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1、血红蛋白与相关遗传病,1,血红蛋白电泳,红细胞渗透脆性实验,珠蛋白基因检测,HbA23.5%,溶血%60%,地中海贫血,2,3,实验原理,实验结果,实验内容,根据不同的血红蛋白带有不同的电荷，等电点不同，在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于Hb的等电点时其带负电荷，电泳时在电场中向阳极泳动，反之，Hb带正电荷向阴极泳动。经一定电压和时间的电泳，不同的血红蛋白所带电荷不同、相对分子质量不同，其泳动方向和速度不同，可分离出各自的区带，同时对电泳出的各区带进行电泳扫描，可进行各种血红蛋白的定量分析。,血红蛋白电泳,4,实验原理,实验结果,实验内容,血红蛋白电泳,电泳的介质：醋酸纤维薄膜 缓冲液：T
2、EB（pH8.6）,材料：,pH 8.6 TEB缓冲液适合于检出HbA、HbA2、HbS、HbC，但HbF不易与HbA分开，HbH与HbBarts不能分开和显示，应再选择其他缓冲液进行电泳分离。,无“拖尾”现象 分离速度快 灵敏度高 ,5,实验原理,实验结果,实验内容,血红蛋白电泳,准备,点样,洗脱,定量,6,实验原理,实验结果,实验内容,血红蛋白电泳,A：4；A2：65,HbA2含量=,*临床意义： HbA2参考值：2.0%-3.5% HbA2增多，见于珠蛋白合成障碍性贫血，为杂合子的重要实验室诊断指标。HbE病时也在HbA2区带位置处增加，但含量很大（在10%以上）。HbA2轻度增加亦可见
3、于肝病、肿瘤和某些血液病。,=3.0%,7,实验原理,实验结果,实验内容,红细胞渗透脆性实验,正常红细胞悬浮于等渗的血浆中，若将其置于高渗溶液中，红细胞会因失水而皱缩；反之，将其置于低渗溶液中，则水进入红细胞，使红细胞膨胀。如环境渗透压继续下降，红细胞会因继续膨胀而破裂，释放血红蛋白，称为溶血。红细胞膜对低渗溶液具有一定的抵抗力，这一特征称为红细胞渗透脆性。红细胞膜对低渗溶液的抵抗力越大，红细胞在低渗溶液中越不容易发生溶血，即红细胞渗透脆性越小。将血液滴入不同的低渗溶液中，可检查红细胞膜对于低渗溶液抵抗力的大小。开始出现溶血现象的低渗溶液浓度，为该血液红细胞的最小抵抗力；开始出现完全溶血时的低
4、渗溶液浓度，则为该血液红细胞的最大抵抗力。,8,实验原理,实验结果,实验内容,红细胞渗透脆性实验,抗凝全血,37反应,地贫A液,上清液,测得H1,混匀,地贫C液,测得H2,离心,地贫B液,地贫A液：低渗NaCl 地贫B液：终止反应 地贫C液：破坏所有RBC,9,实验原理,实验结果,实验内容,红细胞渗透脆性实验,H1：270；H2：280,溶血%=,H1,H21.25,=77.1%,*临床意义： 正常值：溶血%60% 脆性增加：试验结果与正常对照比较，提高0.04%者即有意义， 见于遗传性球形红细胞增多症，自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多症，也可见于遗传性椭圆形红细胞增多症和部分遗传性口形红
5、细胞增多症患者。 脆性减低：见于缺铁性贫血，地中海性贫血，链状细胞贫血，靶形红细胞增多症，血红蛋白增多症，脾切除术后，肝脏疾病，阻塞性黄疸等。,10,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,提取DNA,扩增珠蛋白基因（PCR）,PCR产物电泳,DNA测序,11,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,提取DNA：白细胞中加双蒸水，裂解细胞；加SDS，破坏细胞膜；加蛋白酶K，消化蛋白质；加酚/氯仿/异戊醇，抽提DNA，去除蛋白质和脂质；加无水乙醇，析出DNA。 PCR：利用DNA在体外摄氏95高温时变性会变成单链，低温（经常是60C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度
6、至DNA聚合酶最适反应温度（72C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5-3)的方向合成互补链，达到在体外扩增特定基因的目的。 PCR产物电泳：在pH高于其pI时，DNA分子带负电荷，在直流电场中通过凝胶介质向正极泳动。不同的DNA分子因电荷数、构象和分子量大小的不同，在同一电泳系统中的泳动速度有差异，达到分离的目的。,12,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,白细胞中加双蒸水，裂解细胞；加SDS，破坏细胞膜；加蛋白酶K，消化蛋白质；加酚/氯仿/异戊醇，抽提DNA，去除蛋白质和脂质；加无水乙醇，析出DNA。,提取DNA,PCR,反应体系：DNA，dNTP，引物，Taq酶，Mg2+，
7、缓冲液，双蒸水。,变性（94）,退火（63）,延伸（74）,DNA电泳,均匀混合DNA与溴酚蓝（电泳指示剂），小心加入制备好的琼脂糖凝胶的样品槽内，跑电泳，紫外下观察。,13,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,电泳结果,珠蛋白基因测序,14,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,15,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,珠蛋白基因外显子区域无突变,16,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,Slide by slide alignment,不配对处较多，经验证均处于测序不稳定区域。,17,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,基因多态性检测,第一段
8、外显子第3位碱基：T 第二段内含子第16位碱基：G 第二段内含子第74位碱基：C 第二段内含子第666位碱基：？,属TGC型连锁基因,18,珠蛋白基因测序,实验原理,实验结果,实验内容,珠蛋白基因检测,说明： PCR产物跑电泳未见明显条带，故暂无检测结果,课程感想,19,20,谢谢！,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field,
