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1、,胎儿染色体非整倍体无创基因检测 (NIPT),深圳市核子基因科技有限公司,2,主要内容简介,3,4,常见染色体疾病,5,唐氏综合征(Downs syndrome)又称“21-三体综合征”或“先天愚型”，主要是由于细胞中多出一条21号染色体所导致的疾病。,正常人核型,唐氏综合征核型,唐氏综合征概述,6,典型面容,先天性智力低下、精神迟钝 心脏、消化系统、五官的发育异常 骨骼及肌肉发育不全，肌肉无力，身材矮小,唐氏综合征临床表现,7,多发畸形：容貌特殊，枕骨突出，95%以上伴有心脏畸形，胸骨过短，手指重叠、扭曲等； 发育障碍：新生儿常为过期生产，对声响反应微弱，骨骼和肌肉发育不良； 存活困难：一
2、半以上胎死腹中， 20%新生儿存活超过两个月， 只有5-10%能够存活一年以上。,7,爱德华氏综合征（T18）临床特点,8,严重畸形：患儿的畸形和临床表现要比21三体性严重得多，颅面、脑和内脏畸形非常普遍。前额、前脑发育缺陷，如无嗅脑，心室或心房间隔缺损，多囊肾等； 智力障碍：程度严重，存活较久的患儿还有癫痫样发作； 存活时间短：45%的患儿在出生后一个月内死亡，90%在6个月内死亡，存活至3岁者少于5%，平均寿命为130天。,8,帕陶氏综合征（T13）临床特点,9,根据2004年我国卫生部妇幼保健与社区卫生司的调查结果，每一新发唐氏病例给家庭带来的直接经济负担是39.0万元。每年政府支出约8
3、0亿元用于患儿的医疗和社会救济。 给家庭带来巨大的心理压力和 精神痛苦，多数患者容易受到 歧视，特殊教育的接受水平普 遍偏低，缺乏生活自理能力和 社会适应能力，生存质量极差。,9,唐氏综合征（T21）对家庭和社会的危害,10,遗传因素：家族遗传 生物因素：自身免疫疾病，病毒感染； 物理因素：妊娠时放射线照射，放射性尘埃； 化学因素：药物、农药、工业毒物、食品添加剂； 随着孕妇年龄增加，唐氏综合征患病率显著升高；,唐氏综合征发病机理,唐氏综合征患病几率与人种、生活水准等没有直接联系，任何夫妻，各个年龄段的孕妇，均有怀唐氏儿的几率。,11,12,产前筛查：采用简便、可行、无创的检查方法， 对发病率
4、高、病情严重的遗传性疾病或先天畸形等在分娩前进行检查，检出子代具有出生缺陷高风险的人群。筛查出可疑者再进一步确诊，是防止出生缺陷的重要步骤。 产前诊断：又称宫内诊断或出生前诊断，是通过直接或间接地方法对孕期胎儿性别及健康进行检测，防止具有严重遗传病、智力障碍及先天畸形的患儿出生。,产前筛查 & 产前诊断的定义,13,产前筛查: 采用简便、可行、无创的检查方法，对发病率高、病情严重的遗传性疾病或先天畸形等在分娩前进行检查，检出子代具有出生缺陷高风险的人群。筛查出可疑者再进一步确诊，是防治出生缺陷的重要步骤。,唐氏综合征产前筛查与诊断,14,NT,15,是指先天性疾病或遗传性疾病在胎儿期的诊断，是
5、利用非侵入性或侵入性手段对胎儿进行的特异性检查，以便在早孕期或中孕期对异常胎儿作出诊断，及时治疗或处理。,优点：核型分析可以作为产前诊断的金标准。 缺点：损伤性；存在流产、宫内感染等风险,对医生的技术要求高，工作效率很难 提高。,产前诊断,产前诊断方法,16,绒毛穿刺取样 （chorionic villus sampling, CVS）,羊水穿刺 （amniocentesis）,脐带穿刺 （pencutaneous umbilical blood sampling, PUBS）,绒毛活检术,10-13周 绒毛组织20mg（细胞培养或生化检查） 适用：高龄孕妇和高危孕妇孕早期诊断。 干扰：胎盘嵌
6、合体 流产率1%-3% 其他风险：胎儿肢体发育缺陷等,17,羊膜腔穿刺术,16-21周 20mL羊水（细胞培养或其他检测） 适用：高龄孕妇和高危孕妇孕中期诊断 干扰：母血污染 流产风险0.5%-1% 其他风险：羊水泄露、母体血管损伤、宫内感染等,18,经腹脐静脉穿刺术,20-28周 脐血1-2ml，只需培养48h 适用:高龄孕妇和高危孕妇孕晚期诊断 干扰：母血污染 胎死宫内、早产率0.5%-1% 其他风险：穿刺失败、胎儿心动影响等,19,20,在产前筛查和产前诊断之间缺少一个技术补充，它要具有产前诊断的高准确性，同时又具有安全、简便、无创的特点-基因水平,产前筛查和诊断的方法对比,21,一 无
7、创技术的理论基础与检测原理 二 技术开发进程与临床实践,22,理论基础孕妇外周血中存在胎儿DNA,23,胎儿DNA的来源和特点,来源： 1 胎儿细胞通过胎盘渗透到母血中，被 母体免疫系统破坏，胎儿DNA残留下来； 2 胎儿细胞凋亡； 3 胎盘滋养层细胞的凋亡 基本特点： 1 含量有一定的变化规律。妊娠第4周开 始可检出胎儿游离DNA，随着孕周增加 而增加，存在个体差异，平均浓度7.5%； 2 分娩后短时间内消失，平均半衰期为 16.3min (4-30min)， 2h就无法检出， 前次妊娠情况不影响再次妊娠检测结果； 3 DNA片段较小，平均166bp左右。常规技 术很难检测,图1 临床试验数
8、据浓度随孕周变化趋势 （内部数据）,无创染色体非整倍体：不同检测技术比较,理论模型（基于测序的无创检测）,母亲 Chr 21： 952=190,以21-三体为例：100 DNA单位 /毫升血浆。其中，95个单位来源于母亲， 5个单位来源于胎儿,通过大规模并行测序，获得分布在每条染色体上的真实的核酸片段数量，经过计数与比较： 正常胎儿 或者 21-三体胎儿,正常胎儿 Chr 21： 52=10,母亲 Chr 21： 952=190,21-三体胎儿 Chr 21： 53=15,27,27,已知参照序列 （Chr 21#.）,测序获得的 核酸片段 （reads),测序数据比对示意图,真实测序数据展示
9、,荧光信号 - 碱基序列 （数字信号）,Instrument PC,Analysis PC/cluster,国际应用进展（基于测序的无创DNA检测）,国际、国内同类型临床应用研究显示：基于测序的无创DNA检测技术，对于 T21、T18、T13，均具有极高的检出率与准确性,一 无创技术的理论基础与检测原理 二 技术开发进程与临床实践,30,31,检测技术概述,胎儿染色体非整倍体无创DNA检测 （NIFTY）： 通过采集5 ml孕妇外周血，提取其中游离DNA并采用第二代高通量测序技术进行测序，通过生物信息分析，得出胎儿患“染色体非整倍体”的风险率。 技术定位： 高精度产前筛查方法,检测流程,现场咨
10、询与知情同意,是,血浆分离,血浆游离DNA测序,随访/常规诊断 (绒毛膜穿刺、羊水穿刺等),32,提取血浆DNA,测序,定位,覆盖深度统计,覆盖深度Cov-chrN =,参考序列染色体N上有效测序片段总数,样品染色体N上有效测序片段总数,AACGT- CGATA- TAGGC- ATCGC-,生物信息比对,Chr6 Chr18 ChrX Chr21 Chr7 Chr13 Chr11 ChrY,50bp,统计值计算 (t-值,L-值),确认胎儿是否为T21,T18,T13,测试样本ChrN 的关联t-Score,样本的覆盖深度参考样本的修正覆盖深度,参考样本的标准差,L值 =,对数（样品正常可能
11、性值）,对数（样品患病可能性值）,=,技术流程,正常,21-三体,34,临床研究（双盲),2019/3/10,临床研究（双盲),36,临床研究（双盲),37,通过采集5 ml孕妇外周血，提取其中游离DNA采用第二代高通量测序技术进行测序，通过生物信息分析，得出胎儿患“染色体非整倍体”的风险率。 检测范围：可以用于检测21、18、13等染色体非整倍体。 可作为一种产前筛查技术，极低的假阳性率大幅降低创伤性产前诊断比例，缓解临床压力。,技术概述,39,1、技术优势： 无创：采集5ml孕妇外周血 安全：避免胎儿宫内感染或流产 早期：12孕周即可检测，最佳孕周（12-24周） 准确：采用新一代测序技术
12、，结合生物信息分析,无创产前基因检测技术优势,40,所有孕周12周的孕妇；（最佳检测孕周：12-24周）,适应群体,年龄达35岁或以上的高龄孕妇 拒绝做羊水穿刺者 孕早、中期血清筛查21三体风险临界者（1/300-1/1000), 孕早期超声提示胎儿异常 有穿刺禁忌症孕妇(胎盘前置、流产征兆、感染乙肝、HIV、TP等) IVF、习惯性流产及其他原因“珍贵儿” 错过有创产前诊断的孕妇,检测对象：,特别适合群体：,41,不能检测双胞胎及以上多胎； 不适合检测染色体的微缺失、微重复以及结构异常（嵌合体型、易位型）; 孕妇前期接受过异体输血、移植手术、干细胞治疗等，而引入外源DNA，会影响检测结果;
13、孕妇本人为“染色体非整倍体”患者，不适合进行该项检测； 夫妇双方或一方为染色体结构异常者不适合进行该项检测；,目前局限性,样本采集、储存及运输,2019/3/10,42,标本采集流程,孕妇填写知情同意书、送检单并领取保险卡,分离血浆,孕妇抽血、 贴条码(一一对应）,寄送样本,接收样本,1、干冰寄送样本 10公斤/2-3天、避免反复冻融 2、每例样本对应4管血浆。,孕妇必填基本信息并签名 医生解答疑问,1、采用5mLEDTA抗凝管 2、条码分别贴送检单、知情同意书 采血管、2.0mLEP管,1、 48h内离心 2 、41600g离心10min 3、 416000g离心10min,1、检查样品是否
14、合格 2、录入信息（SOP 双人复核）,缴费,编号原则：PDB12+医院代 码+5位流水号,全血样本量：5 mL 采血管：专用采用管 样本标识：血液采集后，在样本采集管上标明孕妇姓名、年龄及孕周。 样本保存：常温下保存。 注意：送检过程中不能冰冻。,样本采集,2019/3/10,44,检测报告及解释,2019/3/10,45,检测报告正常报告,结果解释,1、低风险：说明胎儿患染色体非整倍体的风险很低，建议继续妊娠并进行常规产检； 2、高风险:说明胎儿患某种染色体非整倍体的风险很高，建议进行羊水或者脐血穿刺； 3、准确率99%。,检测报告延迟报告,结果解释,1、质控不过关：可能是实验的原因或者样
15、本本身问题，重新进行实验； 2、数据波动，值偏高但没达到标准：重新进行实验； 3、胎儿浓度低：重新上机。 以上情况通过重新实验如果解决不了的话会要求重新抽血。,其它情况解释,1、除21、18、13号染色体之外的其它染色体数目异常，建议临床医生结合临床经验、B超结果及其它检测结果综合评判，如果也出现其它检测结果异常（如B超发现畸形等）建议进行羊水或者脐血穿刺。 2、性染色体异常：建议结合临床经验和孕妇的意见进行处理。,基本知识,知情同意书/送检单签署：需与受检者及其家属作良好沟通，告知该检测的重要性、临床意义及潜在的风险，指导受检者签署知情同意书 2.送检单必填信息：送检单位、送检医生、送检医生
16、联系电话、采集日期、受检者姓名、年龄、孕周、B超检查结果。 3. 身份及准备情况核对：仔细核对送检单和受检者的基本信息，确保一致；检查受检者是否按照医嘱准备，并向其解释操作目的以取得配合。 4. 样本标识：在采集管上贴上样本唯一条码， 并注明受检者姓名等信息，确保与送检单一致。 5. 血液收集：外周血5ml，孕妇正常饮食作息。 6. 血液运输与保存：常温下保存，不能冰冻送检。 7. 报告时间：7个工作日。 8. 检测费用：￥2500.00,50,签约后，无创产前在医院运行的基本流程图,妇产科医生与孕妇沟通确认,填写送检单/知情同意书、保险告知书（孕周大于24，填写补充条款）,医生开具产前检测单、孕妇缴费,抽血（ 专用管 5ML血液，）护士登记,送样,谢 谢！,深圳市核子基因科技有限公司 地址：深圳市南山区学苑大道1001号南山智园A7栋12
