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1、临床感染 之 病原体检验,常见病原菌,血液标本的病原菌的检验,病原菌的检验程序,1.标本采集 2.标本直接检查 (1)直接显微镜检查; (2)抗原检测; (3)核酸检测; 3.分离培养与鉴定 (1)培养基选择; (2)分离培养与鉴定; 4.抗体检测 常用ELISA、间接免疫荧光 技术等方法; 5.药物敏感性试验,临床意义,1.葡萄球菌菌血症 由耐甲氧西林金黄色葡 萄球菌(MRSA)及凝固酶阴性葡萄球菌引起 的逐年增多,占1015。 2.肠球菌菌血症 约占10,常见泌尿生殖道、 消化道和腹腔感染的病人。 3.G-杆菌菌血症 主要侵犯免疫功能低下的病人。,4. L型菌感染菌血症 使用抑制细胞壁的抗
2、 生素,由缺损细胞壁的细菌感染所致。 5厌氧菌菌血症 常合并需氧菌感染,症 状重而复杂。 6真菌血症 常由条件致病性真菌引起,有 念珠菌、曲霉和毛霉等。 7医院感染菌血症 近年来明显增多,占 3060。,第二节 中枢神经系统感染,1.常见病原体 G+菌 葡萄球菌,肺炎链球菌, B群、 A群链球菌,消化链球菌,结核分枝 杆菌,产单核细胞李斯特菌、炭疽 芽胞杆菌; G-菌 脑膜炎奈瑟菌,大肠埃希菌,铜 绿假单胞菌,卡他布兰汉菌,类杆菌, 不动杆菌,肺炎克雷白杆菌;,病毒 乙型脑炎病毒,柯萨奇病 毒A 、B,脊髓灰质炎病毒,新肠 道病毒6871,狂犬病毒; 真菌及其他 新生隐球菌,白假 丝酵母菌,钩
3、端螺旋体;,2.微生物检验程序,见第一节血液感染或有关章节。 对婴幼儿不能腰穿时,用PCR技术检测外周 血,对脑膜炎条瑟菌感染者的阳性率为100, 且不受抗生素药物治疗的影响; 涂片和结核分枝杆菌培养阳性率有限,且时 间长,用 PCR技术检测脑脊液中结核分枝杆 菌DNA,检出率高,快速灵敏和特异,但要严 格操作规程,避免假阳性。,3.抗体检测,为病毒检测的快速诊断方法,较常用。 (1)中和试验:主要检测中和抗体lgG,此抗 体持续时间长有诊断意义,阳性率和特异 性均高。双份血清效价4倍增高。 (2)特异性IgM抗体测定:此抗体在病后4天即 可出现,2周可达高峰,常用于早期诊断。 用 ELISA
4、、间接免疫荧光法等检测,敏感 性和特异性较高。,(3)补体结合试验:补体结合抗体为lgG 抗体,常在病后第二周出现,56周 达高峰,单份血清1:4为阳性,双份 血清效价增高4倍为阳性,用于回顾 性诊断或流行病学调查。,(4)血凝抑制试验:可用于临床诊断 及流行病学调查。血凝抑制抗体 在病后5天出现, 2周时达高峰, 双份血清抗体效价增高4倍以上 有诊断价值,阳性率高于补体结 合试验,但可出现假阳性。,4.临床意义,1细菌性脑膜炎是常见类型,其中以 流行性脑脊髓膜炎为常见,结核性 脑膜炎呈回升趋势,为防治重点。 肺炎球菌、链球菌脑膜炎仍常见, 流感嗜血杆菌脑膜炎以及其他G-杆 菌性脑膜炎有增多趋
5、势。,2真菌性脑膜炎最常见是隐球菌 脑膜炎,其他真菌性脑膜炎如 白假丝酵母菌、球孢子菌渐增 多,免疫功能低下患者易并发。,3流行性乙型脑炎是人兽共患的自然 疫源性疾病。 4肠道病毒对中枢神经系统的危害性 已逐渐引起人们的关注和重视。还 不断发现新肠道病毒68-71型引起的 脑膜炎及脑炎。,第三节 创伤和外科感染 1.常见病原菌,2.微生物检验程序,见第一节血液感染或有关章节。 取创伤分泌物和脓液作标本;放 线菌首先要检出标本中的硫磺颗 粒;检测结核分枝杆菌作抗酸染色 镜检;检测厌氧菌要作厌氧培养。 由创伤、手术、侵人性器械操作等 外科治疗引起的感染最为常见,并 日渐增多。,第四节 上呼吸道感染
6、,(一)常见病原体 1.革兰阳性 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓 链球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒 状杆菌、厌氧菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母 菌、放线菌、奋森螺旋体; 2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、 铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、不动 杆菌、百日咳杆菌、军团菌、肺炎支原体,(二)细菌学检验程序,1. 细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。 2. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。 由于菌群复杂,正常寄生菌和种类繁多, 一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病 有关,另外由于接受药物治疗,使某些细 菌受到抑制,可影响阳性检出率。因此, 在分析结果时
7、应紧密结合临床。,3. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断;还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断;对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义,应结合临床。,4. 呼吸道还可见病毒感染,常见 普通感冒或流行性感冒,咽炎 和扁桃腺炎等,均应结合临床 进行诊断。,第五节 下呼吸道感染,(一)常见病原体 1.革兰阳性 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、 肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、结核 分枝杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆 菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲霉;,2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠 埃希菌、克雷白杆菌、铜绿假单胞 菌、
8、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、 军团菌、支原体,3.病毒 腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、纯疱疹病毒、麻疹病毒等,(二)细菌学检验程序 一般要求下呼吸道感染培养的细菌 浓度应107CFUml,可视为病原 菌,104CFUml视为污染菌。介于 两者之间时,要连续分离培养两次 以上。,痰培养标本的前处理:用无菌盐水 将洗涤3次,洗去痰中的常居菌, 然后加入等量的(pH76)1胰酶 溶液,放置3790min即可使痰液 均质化。,支气管分泌物等要离心沉淀,以生理 盐水适当稀释后,直接涂片染色镜检: 1)正染色法:适用于多种标本及培养 物,将标本固定于洁净玻片上直接 染色。常用革兰
9、染色,苏本索一伊 红染色(HE),乳酸酚棉蓝染色,过 碘酸锡夫染色(PAS),嗜银染色(GMS) 等;,2)负染色法:用真菌不着色而使背 景着色,检查新型隐球菌,如用 墨汁负染色镜检找隐球菌。,(三)临床意义,1.下呼吸道感染指肺实质性炎症的肺 炎和支气管粘膜炎症的支气管炎, 是病死率高的疾病。近几年来呈上 升趋势。,2.细菌学检查对诊断有重要意义, 采集痰要来自于下呼吸道合格 的标本,提高检出率和阳性的 正确率。,3.细菌性肺炎为最常见的类型,肺 炎链球菌所致仍为常见,由流感 嗜血杆菌,金黄色葡萄球菌、MRSA 和G-杆菌所致肺炎比例明显上升, 军团菌肺炎引起了重视。在医院感 染中,条件致病
10、菌和耐药菌的G-杆 菌占50以上,成为医院内肺炎的 主要致病菌。,4.支原体肺炎常以不典型肺炎表现, 近年发生率上升, 约80的慢性 气管炎病人合并有支原体感染。约 占肺炎的10-20 。,5.真菌性肺炎是致病性真菌和条件致 病性真菌所引起。目前以条件致病 性真菌感染致病为主,并呈上升趋 势,以白假丝酵母菌为主,毛霉、 曲霉和隐球菌也常见。常合并多种 细菌感染。,第六节 消化道感染,()常见的病原体 1.肠毒素为主的病原菌 霍乱弧菌、志贺菌(福氏、宋内)、 大肠埃希菌(ETEC、EHEC、EAggEC)、 金黄色葡萄球菌、难梭菌、产气荚 膜梭菌。,2.侵袭性为主的病原菌 沙门菌、大肠埃希菌(E
11、PEC、EIEC )、 志贺菌(鲍氏、志贺)、弯曲菌、副溶 血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、结核 分枝杆菌、白假丝酵母菌。,3.病毒 轮状病毒、埃可病毒、Norwolk 病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病 毒、腺病毒。,病原学检验程序,采集脓血或糊状新鲜粪便,应在急性 期,使用抗生素前进行肠道细菌多为 G-杆菌,形态区分困难,不做涂片镜 检。检验程序见第一节血液感染。,1.临床意义,1感染性腹泻 最为常见,为胃肠炎 的症状,由多种病原体感染所致。 2细菌性痢疾是指由志贺菌属(福氏和 宋内氏)引起的肠道传染病。常有里 急后重和脓血样便,中毒性痢疾见于 小儿。发病率呈下降趋势。粪培养对 诊断有价值。,3细
12、菌性食物中毒常见于沙门菌、副 溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、葡 萄球菌、肉毒棱菌、腊样芽胞杆菌 食物中毒。多发生在夏秋季,以暴 发和集体发病为特征。,4致病性大肠埃希菌的肠道感染分 为5类。即ETEC可致霍乱样肠毒素 水泻,常见于儿童和旅行者腹泻; EPEC可引起婴幼儿腹泻;EIEC可 引起志贺菌样粘液脓血便;EHEC 的0157:H7血清型可引起出血性 肠炎和溶血性尿毒综合征;EAggEC 是新近报道可引起慢性腹泻的大肠 埃希菌。,5消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要 部位是胃及十二指肠球部。大量 研究及临床证明胃炎、消化性溃 疡主要是HP所引起,HP可能还参 与了胃癌的形成。从此消化性溃 疡经抗感
13、染的治疗而成为一个新 的概念,并取得好的疗效。,6近年来胃肠炎的病毒感染呈上升的 趋势 (1)轮状病毒常引起幼儿腹泻; (2)腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原, 还可引起成人腹泻; (3)Norwolk病毒常感染成人和大龄儿 童,引起水样便或黄稀便的腹泻; (4)埃可病毒常引起婴幼儿腹泻。,第七节 尿路感染,(一)常见病原菌 80为G-杆菌,大肠埃希菌占70以上, 其次为变形杆菌、铜绿假单胞菌、克雷伯 杆菌、肠杆菌、沙雷菌、产气杆菌、沙门 菌等;20为G+菌,其中以肠球菌为多见, 次为葡萄球菌、粪链球菌、结核分枝杆菌, 少数为厌氧菌等; 支原体、衣原体、真菌感染呈上升趋势; 急性感染多见于大肠埃
14、希菌,慢性感染多 见于变形杆菌和铜绿假单胞菌。,(二)病原学检验程序,(1)要严格无菌操作,收集晨起第一次清洁 中段尿标本,其结果才可靠。 (2)标本直接显微镜检查 可用1滴尿涂片 作染色镜检是有意义的方法。如平均 每个视野1个细菌(表示细菌定量培 养 105ml)率达90以上。 (3)尿细菌定量培养诊断标准是以细菌数 105ml为真性细菌尿 ,104-105ml为 可疑阳性,需再复查。,(三)临床意义,1.尿路感染主要经尿道口上行感染所致,极少数为血行感染,即从体内感染灶侵入血流到达肾引起肾盂肾炎。尿液细菌学检验可反映肾、膀胱、尿道、前列腺等处的炎症变化。临床表现主要有尿频、尿急、尿 痛、排
15、尿困难和腰痛等。 2尿路感染常见肾盂肾炎(急性和慢性)、膀胱炎(急性为主)、尿道炎(细菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎)、前列腺炎(常见慢性)等。 3尿路感染需要明确部位和急性 与慢性,主要依病原菌检测,还要紧密结合临床综合考虑作出诊断,药物敏感试验对指导临床合理使用有效抗生素有重要意义。,第八节 性传播疾病,性传播疾病(STD)是指以性行为为主要传播途径的一组传染病。 STD有二十几种,1991年8月我国确认8种STD为重要防治的病种,如梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、艾滋病、尖锐湿疣、生殖器疱疹8种。 STD在概念与病种范围上不同于传统的性病,性病是指以性交为主
16、要传播途径的传染病。性病只包括梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿和腹股沟肉芽肿5种。,一、梅毒螺旋体感染的检查,(一)标本采集 取下疳分泌物或二期皮疹或 病灶渗出物或局部淋巴结等穿刺物为标本。 (二)微生物检验 1直接显微镜检查 用暗视野显微镜直接 镜检。有动力的梅毒螺旋体。镀银染色 用光学显微镜直接检查螺旋体。用直接 荧光检测法(IFA)检查见亮绿色荧光的梅毒 螺旋体,有诊断价值,主要适用于一、二期 梅毒。,2梅毒血清学试验 非螺旋体抗原 试验主要测定反应素,如VDRI、USR、 RPR试验为筛查试验;密螺旋体抗 原试验:主要测定特异性抗体,如 TPHA、FTAABS、FTA-ABSDS、MHA- TP试验等,特异性高为证实试验。,3PCR 快速敏感特异,可检测梅毒 螺旋体DNA片段,对分析疑难病例 有帮助。 4暗视野镜检和血清学试验为目前 实验室检查的金标准。,(三)临床意义,1梅毒分期:一期梅毒为硬下疳, 病灶中有大量螺旋体,适用涂片 直接镜检;二期梅毒是梅