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1、第二章 实验室检验,第一节 血液检验,一、血样的采集,一、血样的采集,(一)末梢采血 (二)静脉采血 (三)心脏采血,一、血样的采集,根据检验项目及采血量的多少，以及动物的特点，可以选用末稍采血、静脉采血和心脏采血。 (一)末梢采血 适用于采血量少，血液不加抗凝剂而且直接在现场检验的项目。如涂血片，血红蛋白测定、血细胞计数等。马、牛可在耳尖部，猪，羊，兔等在耳背边缘小静脉，鸡则在冠或肉髯。,(二)静脉采血 适用于采血量较多，或在现场不便检查的项目。如血沉测定，红细胞压积容量测定及全面的血常规检查等。除制备血清外，静脉血均应置于盛有抗凝剂的容器中，混匀后以备检查。 马，牛、羊的采血一般多在颈静脉
2、. 猪可在耳静脉或断尾采血，如果小猪在耳静脉采血困难，必要时可在前腔静脉采血。使猪仰卧保定，把两前肢向后方拉直，同时将头向下压，使头颈伸展，充分暴露胸前窝. 禽可在内侧的翅静脉. 狗，猫及肉食兽可在四肢的静脉采血.,血样的采集,(三)心脏采血 禽和实验小动物需要血量较多时可用本法。如鸡的心脏采血， 右侧卧保定，左胸部向上，用l0ml注射器接上5cm长的20号针头，在胸骨脊前端与背部下凹处联线的中点，垂直或稍向前内方刺入23cm，可采得心血，成年鸡每次可抽5一l0ml。兔的心脏采血，在固定板上仰卧保定， 局部剪毛消毒，用左手后4个手指按紧兔的右侧胸壁，拇指感触兔左侧胸壁心脏搏动最强处，右手持注射
3、器垂直刺入，边刺边回抽，如刺中右心室可得暗红色的静脉血，刺中左心室则抽出鲜红色的动脉血。成年兔每次可抽血1020m1。,血样的采集,二、血样的抗凝及处理,(一)血样的抗凝 1.双草酸盐合剂 2乙二胺四乙酸二钠(简 称EDTA二钠) 3柠檬酸钠。 4肝素。 (二)血样的处理,二、血样的抗凝及处理,(一)血样的抗凝 除需分离血清外，自静脉或心脏采出的血液均应加入抗凝剂，以防血样凝固。临床常用的抗凝剂除肝素(具有抗凝血酶的作用)外，多数是以脱钙作用而使血液不能凝固。常用的抗凝剂有下列几种。 1.双草酸盐合剂。草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，蒸馏水100ml。取此液0.5ml(分装于小瓶中，在60以下
4、的烘箱中烘干)，可使5ml血液不凝固。由于草酸钾使红细胞皱缩，草酸铵则使红细胞膨胀，二者按比例混合，可使红细胞大小不致改变，适用于血液检验尤其是红细胞压积容量测定。但由于其具有一定毒性并可使血小板聚集，因此不宜作输血及血小板计数的抗凝剂。 2乙二胺四乙酸二钠(简称EDTA二钠)。常用10水溶液，按每5ml血液加入一至二滴使用，也可以将其水溶液二滴置小瓶中，在60以下烘干备用。此剂抗凝作用强，能保持血细胞的形态，可防止血小板聚集，最适于血液学尤其是血液有形成分的检验。但输血时不能用。,3柠檬酸钠。配成3.8溶液，每0.5ml可使5m1血液不凝固，主要用于输血和血沉测定。不适用于血液化学检验。 4
5、肝素。配成1水溶液放冰箱内保存，用0.1ml可抗凝5ml血液，用此液湿润注射器筒，采血5ml可不致凝固。此剂抗凝作用强，适用于血液有机和无机成分的分析，缺点是价格贵，抗凝时间短，其抗凝血作白细胞分类计数时，血细胞着色不佳。 (二)血样的处理 血涂片应先预以固定。血样最好立即进行检验，否则，必须密封后放入冰箱内保存。用抗凝血作有关化验项目的最长保存时限。白细胞计数是23h，红细胞计数是24h，红细胞压积容量测定是24h血红蛋白测定是23天，血沉测定是23h，血小板计数约1h，网织红细胞计数是23h。,血样的抗凝及处理,三、血液常规检验,（一）红细胞沉降速度测定 （二）血红蛋白含量测定 （三）红细
6、胞计数 （四）白细胞计数 （五）白细胞分类计数,红细胞沉降速度测定,(一)原理 (二)测定方法 (三)注意事项 (四)正常参考值 (五)临床意义,红细胞沉降速度测定,血液加入抗凝剂后，吸入特制的测定管中，在一定时间内红细胞下沉的毫米数，称为红细胞沉降速度，简称血沉。 (一)原理 抗凝血中的红细胞沉降速度的快慢，是一个复杂的物理化学和胶体化学过程，其原理至今仍未完全阐明。一般认为，与血中电荷的含量有关。红细胞与血浆白蛋白带负电荷，而血浆球蛋白，纤维蛋白原和胆固醇却带正电荷，在正常时保持着正、负电荷相对的稳定性，红细胞不易形成串钱状，其沉降速度在正常范围内。在疾病过程中，上述任何一方的数目或含量改
7、变，直接影响正负电荷相对稳定性。假如正电荷增多，则负电荷相对减少，红细胞互相吸附，形成串钱状而血沉加快，反之，红细胞互相排斥，则血沉变慢。 此外，认为与红细胞的下沉力和血浆的阻逆力之间是否保持一定的平衡状态有关。,(二)测定方法 测定血沉的方法很多，有六五型血沉管法，魏氏法，潘氏法、温氏法、微量法等。我国兽医临床上主要应用魏氏法。 魏(Westergren)氏法：魏氏血沉管全长30cm，内径2.5mm，管壁有200个刻度，每一刻度距离为1mm，自上而下标有0-200，其容量为1m1，附有特制的血沉架。 操作时，先取3.8柠檬酸钠溶液1m1，加入小试管内，然后静脉采血4m1，混匀。用魏氏管吸此抗
8、凝血至“0”刻度处，然后在室温下将血沉管垂直放于血沉架上，其观察时间与上法相同。也可用5m1注射器吸取灭菌的3.8柠檬酸钠溶液1m1，再采血4m1，混匀后，从魏氏管下部将抗凝血注至“0”刻度处，立于血沉架上，进行观察。,红细胞沉降速度测定,(三)注意事项 血沉管必须垂直静立，否则会使血沉加快。但由于黄牛，奶牛，羊的血沉极为缓慢，为尽快测出结果，可将血沉架倾斜60角放置。 温度高低，能影响血沉速度。温度越高，血沉越快，反之，可使其减慢，故血沉测定以室温20左右为宜。冷藏的血液，应先把血温回升至室温启再做检查。 采血后应在3h内测完，如放置时间延长，可使血沉减慢。魏氏法中血液与抗凝剂的比例为4：1
9、，应准确，如比例增加，血沉减慢，反之则血沉加快。,红细胞沉降速度测定,(四)正常参考值 各种方法测得的血沉值不同，故在报告测定结果时应注明所用方法。家畜的血沉正常参考值见表。,(五)临床意义 血沉测定是一项非特异性的试验，仅能说明体内存在病理过程，并不能单独据此来确诊疾病。如前所述，影响血沉的因素，主要是红细胞数和血浆蛋白质的含量和组成，因此，其临床意义主要涉及以下方面。 1.血沉加快。常见于各种贫血及白血病时(由于红细胞数减少，血沉加快)，目前仍把它作为普检马传染性贫血的重要指标之一，亦见于急性全身性感染，各种炎症，组织损伤及坏死时(由于血浆球蛋白或纤维蛋白原相对或绝对增高，均可使血沉加快)
10、，恶性肿瘤(由于上述二方面的原因)，而使血沉加快。 2血沉减慢。主要见于各种原因所致的脱水而血液浓缩时，以及某些引起纤维蛋白原含量严重减低的肝脏疾患。,红细胞沉降速度测定,血红蛋白含量测定,血红蛋白(简称Hb)测定方法很多，最常用的是沙利(Sahli)氏目视比色法，虽然精确度有一定误差，但方法简便快速，目前仍被兽医临床广泛应用。 (一)原理 红细胞遇酸溶解，释出血红蛋白，并被酸化成褐色的酸性血红素，稀释后与标准色柱比色，即可测定每100ml血液中血红蛋白的克数或百分数。,(二)器械和试剂 1器械。沙利氏血红蛋白计一套(内有测定管一支，装有标准褐色玻璃比色板的比色座一个，刻有10mm3和20mm
11、3容积的吸血管一支)，在测定管上有两种刻度，从下往上，一侧有224的刻度，表示100m1血液中所含血红蛋白克数，另一侧有20160的刻度，表示100ml血液中血红蛋白的百分数。国产的血红蛋白计是以每100ml血液含14.5g血红蛋白为100而设制。 2试剂。110molL盐酸(亦可用1盐酸代替)。取浓盐酸8.5m1于1000m1容量瓶中，然后加蒸馏水至刻度。,血红蛋白含量测定,(三)方法 于测定管内加入110molL盐酸至刻度“2”处。用吸血管吸抗凝血(或耳尖血)至刻度20mm3处，擦净管外壁的血迹，将血液吹入测定管的盐酸液中，再吸取上清的盐酸液至刻度处反复洗涤数次，轻轻摇动测定管(或用玻棒搅
12、拌)，使血液与盐酸混合，静置10min。 慢慢沿测定管壁逐滴加入蒸馏水(或110m01L盐酸)，边加边混匀，边观察，直至液体颜色与标准色柱一致时为止。读取测定管内液体凹面的刻度数，即为100m1血液中血红蛋白的克数或百分数。,血红蛋白含量测定,(四)注意事项 要注意保持血红蛋白计原套用具，不要随意掉换。抗凝血要摇匀，吸血要准。不要向测定管中用力吹吸，以防产生气泡，万一产生了气泡，可用小玻棒沾少量95酒精，然后接触气泡，即可消除。静置时间以10min为准，否则结果可能偏高或偏低。为使结果更为准确，在读数后再加蒸馏水1滴，然后读数，如液体色泽变淡，以前一次的读数为准，如液体色泽不变淡，则以后一次的
13、读数为准。,血红蛋白含量测定,(五)正常参考值 一般家畜的正常值。,(六)临床意义 与红细胞计数的临床意义相一致。,血红蛋白含量测定,红细胞计数,计算每mm3血液内所含红细胞数目，称为红细胞计数(Red blood cell count，简称RBC count)。其计数方法有显微镜计数法，光电比浊法，电子计数仪计数法等，目前临床多采用在试管内稀释血液后的显微镜计数法。 (一)原理 用适当的稀释液将血液作200倍稀释，滴入计算室后，在显微镜下计数，经过换算即可求得每mm3血液内的红细胞数。经稀释液作用虽仍保留白细胞，但对红细胞计数影响不大，因为一般情况下红细胞与白细胞之比约为1000：1。,(二
14、)器械和稀释液 1器械 器械包括以下方面。 (1)血细胞计中的计算板。 (2)血细胞计中的红细胞吸管。 (3)血盖片。 (4)沙利氏吸血管，2m1刻度吸管，小试管，显微镜。 2稀释液 稀释液主要有以下两种。 (1)0.85氯化钠溶液。 (2)赫姆(Hayem)氏液。由氯化钠1.0g，结晶硫酸钠5.0g，氯化高汞0.5g,蒸馏水加至200ml，溶解后过滤备用。,红细胞计数,(三)方法 试管稀释法；用2ml刻度吸管吸取红细胞稀释液2ml，置于小试管中用沙利氏吸血管吸血10 mm3 (0.01m1)，擦去管外余血，轻轻吹入试管内稀释液底部，再吸上清液冲洗吸管3次，然后立即摇匀。把血盖片覆盖于计算室上
15、，用小玻棒沾取已混匀的红细胞悬液一滴，轻轻接触两者结合处，使悬液自然流入计算室内。静置3min后，即可计数。 在镜下计数时，先用低倍(10X)物镜找到计算室中央的大方格(红细胞计数区)，然后转用高倍(40X)物镜，计数中央大方格内四角的4个和中央的一个中方格，共计5个中方格(80个小方格)内的全部红细胞数(或用对角线的方法数5个中方格)。 为避免重复和遗漏，计数时要按一定的顺序进行。并且对压在方格左边和上边线上的红细胞均计在本格内，数左不数右”的计数原则。,红细胞计数,计数完毕，可按下列公式计算：R/80 *400*200*10=1mm3 血液中红细胞总数 R为5个中方格(即80个小方格)内的
16、红细胞总数，400为一个大方格(即1mm3面积)内共分400个小方格，200为稀释倍数(实际稀释201倍，即稀释液2m1，吸血0.0lml。为方便起见，可忽略不计)，为了换算成1mm容积内的红细胞数，因为盖片与计算室之间的深度为0.1mm,所以要乘10。上式简化后为：R*l0，000=红细胞数mm3血液,红细胞计数,(五)正常参考值 我国幅原辽阔，各地环境条件，海拔高度不同，又受家畜年龄，性别等因素的限制，即使同一品种的动物，红细胞数亦有一定差异。各地报道数据有所不同。,红细胞计数,(六)临床意义 红细胞数与血红蛋白含量的病理变化通常是平行一致的，表现为增多或减少，因而其临床意义基本相同。只是在某些类型贫血时，两者的减少程度可能不相一致，需要计算红细胞平均指数才能准确鉴别。 1红细胞数增多和血红蛋白含量增多。临床上绝大多数为相对性增多，而绝对性增多较少见。 (1)相对性增多。是由于机体脱水，造成血液浓缩的缘故。如剧烈腹泻，呕吐，大出汗，多尿，大面积烧伤，渗出液和漏出液大量形成、饮水不
