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1、专题2 微生物的培养与应用,课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,一 研究思路,（一）筛选菌株,耐高温的DNA聚合酶,一 研究思路,（一）筛选菌株,耐高温的DNA聚合酶,美国微生物学科布鲁克 1966年发现水生耐热细 菌Taq 分离到耐高温的Taq DNA聚合酶,一 研究思路,（一）筛选菌株,自然界筛选：,根据它对生存环境的要求，到相应的环境 中去寻找。,一 研究思路,（一）筛选菌株,自然界筛选：,根据它对生存环境的要求，到相应的环境 中去寻找。,实验室筛选：,人为提供有利于目的菌株生长的条件（包 括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止 其他微生物生长。,一 研究思路,（一）筛选菌株,选择
2、培养基：,一 研究思路,（一）筛选菌株,选择培养基：,在微生物学中，将允许特定种类的微生物 生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生 长的培养基。目的是从众多微生物中分离 所需要的微生物。,一 研究思路,（二）统计菌落数目,1.显微镜直接计数：,先将待测样品制成悬液，然后取一定量的 悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微 镜下观察到的微生物数目来计算出单位体 积内的微生物总数,一 研究思路,（二）统计菌落数目,1.显微镜直接计数：,先将待测样品制成悬液，然后取一定量的 悬液放在显微镜下进行计数。根据在显微 镜下观察到的微生物数目来计算出单位体 积内的微生物总数,优点：,设备简单、能观察微生物的形态特
3、征。,缺点：,不能区分死菌和活菌。,一 研究思路,（二）统计菌落数目,2.稀释涂布平板计数法:,应用：,统计样品中活菌的数目,原理：,当样品的稀释度足够高时，培养基表面生 长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一 个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能 推测出样品中大约含有多少活菌。,注意：,一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。,一 研究思路,（二）统计菌落数目,2.稀释涂布平板计数法:,第一位同学只涂布了一个平板，没有设置 重复组，因此结果不具有说服力。,第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂 布了3个平板，但是，其中1个平板的计数 结果与另2个相差太远，说明在操作过程 中可能出现了错误，因
4、此，不能简单地将 3个平板的计数值用来求平均值。,一 研究思路,（三）设置对照,增强实验的说服力和准确性。,将待测样品经过一系列的稀释，然后选择 三个稀释度的菌液均匀涂布在平板上，然 后培养。,注意：为了结果接近真实值，可将同一稀 释度菌液涂布到3个或3个以上的平板上， 经培养，计算出菌落的平均数。,一 研究思路,（三）设置对照,判断培养基中是否有杂菌污染：,将未接种的培养基同时进行培养。,判断选择培养基是否具有筛选作用：,对照培养基接种后培养观察菌落数目。,计算公式：,每克样品中的菌株数 =（CV）M,某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的
5、菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） A. 2.34108 B. 2.34109 C. 234 D. 23.4,每克样品中的菌株数 =（CV）M,某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） A. 2.34108 B. 2.34109 C. 234 D. 23.4,每克样品中的菌株数 =（CV）M,二 实验设计,1. 实验设计的内容包括：,实验方案、材料用具、实施步骤和时间 安排等。,二 实验设计,2. 实验流程：,土壤取样,样品系列稀释,涂布平板与培养,观察并记录结果,菌落计数,
6、二 实验设计,2. 实验流程：,（1）土壤取样,从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层 土3 cm左右，再取样，将样品装入事先准 备好的信封中。,（2）样品的稀释,因为不同微生物在土壤中含量不同，其目 的是保证获得菌落数在30300之间。 不同。,二 实验设计,2. 实验流程：,（3）微生物的培养与观察,培养皿编号：104、105、106各编号三个 培养皿。,每个培养皿加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml。,用移液管按照编号分别加入不同浓度土壤稀释,冷却倒置放入3037摄氏度的恒温培养箱中 培养。观察纪录。,液各0. 1ml，转动培养皿，使土壤稀释液与培养基混合均匀。,三 操作提示,1. 无菌操
7、作,2. 做好标记,3. 规划时间,四 结果分析与评价,五 课题延伸,1. 对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要 借助生物化学的方法。,2. 在细菌分解尿素的化学反应中，细菌合 成的脲酶将尿素分解成了氨 。氨会使培 养基的碱性增强，pH升高 。因此，我们 可以通过检测培养基pH变化来判断该化学 反应是否发生。,五 课题延伸,3. 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚 红指示剂。培养某种细菌后，如果pH升高， 指示剂将变红 ，说明该细菌能够分解尿素。,练习,1. 用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的 数目，其结果与实际值相比 A. 比实际值高 B. 比实际值低 C. 和实际值一致 D. 比实际值可能高
8、也可能低,练习,1. 用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的 数目，其结果与实际值相比 A. 比实际值高 B. 比实际值低 C. 和实际值一致 D. 比实际值可能高也可能低,练习,2. 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 A. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水,练习,2. 下列能选择出分解尿素的细菌的培养基是 A. KH2P
9、O4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 葡萄糖、尿素、琼脂、水 B. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 葡萄糖、琼脂、水 C. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 尿素、琼脂、水 D. KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水,专题2 微生物的培养与应用,课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,两个主要目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌,专题2 微生物的培养与应用,课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数,两个主要目的,从土壤中分离出能够分解尿素的细菌,统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌,CO（NH2）2 + H2O,CO2+2NH3,脲酶,
