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1、高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验研究的论文【摘要】 目的 建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷 方法 以c18反相柱为色谱柱,甲醇水为流动相。检测波长270nm,用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果 平均回收率为%。r=,线性关系良好。 结论 此方法灵敏、准确,适用于龙胆苦苷的测定。【关键词】 高效液相色谱法 清肝胶囊 龙胆苦苷龙胆为龙胆科植物,其根及根茎含龙胆苦苷,龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法(hplc)测定复方制剂中的龙胆苦苷,其操作步骤简便,样品回收率高,重现性好,结果可靠,现报道如下。1 仪器与试药仪器紫外分光光度计(日本岛津uv-260);高
2、效液相色谱仪(waters510泵,490紫外检测器,740数据处理仪);薄层自动涂铺器(瑞士camag);薄层层析点样台tlc-sp-1(西安市秦西机械厂);离心机800型(江苏医用设备仪器厂);微量进样器(上海医用激光仪器厂)。试药 中性氧化铝(100200目)(上海五四试剂厂);硅胶gf254(青岛海洋化工厂);龙胆苦苷对照品( 提取溶剂的选择:龙胆苦苷为裂环环烯醚萜单糖苷,极性大。清肝胶囊为复方制剂,成分复杂,提取溶剂的选择会影响下一步的薄层分离。因此,试用了甲醇、丙酮、乙酸乙酯等溶剂提取找出最佳提取溶剂。试验表明,甲醇对龙胆苦苷的提取效率高,同时出提出大量糖类水溶性杂质,影响薄层分离
3、,干扰紫外吸收。而乙酸乙酯虽提取效率较差,但提取的糖类等杂质也较少。因此,采用乙酸乙酯甲醇(70:10)的比例混合作提取溶媒;既能定量地提取龙胆苦苷,又能尽可能少地提出杂质,在该溶媒条件下的最大吸收波长为270nm。回收率试验取清肝胶囊样品5份,精密称量,分别加入一定量的龙胆苦苷对照品,照含量测定项下的方法分别测定含量, 计算 回收率。精密度实验样品测定精密度实验取清肝胶囊样品 6份,每份5g,照含量测定项下的方法试验,分别测定含量。薄层层析精密度试验取清肝胶囊样品5g,照含量测定项下的方法试验,在6块薄层板上点样,每块板上点2个点,测定含量。紫外光谱试验取清肝胶囊与空白龙胆制剂各5g,分别照
4、含量测定项下的方法制备供试品溶液,照分光光度法试验,在200350nm间进行重叠扫描。结果表明,在270nm处,制剂中其它原料几乎不影响龙胆苦苷的测定。标准曲线的制备取龙胆苦苷对照品约400mg,照含量测定项下的方法绘制标准曲线。回归方程为conc=17,r=,曲线通过原点,线性相关较好。4 讨论采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷的含量,样品的预处理是关键。在工艺上采用连续回流提取方法提取龙胆苦苷,至提取液近无色时,可提尽龙胆苦苷。其残渣经薄层层析检验,无龙胆苦苷斑点。提取液浓缩后加入水,龙胆苦苷转溶于水中,过滤,可除去提取中带来的脂溶性杂质;水溶液经氧化铝层析柱,甲醇洗脱,大部分色素等杂质被吸附,而龙胆苦苷被洗脱下来。柱层析洗脱过程中,采用100ml甲醇洗脱,龙胆苦苷几乎全部洗下来。采用薄层层析方法,用硅胶gf254板分离,荧光熄灭法定位,龙胆苦苷斑点清晰,有利于刮板。通过试验证实,采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷,方法准确、稳定、可靠。参考 文献 卫生部药政局,