《浙江鸭2019版高考生物一轮总复习第九单元生物技术实践第30讲微生物的利用课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《浙江鸭2019版高考生物一轮总复习第九单元生物技术实践第30讲微生物的利用课件（111页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第30讲 微生物的利用,第九单元 生物技术实践,考点一 微生物的培养和分离,考点二 分离以尿素为氮源的微生物,模拟演练,课时训练,内容索引,1.大肠杆菌 (1)特性：大肠杆菌是革兰氏 性、 (代谢类型)的肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但若进入人的 系统，就会对人体产生危害。 (2)用途：是 技术中被广泛采用的工具。 2.细菌的培养和分离 (1)细菌的繁殖：以 的方式繁殖，分裂速度很快，约20 min分裂一次。 (2)培养的方法：需要将已有细菌的培养物转移到新的培养基中，一般用 (工具)转移带菌的培养物。,知识梳理,阴,兼性厌氧,泌尿,基因工程,分裂,接种环,(3)细菌分离的方法与特点,划线分
2、离,涂布分离,3.大肠杆菌的培养和分离实验 (1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养和划线分离，即用 培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在 培养基上划线进行分离，随后培养基上就会形成一个个单独的菌落。,LB液体,LB固体平面,(2)实验步骤,高压蒸汽,倒平板,接种,三角瓶,连续划线,单个菌落,(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是 的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。,消除污染杂菌,4.微生物两种常用的接种方法比较,接种环,玻璃刮刀,一系列,一个细菌,接种环,固体,单个的菌落,1.连线无菌技术的方法、类型及对象，并总结消毒与灭菌的区别。,消毒和灭菌的区别,化学,高压蒸汽,物体表面,
3、煮沸,(1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程： 。 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是 。 (3)丁中的操作需要等待 才能进行。,2.观察甲、乙、丙、丁四幅图，熟悉倒平板的操作流程，请填空：,丙乙甲丁,平板冷却凝固,灼烧灭菌,(1)每一次划线后都要将接种环灼烧( ) (2)除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端( ) 提示 平板划线时除第一次划线外，每一次划线的起点都是上一次划线的末端，而不是第一次划线的末端。,答案,3.下图中甲为划线分离法中最重要的环节，乙为操作的结果：,提示,(3)说明乙图划线结束后，培养皿要倒置(盖在下面)在37 恒温培养箱中培养的原因是什么？ 提示 平
4、板冷凝后倒置培养，使培养基表面的水分更好地挥发；防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。,提示,(1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？ 提示 获得效果A的接种方法为涂布分离法，获得效果B的接种方法为划线分离法。,4.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请思考：,提示,(2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成了一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象？ 提示 最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灼烧灭菌；采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灼烧灭菌。,提示,1.(2017杭州一模)据报道，一些企业生产
5、的速冻食品中检出金黄色葡萄球菌超标，加上熟卤制品的大肠杆菌超标，“细菌门”事件引起公众普遍关注。金黄色葡萄球菌能分解卵黄中的卵磷脂，在含卵黄的固体培养基上形成的菌落周围会出现特有的乳白色的乳浊环。请回答下列问题： (1)某生物兴趣小组欲检测某果汁类食品中是否含有金黄色葡萄球菌以及该菌的含量。 配制培养基：称取适量的牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂等，加入蒸馏水，搅拌加热至完全溶解后_，分装到锥形瓶后利用_进行灭菌，在无菌状态下加入卵黄液(100 mL 10%灭菌NaCl溶液中加一个鸡蛋黄，振荡均匀)摇匀后立即倒平板。,解题探究,答案,解析,调节pH,高压蒸汽灭菌锅,解析 培养基配制好后应调节酸碱
6、度(pH)，分装到锥形瓶后利用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌。,接种：该小组采用涂布分离法检测果汁样品中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先行培养了一段时间，这样做的目的是_；然后，将1 mL果汁样品稀释10倍，在3个平板上用涂布分离法分别接入0.1 mL稀释液。,答案,解析,检测培养基平板灭菌是否合格,解析 涂布接种前，将制好的空白平板先培养一段时间，目的是检测培养基平板灭菌是否合格；,培养及结果：将培养皿_放入恒温培养箱中经适当培养，3个平板上的菌落数分别为19、18和17。据此可得出每升果汁样品中的活菌数为_个。,答案,解析,倒置,解析 接种后，培养皿需要倒置培养，防止皿盖上凝
7、集的水滴滴落造成污染；0.1 mL稀释液(稀释10倍)含细菌数约为18个，得出每升果汁含有活菌数1.8106个。,1.8106,(2)示意图A和B中_表示的是用涂布分离法接种培养后得到的结果。,答案,解析,B,解析 图中A为划线分离得到的结果，B为涂布分离得到的结果。,(3)下列有关常用涂布分离法的操作正确的是_。 A.在超净工作台中进行接种时应关闭紫外灯 B.接种前需先稀释，然后过滤除去杂菌 C.在每个固体培养基表面都可形成单菌落 D.玻璃刮刀浸泡在70%的酒精中灭菌，不用灼烧,答案,解析,A,解析 在超净工作台进行接种操作时应关闭紫外灯，A正确； 涂布分离前需稀释，但不能过滤除菌，B错误；
8、 稀释度较大的溶液涂布分离不一定出现菌落，C错误； 玻璃刮刀浸泡后需要灼烧，D错误。,(4)菌种保存：在无菌条件下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在_上，在37 下培养24 h后，置于4 冰箱中保存。,答案,解析,斜面,解析 纯化的菌种保存在斜面上。,2.下图为“大肠杆菌的培养和分离”实验的基本流程，请回答下列问题：,解析,(1)A过程配制的是通用细菌培养基，称为_培养基。配制时除了加入特定的营养物质以外，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的_。对培养基酸碱度的调节，应该在B过程的_(填“前面”或“后面”)。,答案,LB液体,渗透压,前面,解析 LB液体培养基是通用的细菌培养基，LB固体平
9、面培养基则用于划线分离形成单菌落。氯化钠的作用是维持培养基的渗透压。调节好酸碱度后才能进行灭菌，若灭菌后再进行酸碱度调节，又会产生新的污染。,(2)D过程与C过程相比，培养基中增加的物质是_，E过程所需的温度是_。,答案,解析,琼脂,解析 在液体培养基的基础上加入一定量的琼脂可形成固体培养基。菌种应置于4 C冰箱中保存。,4 ,(3)D过程后，一个菌体便会形成一个_，这种分离方法是_ _的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。,答案,解析,(单)菌落,解析 通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。,消除污染,杂菌(或纯化菌种),(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的
10、植物激素，当生长素相对较多时，可促进_。,答案,解析,生根,解析 植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相对较多时，则有利于生芽。,(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作，下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是 A.接种环和镊子 B.三角瓶和广口瓶 C.发芽培养基和生根培养基 D.用于培养的幼茎和幼芽,解析,解析 高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌，而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何灭菌操作，否则会导致细胞死亡。,答案,3.(2017嘉兴期末)下列是有关大肠杆菌的培养实验，请回答问题： (1)配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加
11、入蛋白胨和_作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的_。,答案,解析,酵母提取物,解析 配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和酵母提取物作为营养物质，为维持一定的渗透压，常需加入一定量的NaCl。,NaCl,(2)大肠杆菌培养和分离的实验中，在_中进行扩大培养，培养液经_后，在LB固体培养基上进行_，并将培养皿_放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及_，应同时将未接种的培养基放入相同条件的恒温培养箱培养。,答案,解析,LB液体培养基,稀释,分离,倒置,无菌操作是否规范,解析 大肠杆菌培养和分离
12、的实验中，在LB液体培养基中进行扩大培养，培养液经稀释后，在LB固体培养基上进行分离，并将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养；为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及无菌操作是否规范，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。,(3)通常对获得的纯菌种可以依据_的形状、大小等特征进行初步的鉴定。,答案,解析,菌落,解析 通常对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小等特征进行初步的鉴定。,(4)下列关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，叙述正确的是 A.高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C.为了防止污染，接种工具经火
13、焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D.用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上,解析,解析 高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能直接打开放气阀使压力表指针回到零，A错误； 倒平板过程中不能打开培养皿的皿盖，以防止杂菌污染，B错误； 接种环在火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误； 用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。,答案,培养基的成分和类型 (1)培养基成分：一般都含有水、碳源、氮源、无机盐、生长因子等，此外还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 (2)培养基的类型及其应用,1.菌种特点 含有 酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源
14、。 2.培养基 用以 为唯一氮源的培养基培养，以 培养基为对照。 3.实验原理 (1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。 (2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成 ，致使pH升高，使酚红指示剂 。,知识梳理,尿素,脲,LB全营养,NH3,变红,G6玻璃砂漏斗,全营养LB,倒置,4.实验步骤,多而杂,少、单一,红色,5.反应的鉴定 在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解并产生碱性的氨，使培养基上菌落周围出现 。,红色的环带,(1)在该培养基的配方中，为微生物提供碳源的物质是 ，提供氮源的物质是 。,1.分析下表所示培养基的配方，回答下列问题。,葡萄
15、糖,尿素,(2)该培养基 (填“是”或“否”)具有选择作用，因为_ 。,是,只有能分解尿素,的微生物才能生长,(3)用琼脂糖代替琼脂配制固体培养基的原因是什么？ 提示 琼脂是未被纯化的混合物，内含一定量的含氮化合物。如果用琼脂固体培养基，会为细菌提供一定量的非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量以非尿素为氮源的细菌，所以用经纯化的琼脂糖做固化剂。,提示,(1)实验目的是使用含有 的培养基分离能产生_酶的细菌，使用 作为指示剂。,2.如图为分离以尿素为氮源的微生物的实验，思考回答下列问题：,脲,酚红,尿素,(2)有脲酶的细菌菌落周围出现有色环带的原因是什么？ 提示 细菌向胞外分泌脲酶，使培养基中尿素水解产生呈碱性的氨，遇培养基中的酚红指示剂产生颜色变化，形成红色环带。,提示,(3)制备尿素固体培养基的过程中采用的灭菌方法有 、G6玻璃砂漏斗过滤法。,高压蒸汽灭菌法,(4)与全营养培养基相
