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1、石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、 将器皿在自来水下冲洗干净3、 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过13次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内1224小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗13次 烘干备用。（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制： 成分 强酸液 次强酸液 弱酸液 浓硫酸（ml） 1000 200 100 重铬酸钾（mg） 63 120 100 蒸馏水 （ml） 200 200 1000重铬酸钾 1200g蒸馏水 2000
2、ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1. 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2. 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3. 95%100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。二、常用液体的配制（一）缓冲溶液：1磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7PH7.0）2枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.
3、2：42.8PH6.2）（二）固定剂：1甲醛：10%甲醛福尔马林 100ml蒸馏水 900ml注：实际甲醛含量只有3.64.0%但习惯上都将其视为10%。210中性福尔马林钙固定液甲醛液 10ml蒸馏水 90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀12cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。34%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛 8g蒸馏水 100ml加温至60左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。1N NaOHlN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量氧化钠(NaOH )；分子量40005，当量价11N Na0H的配
4、制方法为：m40005140005g。取40005gNaOH溶解于1L蒸馏水中4%多聚甲醛8%多聚甲醛 50ml0.1M磷酸盐缓冲液 50mlPH7.2先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.24Bouin液：苦味酸饱和水溶液 75ml3640福尔马林液 25ml冰醋酸 5m15改良Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液 45ml95%酒精 45ml3640福尔马林液 5ml冰醋酸 5m16Carnoy液：冰醋酸 10 m1氯仿 30 m1无水乙醇 60 m1以上三者临用前混合，预冷至4后使用。24小时后固定液失效。（三）染色液1Harris苏木精液A
5、液：苏木精 1g无水酒精 10mlB液：铵矾或钾矾 20g蒸馏水 200ml氧化汞 0.5ml冰醋酸 8ml将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期12个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。2Mayer苏木精掖苏木精 1g钾矾或铵矾 50g碘酸钠 0.2g蒸
6、馏水 1000ml水合氯醛 50g枸橼酸 1g将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间510分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。3Hasnsen甲矾苏木精的配制A液：苏木精 1g 无水乙醇 10mlB液：钾矾 20g 蒸馏水 200mlC液：高锰酸钾 1g 蒸馏水 16ml三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器
7、置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化）。4伊红0.51%水溶液或酒精溶液。1水溶性伊红伊红 510g蒸馏水 1000ml冰醋酸 10滴先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。2醇溶性伊红伊红 510g70%90%酒精 1000ml冰醋酸 10滴（四）其它1麻醉剂：24%戊巴比妥钠，1ml/kg体重（45mg/kg）。2各级浓度酒精的配制75%；85%；95%；100%酒精。75%和85%酒精用95%酒精配制；（取75ml95%酒精，加水至95ml，即为75%酒
8、精）3盐酸洒精多用于多种染色过程中的分色，如苏木精染色后分色。配法是在100ml的70酒精内加0.51ml的浓盐酸(Hcl)。用盐酸酒精分色后要经自来水充分冲洗组织切片，去除所含的酸再作其他处理。4碘酒取碘5g，溶于95酒精80ml，再加入20ml蒸溜水即成5生理盐水以氯化纳0.850.90g溶于100m1蒸馏水配成的生理盐水适用哺乳动物石蜡切片制备基本步骤 之二三、取材，固定（一）实验动物的抓取及固定1小白鼠、大白鼠的抓取及固定方法要点：（1）动作要轻缓；（2）不要突然袭击；（3）如发现动物的毛发竖起来时，最好停一会后再抓；（4）将四肢打开，固定在木板或方形蜡板上。2实验家兔的抓取及固定方法
9、要点：（1）随时抚摩其头部；（2）防止被其脚爪抓伤；（3）根据实验要求选择固定方法。3豚鼠的抓取及固定方法要点：先用一只手扣住豚鼠背部，然后抓紧两耳间头颈部的皮肤，用另一只手托起臀部送到动物固定台上。（二）实验动物的编号、标记、分组和被毛去除方法1编号和标记方法（1）染色法标记溶液：3%5%苦味酸 黄色 2%硝酸银 咖啡色（涂后光照10分钟） 0.5%中性红或品红 红色 龙胆紫 紫色编号原则：先左后右，从前到后左前脚为1，左侧腹为2，左后腿为3，头顶为4，腰背部为5，尾基为6，右前脚为7，右侧腹为8，右后腿为9。超过10可用不同的染色的标记液，一种染色为个位，另一种为十位数。（2）挂牌法（3）
10、耳孔法一般来说，小型动物适宜用耳孔法和染色法，中型动物适用于挂牌法。2实验动物的随机分组方法动物实验时，常常需要将选择好的实验动物，按研究需要分成若干个组，分组时为了避免人为因素的影响，常应用随机数字表进行完全随机化的分组。3实验动物被毛去除方法剪毛法拔毛法剃毛法脱毛法：系用化学脱毛剂将实验动物被毛脱去，适用于无菌手术野的准备以及观察动物皮肤血液循环和病理变化。方法：将需脱毛部位的被毛先用弯头剪刀剪去，尽量剪短，勿剪破皮肤。然后用温水将该部位润湿，再用纱布包扎棉球的小棒蘸脱毛剂，在需脱毛部位涂一层，经23min后，用温水洗去该部位脱下的毛，自然晾干备用，切勿用纱布去擦，以免损伤皮肤。脱毛剂配方
11、：（1）硫化钠3g 肥皂粉1g 淀粉7 g 加水适量调成糊状（2）硫化钠8g 溶于100ml水中（3）硫化钠8g 淀粉7 g 糖4 g 甘油5 g 硼砂1 g 加水75ml（三）实验动物处死处死动物的方法很多，无论是采用哪种方法，都要尽力避免使动物长时间陷于痛苦和濒于死亡状态。热爱生命，珍爱动物。1空气栓塞致死法要点：（1）常用于大的动物（如：兔、猫、狗和猴等）；（2）用50100ml注射器一只；（3）此方法迅速、方便，但各脏器淤血明显。2麻醉后处死法注：采用此方法，取材后一定要确定动物是否已死亡，最好再行断颈。（1）吸入麻醉法要点：（1）适用于较小的动物（小白鼠、大白鼠、豚鼠和兔等）；（2）
12、用乙醚浸泡过的脱脂棉；（3）时间大约12分钟；（4）注意防火（2）注射麻醉法要点：（1）适用范围较广；（2）注射方式可采用静脉、腹腔、皮下和肌内注射，最常用的是腹腔注射；（3）注射致死量一般视动物大小而定。3脑、脊破坏法要点：（1）常用于蛙类；（2）用金属针经枕骨大孔进入，破坏大脑和脊髓。4断头处死法要点：（1）常用于小动物；（2）用剪刀剪断颈椎；（3）如果没有特殊要求，最好不要使头和躯干分离。5断椎法要点：（1）常用于大白鼠和小白鼠；（2）一手固定头部，一手拽住实验动物的尾部，轻轻一拉扯断其颈椎，使其脱位，椎管内急性损伤瘫痪或死亡后取材；（3）此方法处死动物组织结构保存较好。（四）实验动物解剖解剖步骤1实验动物被麻醉或处死后，将其；固定在动物解剖台上，用纱布蘸取生理盐水湿润被毛；2从下颌至耻骨联合沿正中线切开皮肤；3打开腹腔：沿肋骨下缘腹正中，用镊子提起腹壁切开腹壁肌肉，至耻骨联合，从肋骨下端向脊柱方向，将两侧腹壁剪开，充分暴露腹腔内脏器；4打开胸腔：用剪刀沿肋骨的肋软骨和骨的连接处由下向上剪开，不要剪断锁骨，剪时应尽量贴着胸内壁，并注意不要剪断胸骨两侧的大血管。然后将肋弓提起，暴露腹腔内脏器。（五）取材取材一定要迅速，应在动物处死后立即进行解剖和切取组织材料，否则会引起细胞发生死后变化（如组织自溶及腐败现象等），进而失去原有的结构，如果进行酶组化染色，将会使大量
