《【最新word论文】番茄红素对寰枢椎失稳老年小鼠脑保护作用的研究【临床医学专业论文】》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【最新word论文】番茄红素对寰枢椎失稳老年小鼠脑保护作用的研究【临床医学专业论文】（6页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1番茄红素对寰枢椎失稳老年小鼠脑保护作用的研究作者：范文静 李林 朱彤彤 郭亚雄 赵丽娟【摘要】 目的 观察番茄红素(Lycopene)对寰枢椎失稳老年小鼠脑的保护作用。方法 小鼠寰枢椎周围注射 30%乳酸溶液 30 l/次,1 次/w，连续 3 w,制作颈椎失稳模型。用番茄红素 2个剂量组即 5、2.5 mg/kg连续 1次/d 灌胃观察100 d,水迷宫测试小鼠记忆能力;酶联免疫分析法(ELISA)测定脑组织TNF 、IL1 、IL6 含量;免疫组织化学法(SABC)观察海马 CA1区蛋白 淀粉样蛋白(A)的表达。结果 与模型组比较，Lycopene 高剂量组小鼠，水迷宫实验错误次数显著减
2、少(P0.01);脑组织 TNF 、IL1 、IL6 含量降低显著(P0.01，P0.01，P0.05);脑海马 CA1区 A 表达介于正常对照组和模型组之间。结论 Lycopene对寰枢椎长期乳酸堆积所致老年小鼠记忆能力减退具有一定的改善作用，其机制与 Lycopene 降低脑组织TNF 、IL1 、IL6 含量及抑制 A 蛋白的生成有关。 【关键词】 番茄红素;学习记忆;寰枢椎;白细胞介素，细胞因子; 淀粉样蛋白番茄红素(Lycopene)又名茄红素，是类胡萝卜素的一种，广泛存在于红色蔬菜与水果中，因最早发现于番茄中而得名。国内外研究发现，Lycopene 具有多种重要的生物学作用，如抗氧
3、化、清除自由基、预防肿瘤及调节机体免疫功能、抗衰老等作用1 。Lycopene 是天然类胡萝卜素中最有效的单线态氧清除剂，其作用是目前常用抗氧化剂 2 胡萝卜素的 2倍、维生素 E的 100倍2 。此外,Lycopene还可诱导某些内源性抗氧化酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx) 的活性3 。本实验通过破坏颈椎周围韧带引起小鼠颈椎稳定性异常，导致小鼠记忆能力下降和脑组织损伤，观察番茄红素对脑组织损伤的康复治疗作用。1 材料与方法1.1 材料 10月龄 ICR小鼠，体重(402)g，清洁级，由吉林大学实验动物中心提供;番茄红素(Lycopene
4、)购于西安大恒制药有限责任公司;白细胞介素1(IL1) 、肿瘤坏死因子 (TNF) 、白细胞介素 6(IL6) 检测试剂盒购于上海卓康生物科技有限公司;免疫组化 SABC染色试剂盒及淀粉样蛋白(A)140 抗体，购于武汉博士德生物有限公司。1.2 方法1.2.1 实验分组 10月龄 ICR小鼠 32只，雌雄各半，随机分为 4组:正常对照组、模型组、Lycopene 高、低剂量组,每组 8只;5 月龄 ICR小鼠 8只，雌雄各半，作为非老年对照组。21.2.2 模型制备 除对照组，其余所有小鼠第 1,2颈椎关节处注射 30%乳酸溶液 30 l/次，1 次/w，连续 3 w4 。首次造模 24 h
5、开始给药，Lycopene 高、低剂量组分别以 5和 2.5 mg/kg剂量灌胃，食用色拉油稀释，1 次/d，连续给药100 d;对照组和模型组给予等体积色拉油，灌胃。1.2.3 水迷宫实验 水迷宫由黑色有机玻璃板制成，水深 18 cm，水温(231)，分成 A、B、C、D 区。终点区有一高出水平的安全平台。各区至终点区为一阶段训练，每一阶段训练 3次。每次到达平台上休息 30 s，再行下次实验。记录小鼠从起点 A区游至终点台阶处的时间为游全程时间,其进入盲端次数为错误次数;24 h复测，作为记忆成绩，若动物 120 s内未游到终点则以 120 s计算5 。1.2.4 脑组织 TNF 、IL1
6、 、IL6 含量测定 末次给药次日断头处死小鼠，冰盘上迅速分离大脑，取一侧大脑制备组织匀浆，4、3 000 r/min离心 15 min，取上清液置-30保存;采用酶联免疫分析法测定脑组织TNF 、IL1 、IL6 含量，按照说明书进行。1.2.5 免疫组化染色 按试剂盒说明书操作，采用 SABC法，检测脑海马 CA1区神经细胞异常结构蛋白 A140 表达，光学显微镜下观察，细胞内见棕色颗粒者为阳性细胞。1.3 统计学分析 采用 SPSS12.0软件进行单因素方差分析，数据用 xs表示。2 结 果2.1 水迷宫实验 与正常对照组相比，模型组游全程时间明显延长,错误次数显著增加(P0.05);与
7、模型组比较，Lycopene 高剂量组错误次数也明显减少(P0.05)，见表1。表 1 小鼠的水迷宫实验检测结果正常对照组比较:1)P0.05，与模型组比较:2)P0.012.2 细胞因子检测结果 与正常对照组比较，模型组 TNF 、IL1 和IL6 含量升高(P0.05，P0.01，P0.05);与模型组比较， Lycopene高剂量组小鼠脑组织 TNF 、IL1 和 IL6 含量降低显著(P0.01，P0.01，P0.05)，而 Lycopene低剂量只有 IL1 有统计学差异(P0.05)，见表 2。2.3 A 免疫组化 正常对照组脑海马 CA1区 A 呈阴性表达，而模型组脑海马 CA1
8、区呈棕黄染色的阳性细胞随处可见，Lycopene 组 A 表达介于以上两组之间，高剂量组作用更为明显(图 1)。表 2 小鼠脑组织TNF 、IL1 、IL6 含量检测结果【摘要】 目的 观察番茄红素(Lycopene)对寰枢椎失稳老年小鼠脑的保护作用。方法 小鼠寰枢椎周围注射 30%乳酸溶液 30 l/次,1 次/w，连续 3 w,制作颈椎失稳模型。用番茄红素 2个剂量3组即 5、2.5 mg/kg连续 1次/d 灌胃观察 100 d,水迷宫测试小鼠记忆能力;酶联免疫分析法(ELISA)测定脑组织 TNF 、IL1 、IL6 含量;免疫组织化学法(SABC)观察海马 CA1区蛋白 淀粉样蛋白(
9、A)的表达。结果 与模型组比较，Lycopene高剂量组小鼠，水迷宫实验错误次数显著减少(P0.01);脑组织TNF 、IL1 、IL6 含量降低显著(P0.01，P0.01，P0.05);脑海马 CA1区 A 表达介于正常对照组和模型组之间。结论 Lycopene对寰枢椎长期乳酸堆积所致老年小鼠记忆能力减退具有一定的改善作用，其机制与Lycopene 降低脑组织 TNF 、IL1 、IL6 含量及抑制 A 蛋白的生成有关。 【关键词】 番茄红素;学习记忆;寰枢椎;白细胞介素，细胞因子; 淀粉样蛋白番茄红素(Lycopene)又名茄红素，是类胡萝卜素的一种，广泛存在于红色蔬菜与水果中，因最早发
10、现于番茄中而得名。国内外研究发现，Lycopene 具有多种重要的生物学作用，如抗氧化、清除自由基、预防肿瘤及调节机体免疫功能、抗衰老等作用1 。Lycopene 是天然类胡萝卜素中最有效的单线态氧清除剂，其作用是目前常用抗氧化剂 2 胡萝卜素的 2倍、维生素 E的 100倍2 。此外,Lycopene还可诱导某些内源性抗氧化酶，如超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx) 的活性3 。本实验通过破坏颈椎周围韧带引起小鼠颈椎稳定性异常，导致小鼠记忆能力下降和脑组织损伤，观察番茄红素对脑组织损伤的康复治疗作用。1 材料与方法1.1 材料 10月龄 ICR小
11、鼠，体重(402)g，清洁级，由吉林大学实验动物中心提供;番茄红素(Lycopene)购于西安大恒制药有限责任公司;白细胞介素1(IL1) 、肿瘤坏死因子 (TNF) 、白细胞介素 6(IL6) 检测试剂盒购于上海卓康生物科技有限公司;免疫组化 SABC染色试剂盒及淀粉样蛋白(A)140 抗体，购于武汉博士德生物有限公司。1.2 方法1.2.1 实验分组 10月龄 ICR小鼠 32只，雌雄各半，随机分为 4组:正常对照组、模型组、Lycopene 高、低剂量组,每组 8只;5 月龄 ICR小鼠 8只，雌雄各半，作为非老年对照组。1.2.2 模型制备 除对照组，其余所有小鼠第 1,2颈椎关节处注
12、射 30%乳酸溶液 30 l/次，1 次/w，连续 3 w4 。首次造模 24 h开始给药，Lycopene 高、低剂量组分别以 5和 2.5 mg/kg剂量灌胃，食用色拉油稀释，1 次/d，连续给药100 d;对照组和模型组给予等体积色拉油，灌胃。1.2.3 水迷宫实验 水迷宫由黑色有机玻璃板制成，水深 18 cm，水温(231)，分成 A、B、C、D 区。终点区有一高出水平的安全平台。各区至终点4区为一阶段训练，每一阶段训练 3次。每次到达平台上休息 30 s，再行下次实验。记录小鼠从起点 A区游至终点台阶处的时间为游全程时间,其进入盲端次数为错误次数;24 h复测，作为记忆成绩，若动物
13、120 s内未游到终点则以 120 s计算5 。1.2.4 脑组织 TNF、IL1、IL6 含量测定 末次给药次日断头处死小鼠，冰盘上迅速分离大脑，取一侧大脑制备组织匀浆，4、3 000 r/min离心 15 min，取上清液置-30保存;采用酶联免疫分析法测定脑组织TNF、IL1、IL6 含量，按照说明书进行。1.2.5 免疫组化染色 按试剂盒说明书操作，采用 SABC法，检测脑海马 CA1区神经细胞异常结构蛋白 A140 表达，光学显微镜下观察，细胞内见棕色颗粒者为阳性细胞。1.3 统计学分析 采用 SPSS12.0软件进行单因素方差分析，数据用 xs表示。2 结 果2.1 水迷宫实验 与
14、正常对照组相比，模型组游全程时间明显延长,错误次数显著增加(P0.05);与模型组比较，Lycopene 高剂量组错误次数也明显减少(P0.05)，见表1。表 1 小鼠的水迷宫实验检测结果正常对照组比较:1)P0.05，与模型组比较:2)P0.012.2 细胞因子检测结果 与正常对照组比较，模型组 TNF、IL1 和IL6 含量升高(P0.05，P0.01，P0.05);与模型组比较， Lycopene高剂量组小鼠脑组织 TNF、IL1 和 IL6 含量降低显著(P0.01，P0.01，P0.05)，而 Lycopene低剂量只有 IL1 有统计学差异(P0.05)，见表 2。2.3 A 免疫
15、组化 正常对照组脑海马 CA1区 A 呈阴性表达，而模型组脑海马 CA1区呈棕黄染色的阳性细胞随处可见，Lycopene 组 A 表达介于以上两组之间，高剂量组作用更为明显(图 1)。表 2 小鼠脑组织TNF、IL1、IL6 含量检测结果53 讨 论本实验经寰枢椎关节周围注射 30%乳酸，使颈椎周围韧带、筋膜以及肌肉等软组织受到化学刺激，呈现慢性炎症损伤，致使颈椎关节稳定性异常，导致颈椎关节渐进性微错位，压迫椎动脉、刺激交感神经，从而导致椎动脉血流减少，大脑处于应激、慢性缺血缺氧状态，推进老龄小鼠的衰老进程。颈交感神经受刺激引起椎基底动脉缺血，而椎基底动脉系统通过后交通动脉对边缘系统中海马回、下丘脑等重要组织结构供血，椎基底动脉供血不足，导致边缘系统、特别是海马区损伤将引起小鼠记忆障碍6 。实验结果显示，与正常对照组相比，模型组小鼠记忆损伤明显。前期实验证实该模型诸多症状与血管性痴呆相似，且老龄鼠表现更为明显7 ，这可能与模型组小鼠海马 CA1区胶质细胞增多、细胞脱失5以及 A 蛋白的神经毒性有关。脑损伤或炎症时，外周巨噬细胞可进人脑内合成多种细胞因子，同时神经细胞本身也可合成大量的细胞因子，如胶质细胞可分泌 IL1
