校
8、正设置”，给出各个参数：点击“确定”；调出建立校正表所需的谱图并对谱图进行图形优化和积分优化；点击“校正”菜单中的“新建校正表；在“新建校正表”栏里选定“自动设定”点击“确定”；在“校正表”中给出正确的“化合物名”和“含量”；如需增加校正点数，给出第二校正点的“含量”，校正表建立完成后点击“确定”，点击“保存图标”将校正表存入方法中。4.3.6 打印报告:从“报告”菜单中选择“设定报告”选项进入画面: 单击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角选中“百分比法”、“面积百分比”其它选项不变单击“确定”。从“报告”菜单中选择“打印”则报告结果将显示到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击“报告”底部的“
9、打印”钮。4.4 关机4.4.1 关机前，用5%甲醇水溶液冲洗柱子和系统10min，流量1ml/min，再用100%甲醇或乙腈冲0.5小时，然后关泵。4.4.2 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。4.4.3 关掉主机电源开关。4.5 注意事项：4.5.1 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。4.5.2 开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力10bar，则应更换排气阀内玻璃过滤白头。4.5.3 流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。4.5.4 流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10-15min。4.5.5 配制10%异丙醇，以每分23滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。第 5 页 (共5页)
