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1、药用植物战骨中黄酮类化学成分及抗氧化作用研究的论文 黄琼，陈丽芬 林翠梧 黎贵卿 韦藤幼 韦万兴【摘要】 目的对药用植物战骨的化学成分进行分离，并对其药理活性做初步研究。方法利用多种色谱技术分离纯化战骨中的黄酮类成分并对药理活性进行研究。根据理化性质和光谱分析鉴定结构。采用抗氧化模型对分离出来的单体进行体外活性筛选。结果从战骨的醋酸乙酯部分中分离得到了2个黄酮类的化合物，分别鉴定为柚皮素(1)、洋芹素(2)；从正丁醇部分分离得到了芹菜素-6,8-二-c-d-葡萄糖苷（vicenin 2）（3）。化合物3为首次从战骨中分离得到。化合物1,2在抗脂质过氧化的药理模型中显示了不同程度的抗氧化活性。结
2、论该植物中的黄酮类成分具有一定的抗氧化作用，这也是首次对该植物的单体成分进行药理活性研究。【关键词】 战骨； 黄酮类成分； 抗氧化abstract：objectiveto study the flavonoids in premna fulva craib and their anti-oxidative activities in vitro. methodscolumn chromatographic techniques were employed for isolation and purification of flavonoids from the plant. the struc
3、tures were elucidated on the basis of the spectral evidence and the physical and chemical character. the flavonoids were tested by the model of lipid peroxidation induced by free radicals in mice liver in vitro. resultstwo flavones, apigenin(1) and naringenin (2) and a flavone c-glcoyside 6,8-di-c-a
4、pigenin(vicenin 2)(3) were isolated from the stem of premna fulva craib. xxpound 1,2 showed anti-oxidation activities. xxpound 3 was isolated from this plant for the first flavone agenclone showed anti-oxidation activities. the pharmacological activities of the pure xxpounds from this plant were als
5、o reported for the first time.key words：premna fulva craib; flavonoids; anti-oxidation战骨，又名土霸王、穿云箭，学名黄毛豆腐柴premna fulva craib.，多分布于广西西南部、云南南部及贵州南部，泰国北部、老挝、越南北部至中部也有分布。它的根、茎、叶都可入药，具有活血散瘀、强筋健骨、驱风止痛的功效。民间常用于治疗腰腿痛、跌打损伤、风湿关节炎及感冒身痛、淋巴结炎、肝区痛等症1，2。黄毛豆腐柴茎的灭菌水溶液（健骨注射液）具有抗炎消肿、镇痛作用，用其治疗肥大性脊椎炎，疗效显著。目前对其化学成分的研究发现含
6、有黄酮类、有机酸类、萜类等成分35，但是未见其单体的活性报道。作者对战骨的醋酸乙酯和正丁醇部分进行了化学成分和药理活性的研究，从中分离得到了3种黄酮类化合物，分别鉴定为柚皮素(1)，洋芹素(2)，芹菜素-6,8-二-c-d-葡萄糖苷（3）。它们的结构通过光谱解析，并与相关文献的数据进行比较而确定，其中化合物3首次从该植物中分离得到。在诸多类型天然抗氧化剂中，黄酮类成分能有效减轻细胞的过氧化胁迫，阻止低密度脂质的过氧化，预防和治疗多种疾病而引起众多学者的兴趣。本实验利用大鼠肝脂质过氧化消除实验，对战骨中的黄酮类成分及其抗氧化活性进行了研究。1 仪器与试剂熔点用显微熔点测定仪（x-4数字显示，北京
7、泰克仪器有限公司）(未校正)测定；紫外uv用uv2501（日本岛津）；ir用thermo nicolet红外光谱仪（nexus470ftir）；液质联用仪（agilent，1100 lc/msd trap sl）；高效液相仪（agilent，1100 trap sl）；制备型高效液相仪（lab alliance,ymc hplc column），核磁共振仪(avance 500, bruker)；柱色谱用硅胶为青岛海洋化工厂产品；聚酰胺,柱层析用100-200目（浙江台州路桥四甲生化塑料厂）；sephadex lh-20为pharmacia产品。各种型号常压、加压色谱柱(订制，广西天然药物研究
8、所)；所用试剂为重蒸工业级或分析纯，10硫酸-乙醇溶液加热显色。脂质过氧化实验用sd大鼠（180200 g）购于广西医科大学实验用动物中心。样品为战骨干燥茎，20XX-07购于广西南宁药材市场，经广西中医学院刘寿养副教授鉴定为马鞭草科豆腐柴属植物黄毛豆腐柴premna fulva craib.的茎，样品标本存放于广西大学化学化工学院。2 方法与结果提取分离战骨的干燥茎(15 kg)经过粉碎后，用70etoh 回流提取2次，提取液合并，减压浓缩得浸膏1 500 g。将浸膏溶于水，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。得到石油醚部分约30 g，醋酸乙酯部分约62 g，正丁醇部分约900 g，取醋酸乙
9、酯部分(20 g)行硅胶柱，用氯仿-甲醇为溶剂系统反复柱色谱分离，并用sephadex lh-20纯化得化合物1（10 mg），2(8 mg)，正丁醇部分（100 g）用聚酰胺柱，乙醇-水溶剂系统梯度洗脱，sephadex lh-20，制备hplc纯化得到化合物3(20 mg)。结构鉴定化合物1无色片晶，mp 243244，盐酸-镁粉反应阳性。1h nmr(cd3cocd3)：(2h, dd,j =, hz，2, 6-h)，(2h, dd, j=, hz，h-3, 5)，(1h, d, j= hz，h-8)，(1h, d, j= hz，h-6)，(1h, dd, j=, 3 hz，h-2)，(
10、1h, dd, j=, hz，h-3e)，(1h, dd, j=, hz，h-3a)；1h nmr光谱数据与文献报道6一致，与柚皮素对照品混合熔点不下降，薄层色谱rf值与柚皮素一致。鉴定化合物为柚皮素(naringenin)。化合物2淡黄色粉末，mp343344，盐酸-镁粉反应阳性，1h-nmr(500 mhz, c5d5n)： (1h, s, h-3)，(1h, d, h-6)， (1h, d, h-8)，(2h,d,j= hz，h-2 ,6)，(2h, d, j=, h-3，5)。1h nmr光谱数据与文献报道7一致，与洋芹素对照品混合熔点不下降，薄层色谱rf值与洋芹素一致。鉴定化合物为洋
11、芹素( apigenin)。化合物3 黄色粉末(甲醇)，mp218220，盐酸镁粉反应阳性，molish反应呈阳性，提示该化合物为黄酮苷类化合物。uv（meoh）:272,330; (+alcl3): 279,305,351,387; (+alcl3/hcl): 280,304,344,383sh;(+naoac):282,395; esims(positive mode) m/z 595m+h+, 475(m+h)-120+,355 (m+h)-2(120)+1, (negative mode )m/z 593 m-h-, 473(m-h)-120-, 383(m-h)-(120+90)-,
12、353(m-h)-2(120)-; 1h nmr(500 mhz, dmso-d6 )：(1h, s, h-3)，(2h, d, j= hz，h-2, 6)， (2h, d, j = hz，h-3,5)，(1h, d, j= hz，h-1”)， (1h ,d,j= h z，h-1)。13c nmr (500 mhz，dmso-d6)：(c-2)，(c-3)，(c-4)，(c-5)，(c-6)， (c-7)，(c-8)， (c-9)，(c-10)， (c-1)，(c-2)，(c-3)，(c-4)，(c-5)，(c-6)，(c-6)，(c-5)，(c-4)， (c-3”)， (c-2)，(c-1)
13、， (c-6 ) (c-5)， (c-4)， (c-3)， (c-2)，(c-1)。化合物3的1h nmr谱中无特征性的a 环质子信号；且 13c nmr谱中的2组葡萄糖端基碳信号分别位于(c-1 of glc)，(c-1 of glc)，提示该化合物可能为6，8位取代的葡萄糖碳苷类化合物。化合物3的uv、ms数据和1h nmr和13c nmr数据与文献报道8的芹菜素-6，8-二-c-d-葡萄糖苷基本一致，故确定化合物3为芹菜素-6，8-二-c-d-吡喃葡萄糖苷(6，8-di-c-glucopyranosyl apigenin, vicenin 2)。肝脂质过氧化实验参照文献9采用大鼠体外半胱
14、氨酸-铁（feso4/cys模型）诱导的肝线粒体脂质过氧化模型，丙二醛（mda）是脂质过氧化反应的代谢产物，其产生量的多少反映组织中脂质过氧化程度。考察样品对生成的mda是否具有抑制作用，即测定添加前后mda的含量的变化。mda显色后在532nm波长处有最大吸收，本文以532nm处的吸光度表示mda的含量。采用抑制率(inhibiting rate，)表达样品对半胱氨酸-铁诱导的大鼠肝线粒体脂质过氧化的抑制作用。抑制率（%）=(feso4/cys模型组mda-加样品组mda)feso4/cys模型组mda 100实验结果表明，化合物1，2均有一定的抗脂质过氧化作用，结果见表12；化合物3的抗氧
15、化作用不明显。结果见表3。化合物1、2对大鼠肝细胞mda生成的影响不同浓度的化合物1、2加入组与生理盐水对照组比较，mda吸光度均有所下降，表明化合物1、2对半胱氨酸-铁诱导的大鼠肝细胞mda生成具有抑制作用，并且浓度越高，抑制作用越明显，柚皮素和洋芹素的半抑制浓度ec50分别为10-4mol/l，10-4mol/l，结果见表12。表1 化合物1的脂质过氧化效果（略）化合物3对大鼠肝细胞mda生成的影响加入的化合物3在低浓度时，与对照组的mda吸光度比较变化不大，且无线性关系，说明抗氧化作用不明显；在浓度较高时，mda吸光度大于对照组，说明脂质过氧化反应加剧，mda生成增多。结果见表3。 表2 化合物2的抗脂质过氧化效果（略）表3 化合物3的浓度和mda含量（略）3 讨论自由基损伤与衰老及多种疾病的发生、发展有着密切的关系。在某些病理情况下，活性氧自由基代谢失衡、含量升高、脂质过氧化水平提高，这种不平衡会对机体造成损伤，引发炎症、癌症等多种疾病。作者在植化分离研究的基础上，对战骨茎中的黄酮类成分进行了初步的体外抗氧化活性研究，以期阐明其相关作用机制。结果表明，战骨中的黄酮类成分，特别是黄酮苷元均有一定的抗氧化作用，并且含酚羟基的化合物显示了较强的活性，推测其抗氧化活性可能与酚羟基有关10。对化合物3，活性不明显，并且还显示出
