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1、I 紫外分光光度法快速测定食品中三聚氰胺含量 摘 要 以牛奶、奶粉等乳制品为研究对象，建立紫外分光光度法快速测 定食品中三聚氰胺含量的方法。以三氯乙酸作为溶剂，用T6新世纪紫 外分光光度计在波长为240nm下测定三聚氰胺的吸光度。实验结果表明： 三聚氰胺在浓度范围为1.69.6g/ml内线性关系良好；表观摩尔吸 光系数为6.3104L/(molcm)；回收率为98.3%107.8%，相对标准误 差小于1.7%。该方法准确、快速、简便,可用于测定实际样品，为三聚 氰胺的检测提供了新方法。 关键词：紫外分光光度计;食品;三聚氰胺 1 Rapid content determination of m
2、elamine in food power by UV-spectrophotometer Abstract With milk, milk powder, etc dairy for research object, establish UV spectrophotometry determine the food melamine content method. With theTrichloroacetic acid as solvent, the wave of melamine absorbency is determined with UV-T6 in new century-sp
3、ectrophotometer at 240nm. Showthat: a good linear relationship exists when the concent ration of melaminefalls within the range of 1.69.6g/mL; Its apparent molar absorption coeffiencts are 6.3104L/(mol cm); Recovery is 98.3% 107.8%. The method is accurate, rapid, simple, used for real samples fordet
4、ermination of melamine, provides a new method of detection. Key words: UV spectrophotometer;food; melamine 2 目 录 引引 言言1 第一章第一章 材料与方法材料与方法2 1.1 试验材料2 1.2 仪器设备2 1.3 试验设计2 1.3.1 溶液的配制2 1.3.2 检测波长的选择.3 1.3.3 标准曲线的绘制.3 1.3.4 回收率试验4 1.3.5 样品的测定5 第二章第二章 结果与分析结果与分析6 2.1 结果.6 2.2 分析.6 2.3 提取溶剂的选择.6 2.4 结论.7
5、参考文献参考文献8 谢谢 辞辞.9 1 引 言 三鹿牌婴幼儿奶粉违法添加三聚氰胺的事件，冲击了中国整个奶制品行业，严 重损害了群众利益，造成了极其恶劣的社会影响。动物性食品及动物饲料中同样也 存在三聚氰胺残留问题，三聚氰胺在动物源性食品中的潜在危害正引起全社会的关 注。 三聚氰胺（Melamine） ，是一种三嗪类含氮杂环有机化合物，重要的氮杂环有 机化工原料。简称三胺，又叫2，4，6-三氨基-1，3，5-三嗪、2，4，6-三氨基脲、 蜜胺、三聚氰酰胺、氰脲三酰胺，分子式C3N3（NH2）3，分子量126.12。三聚氰胺 为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573gcm3 (16)。常压熔点35
6、4（分解） ； 快速加热升华，升华温度300。它溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不 溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等，低 毒。在一般情况下较稳定，但在高温下可能会分解放出氰化物。呈弱碱性（pKb=8） ， 与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下， 与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（pH值5.56.5）羟甲基的衍 生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取 代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。 最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲醛树脂（MF）
7、的原料，是不允许添加到食品中 的。不法商人利用其含氮量高(约66.7%)且无异味,价格低廉,用传统的凯氏定氮法 无法区别是否是对动物机体有益的蛋白氮还是不能被利用的非蛋白氮,在加工食品 或饲料中添加三聚氰胺能造成“高蛋白质含量”的假象。食品和饲料中掺入三聚氰 胺会对人和动物健康产生巨大的危害。2004年和2007年,韩国、台湾和美国相继发 生狗、猫等宠物因进食含有三聚氰胺的宠物饲料而导致肾功能衰竭甚至导致死亡的 事1-3。研究显示,三聚氰胺主要引起肾脏衰竭。因此通过有效的技术手段,对食品 中三聚氰胺残留进行检测,确保食品安全性具有十分重要意义。 目前，国家质量标准规定了高效液相色谱法、气相色谱
8、-质谱联用法、液相色 2 谱-质谱/质谱法三种方法为三聚氰胺的检测方法，其中高效液相色谱法为确证法。 许多研究者采用了该法及其改进法测定食品中的三聚氰胺4 - 6 ,也有采用反相高 效液相色谱法7 、质谱方法测定食品中的三聚氰胺的报道8-10 ，林立等11 报道 了离子色谱-紫外检测测定液态奶中的三聚氰胺。但这些方法操作需时较长,设备要 求高。 三聚氰胺结构中有不饱和共轭双键,可在紫外区产生较强的吸收,故可用紫外分 光光度法快速测定其含量,且此法比高效液相色谱法更经济、省时和易于推广。本 文以牛奶、奶粉等乳制品作为样品,以三氯乙酸和乙酸铅作为提取剂,用紫外分光光 度法在检测波长为240nm处测
9、定三聚氰胺的含量。 第一章 材料与方法 1.1 试验材料试验材料 三聚氰胺标准样品；乙酸铅(分析纯)；三氯乙酸(分析纯)；实验用水为重蒸水。 1.2 仪器设备仪器设备 T6新世纪紫外-可见分光光度计，FA1004A型电子分析天平，烧杯，玻璃棒，离 心机，移液管，10ml容量瓶，50ml容量瓶，吸耳球。 1.3 试验设计试验设计 1.3.1 溶液的配制溶液的配制 三氯乙酸溶液的配制:准确称取10g三氯乙酸用重蒸水配制成1%的溶液,置于1l 3 容量瓶中作为溶剂备用。 三聚氰胺母液的配制:准确称取4mg三聚氰胺用配制好的1%的三氯乙酸溶液作为 溶剂,配制浓度为0.08mg/ml的三聚氰胺溶液于50
10、mL容量瓶中备用。 1.3.2 检测波长的选择检测波长的选择 用1%的三氯乙酸溶液作为空白对照,用T6新世纪紫外可见分光光度计,将质量 浓度分2.14,3.62,5.10,6.58g/ml的三聚氰胺溶液,在波长200400nm范围内扫描， 发现三聚氰胺在236nm波长处有最大吸收,综合各方面条件及相关文献，选择240nm 为测定三聚氰胺含量的适宜检测波长。 1.3.3 标准曲线的绘制标准曲线的绘制 分别吸取浓度为0.08mg/ml的母液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2ml到10ml容量瓶中,用 1%三氯乙酸溶液进行定容。在240nm的检测波长下测定其吸光度值A,然后以浓度为 横坐
11、标,吸光度为纵坐标绘制三聚氰胺标准曲线,并对其进行线性回归。实验中三聚 氰胺浓度及其对应的吸光度值A数据见表1和图1。 表1 三聚氰胺浓度及其对应的吸光度值A数据 三聚氰胺浓度 （g/ml） 吸光度值 A 1.60.1039 3.2 0.1800 4.80.2620 6.40.3323 8.0 0.4085 9.60.4847 斜率(k)=0.0475 4 三聚氰胺标准曲线图 y = 0.0475x + 0.0293 R2 = 0.9997 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 024681012 三聚氰胺浓度（ug/ml） 吸光度值A 吸光度值A 线性(吸光度 值A) 图1 三
12、聚氰胺标准曲线图 从表1和图1可知，回归方程为y=0.0475x+0.0293,表观摩尔吸光系为 6.38104L/(molcm),相关系数r=0.9997,实验结果表明,工作曲线在所选定的浓 度范围内具有很好的线性关系。 1.3.4 回收率试验回收率试验 取适量三聚氰胺样品作为对照,用1%的三氯乙酸作为溶剂,在线性范围内配制高、 中、低3个浓度的样品(每个浓度各有3个平行样,共9个样),定容,在240nm下分别测 定其吸光度,测得的平均回收率为98.3%107.8%，相对标准误差RSD小于1.7%。结 果见表2 b=0.0293 回归方程 y=0.0475x+0.0293 5 表2 三聚氰胺
13、回收率试验结果 加入值（g/ml) 测定值（g/ml) 平均回收率/% RSD/% 2.362 2.1582.334 107.81.7 2.286 5.563 5.7805.794 98.9 1.2 5.695 7.732 7.8607.691 98.3 0.4 7.75 1.3.5 样品的测定样品的测定 称取约0.4g牛奶样品(精确至0.01g)于100ml烧杯中,加入配好的1%三氯乙酸 50ml。用璃棒不停搅拌10min,使牛奶样品全部均匀散布在溶液中,加入2ml2%的乙酸 铅溶液,静止沉降15min,取上清液在离心机中以5000r/min离心10分钟，然后取离心 过的上清液过孔径0.45
14、m有机滤膜,供测试用。并将测定结果与高效液相色谱法进 行比较,结果见表3。 表3 牛奶样品测定结果对比(g/kg) 牛奶样品 12 3 平均值 6 本法 647.33654.68 657.56 653.19 色谱法 687.6 692.5 691.4 690.5 第二章 结果与分析 2.1 结果结果 结果见表 3,可以看出,检测结果与高效液相色谱法基本吻合。 2.2 分析分析 三聚氰胺回收率试验中的相关计算按如下公式计算： d=x-_x 式中： d-偏差 x-三聚氰胺回收的测定值 _x-三聚氰胺回收测定值的平均值 相对标准差（RSD%）=（SX）100% r-相关系数 r值在-1r1之间，即当
15、0r1与A有关系，r越接近1，A 与浓度的线性关系越好。 2.3 提取溶剂的选择提取溶剂的选择 三聚氰胺与酸反应生成三聚氰胺盐,而且酸性条件下有利于样品中蛋白质的变 性,故宜采用酸性溶液提取三聚氰胺，如本实验中用到的三氯乙酸溶液。因为加入 重金属盐类同样起沉淀蛋白的作用，此外提取溶剂中加入乙酸盐,可以与三氯乙酸 形成缓冲盐而减少pH的波动变化,有利于待测物的稳定与提取效果,减少干扰如本实 7 验室中用到的乙酸铅溶液。 2.4 结论结论 实验表明,此检测方法操作准确，快速，简便,具有良好的准确性和回收率,检 测限可达到1.0g/kg,实验检测结果与高效液相色谱相比较二者基本吻合。实验 所用仪器应
16、用比较广泛,价格相对便宜,应用价值较高,可满足各行业实验室对三聚 氰胺分析检测的要求。 8 参考文献 1Brown C A, Jeong K S, Poppenga R H, etal1Outbreaks ofrenalfailure associated with melamine and cyanuric acid in dogsand cats in 2004 and2007J1Vet Diagn Invest, 2007,19:525- 5311. 2Thomp son M E, Lewin- Smith M R, Kalasinsky V F, et al1Characterization of melamine - containing and calcium oxalatecrystalsin three dogs with suspected pet food-inducednephrotoxicosis
