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1、第九章 维生素类药物的分析,维生素： 是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。 主要用于机体的能量转移和代 谢调节 人体不能合成维生素，需从食物中摄取。 维生素并非同属一类化合物，有些是醇、酯，有些是酸、胺，还有些是酚和醛类。,第一节 维生素A,基本结构与主要性质 基本结构： 具有共轭多烯侧链的环己烯,主要化学性质： 易发生脱氢、脱水、聚合反应：,CHCl3,紫外吸收特性： 维生素A分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，在325328nm有最大吸收。 与三氯化锑呈色 维生素在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。,注意事项： 反应需在无水、无醇的条件下进行。 水可使三氯化锑水解成氯化
2、氧锑（SbOCl）。 乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消失。,薄层色谱法 方法 吸附剂：硅胶G；展开剂：环己烷-乙醚（80:20） 显色剂：三氯化锑溶液 判断：比较供试品和对照溶液所显蓝色斑点位置,含量测定 紫外分光光度法（三点校正法） 维生素A的最大吸收波长：325328nm 杂质干扰（310340nm）： 去氢维生素A（VitA2） 去水维生素A（VitA3） 光照产物（无活性聚合物：鲸醇） 立体异构体（新维生素Aa、新维生素Ab等） 氧化产物（环氧化物、维生素A醛、维生素A酸）,三点法测定原理： 在三个波长处测得吸光度，然后计算含量。 条件： 杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条
3、直线，且随波长的增大吸收度减小。 物质对光的吸收具有加和性。 波长的选择 1：VitA的max（328nm）；2、3：分别在1的两侧各选一点,第一法（等波长差法）：,（式1）,杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线,（式2）,将X2、X3代入式1：,（式4）,（式3）,式3式4：,A1(校正)为消除杂质干扰后的吸光度值：,1、2、3为预先选定波长 K1、K2是维生素A纯品测得的吸光度比值,用直接法测定维生素A醋酸酯： 1=328nm、2=316nm、3=340nm,第二法（等吸收比法）：,FEM与FDL为相似三角形：,供试品在1、2、3处的吸光度分别为：A1、A2、A3：,即：,又：
4、,即：,将X、Y代入式 1 ：,（式 1）,用皂化法测定维生素A醇： 1=325nm、2=310nm、3=334nm,所求的值较实际应得之值要高2.6%2.7%，根据实验证明，乘以97.35%后较准确:,吸光度校正小结 校正都是通过最大吸收波长及其两侧二个波长的三点法进行；选择三点的共同要求是：在此波长范围内杂质的额吸收再一条直线上。 校正公式有两种类型：等波长差法和等吸收比法。 使用公式时要注意溶液种类以及供试品是维生素A酯或维生素A醇。,测定方法 第一法：直接测定法 方法： 如供试品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂（环己烷）溶解供试品，制成每1ml含915IU的溶液后直接测定。 在300、3
5、16、328、340、360nm处的吸光度，确定最大吸收波长（328nm）。 适合于纯度高的维生素A醋酸酯。,计算： 求E1cm1% A：实测吸光度A238或校正吸光度A238（校正） C：为混合样品的浓度,求效价（IU/g）：每g供试品中所含维生素A的国际单位数。 1900：维生素A醋酸酯在环己烷溶液中 的换算因子,求维生素A醋酸酯占标识量的百分含量：,第二法:皂化法 方法： 如供试品中干扰测定的杂质较多，且用第一法无法消除杂质干扰时，可加KOH乙醇溶液煮沸回流皂化。 皂化液经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥处理，用异丙醇溶解残渣并稀释。 测定300、310、325、334nm处的吸光度，并
6、确定最大吸收波长（325nm）。 适合于维生素A醇。,计算： 求E1cm1% A：实测吸光度A235或校正吸光度A235（校正） C：为混合样品的浓度,VitAD胶丸中VitA的含量测定 精密称取本品(规格10000 VitA IU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并测得下列波长处吸收度。,A300 ：0.354 A316 ：0.561 A328 ：0.628 A340 ：0.523 A360
7、 ：0.216,A300 /A328 ：0.555 A316/A328 ：0.907 A328/A328 ：1.000 A340/A328 ：0.811 A360/A328 ：0.299,求本品中维生素A的含量？,第二节 维生素B1,维生素B1广泛存在于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。用于治疗维生素B1缺乏病、多发性神经炎和胃肠道疾病。 基本结构与主要性质 基本结构 由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季胺类化合物。,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),主要性质 溶解性 易溶于水（显酸性）、微溶于乙醇、不溶于乙醚 硫色素反应 噻唑环在碱性介质中可开环，与嘧啶环上
8、的氨基环合，再经铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。 紫外吸收特性 具紫外吸收，最大吸收波长为246nm。,与生物碱沉淀试剂反应 分子中含有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），可与某些生物碱沉淀试剂（碘化汞钾、三硝基苯酚、碘溶液和硅钨酸）反应生成组成恒定的沉淀。 氯化物的特性 维生素B1为盐酸盐，其水溶液显氯化物的鉴别反应。,鉴别试验 硫色素反应 原理:在碱性介质中可被铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。,（硫色素）,（O）,硫色素反应为维生素B1所特有的专属反应,方法：,沉淀反应 与碘化汞钾生成淡黄色沉淀 与碘生成红色沉淀 与硅钨酸生成白色沉淀 与苦酮酸形成扇形白色结晶 氯化物反
9、应： 本品水溶液显氯化物的鉴别反应。 硝酸铅反应 与NaOH共热，分解产生NaS，可与硝酸铅生成黑色沉淀。,含量测定 非水滴定法 原理： 维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中（在醋酸汞存在下），均可与高氯酸（0.1mol/L）作用。,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,注意事项： 醋酸汞可与氢卤酸作用生成非解离的卤化汞溶液，已消除氢卤酸盐对非水滴定法的干扰。 维生素B1具有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为1:2。,硫色素荧光法,NaOH,原理：,方法与计算：,注意事项： 铁氰化钾与维生素B1的反应虽非定量完成，但在一定的条件下形成的硫色素与维生素B1的浓度成正比。 硫
10、色素反应为维生素B1的专属性反应，不受氧化产物的干扰，测定结果较为准确，但操作繁琐。 使用的氧化剂，除铁氰化钾外，可用氯化汞或溴化氰。 溴化氰能将维生素B1完全定量氧化为硫色素，适用于临床体液分析。,第三节 维生素C,维生素C（L-抗坏血酸）具有4中光学异构，以L-构型右旋体的生物活性最强。 基本结构与主要性质 基本结构 具有烯二醇结构和内酯环，且有2个手性碳原子（C4、C5），使维生素C性质极为活泼，且具旋光性。,主要性质 溶解性： 易溶于水（呈酸性）、微溶乙醇、不溶于三氯甲烷和乙醚。 酸性： 烯二醇基中C3-OH收共轭效应影响，酸性较强（pK1=4.17）；C2-OH酸性较弱（pK2=11
11、.57） 旋光性： 有2个手性碳原子,具旋光性。,还原性： 分子中的烯二醇基具有极强的还原性，已被氧化为二酮基成为去氢抗坏血酸，在碱性或强酸性溶液中能进一步水解为二酮洛糖酸而失去活性。,水解性： 维生素C和碳酸钠作用可生成钠盐，内酯环并得稳定，不致发生水解；在强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。,糖类的性质： 化学结构与糖类相似，具有糖类的性质和显色反应。,紫外吸收特性： 具共轭双键，其稀盐酸溶液max=243，碱性溶液max=265。,鉴别试验 与硝酸银反应 烯二醇基具有强还原性，可被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色银沉淀。,与2,6-二氯靛酚反应 2,6-二氯靛酚的氧化型在酸性介质中位
12、玫瑰红色，在碱性介质中位蓝色，与维生素C作用后生成还原型无色的酚亚胺。,（玫瑰色）,（无色）,与其他氧化剂反应 可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸。,糖类的反应 在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热、溶液呈蓝色。,（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,含量测定 维生素C具有很强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。 碘量法 原理：,指示剂：淀粉指示液,注意事项： 供试液用新沸冷H2O溶解配制，减少水中溶解的氧对测定的影响。 滴定在酸性环境下进行，在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢。 供试品溶液配制好后应立即滴定，减少
13、O2的干扰。 附加剂干扰的排除,片剂 滑石粉 过滤,Na2SO3 NaHSO3 Na2S2O3 Na2S2O5,2,6-二氯靛酚滴定法 原理：,第四节 维生素E,维生素E为-生育酚及其各种酯类，有天然品和合成品之分。天然品为右旋体，合成品为消旋体。右旋体与消旋体生物效价比为1.4 ：10。 基本结构与主要性质,基本结构 为苯并二氢吡喃衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基。,（苯并二氢吡喃醇）,主要性质 溶解性： 易溶于无水乙醇、丙酮、乙醚，不溶于水。 水解性： 苯环上的乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶液中加热可水解成游离生育酚。 氧化性： 在无氧条件下对热稳定，对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化为-
14、生育醌和-生育酚二聚体。,鉴别试验 硝酸反应,三氯化铁-联吡啶反应,血红色,紫外分光光度法,薄层色谱法,薄层板：硅胶G,展开剂：环己烷-乙醚(4 1),显色剂：硫酸（105，5min）,维生素E：Rf = 0.7,杂质检查 酸度 检查维生素E的制备过程中引入的游离醋酸。,生育酚 检查维生素E制备过程中未酯化的生育酚。 原理： 利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈定量还原成硫酸亚铈。在一定条件下以0.1g本品消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）的体积赖控制游离生育酚的限度。,指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,（M生育酚 = 430.8）,计算（滴定液消耗体积）：,药典规定,消耗硫酸铈液（0.01mol/
15、L）1.0ml,设：应消耗硫酸铈液 V ml,0.011.0实际浓度V,若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L， 应重新计算硫酸铈的消耗量,含量测定 气相色谱法 中国药典（2005）采用气相色谱法测定维生素E的含量。,选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好,GC 特点,载气：N2 固定相：硅酮（OV-17）；涂布浓度：2% 担体：硅藻土或高分子多孔小球 柱温：265 检测器：氢火焰离子化检测器(FID) 内标：正三十二烷 计算：内标法 系统适应性试验：n500，R2,VitE测定的色谱条件,供试液（样品+内标）,对照液（对照+内标）,测定方法,计算方法,例,内标液：取正三十二烷加正己烷溶解
16、并稀释 成1.0mg/ml溶液,对照液：精密称取VitE对照品0.2011g置棕色 具塞锥形瓶中，精密加入内标液 10ml，密塞，振摇使溶解，取1 3ul注入GC仪，测定，计算。,供试液：精密称取供试品0.1998g置棕色具塞 锥形瓶中，精密加入内标液10ml， 密塞，振摇使溶解，取13ul注入 GC仪，测定，计算,讨论,含量计算,（MVitE = 472）,在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是（） 氯氮卓 维生素A 普鲁卡因 盐酸吗啡 维生素C,自测题,中国药典（2005年版）采用以下何法测定维生素E含量（） 酸碱滴定法 氧化还原法 紫外分光光度法 气相色谱法 非水滴定法,中国药典（2005年版）采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为（） 正二十二烷 正二十六烷 正三十烷 正三十二烷 正三十六烷,下列药
