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1、临床感染 之 病原体检验,常见病原菌,血液标本的病原菌的检验,病原菌的检验程序,1.标本采集 2.标本直接检查 (1)直接显微镜检查; (2)抗原检测; (3)核酸检测; 3.分离培养与鉴定 (1)培养基选择; (2)分离培养与鉴定; 4.抗体检测 常用ELISA、间接免疫荧光 技术等方法; 5.药物敏感性试验,临床意义,1.葡萄球菌菌血症 由耐甲氧西林金黄色葡 萄球菌(MRSA)及凝固酶阴性葡萄球菌引起 的逐年增多，占1015。 2.肠球菌菌血症 约占10,常见泌尿生殖道、 消化道和腹腔感染的病人。 3.G-杆菌菌血症 主要侵犯免疫功能低下的病人。,4. L型菌感染菌血症 使用抑制细胞壁的抗
2、 生素，由缺损细胞壁的细菌感染所致。 5厌氧菌菌血症 常合并需氧菌感染，症 状重而复杂。 6真菌血症 常由条件致病性真菌引起，有 念珠菌、曲霉和毛霉等。 7医院感染菌血症 近年来明显增多，占 3060。,第二节 中枢神经系统感染,1.常见病原体 G+菌 葡萄球菌，肺炎链球菌， B群、 A群链球菌，消化链球菌，结核分枝 杆菌，产单核细胞李斯特菌、炭疽 芽胞杆菌; G-菌 脑膜炎奈瑟菌，大肠埃希菌，铜 绿假单胞菌，卡他布兰汉菌，类杆菌， 不动杆菌，肺炎克雷白杆菌;,病毒 乙型脑炎病毒,柯萨奇病 毒A 、B,脊髓灰质炎病毒,新肠 道病毒6871,狂犬病毒; 真菌及其他 新生隐球菌,白假 丝酵母菌,钩
3、端螺旋体;,2.微生物检验程序,见第一节血液感染或有关章节。 对婴幼儿不能腰穿时，用PCR技术检测外周 血，对脑膜炎条瑟菌感染者的阳性率为100， 且不受抗生素药物治疗的影响； 涂片和结核分枝杆菌培养阳性率有限，且时 间长，用 PCR技术检测脑脊液中结核分枝杆 菌DNA，检出率高，快速灵敏和特异，但要严 格操作规程，避免假阳性。,3.抗体检测,为病毒检测的快速诊断方法，较常用。 (1)中和试验：主要检测中和抗体lgG，此抗 体持续时间长有诊断意义，阳性率和特异 性均高。双份血清效价4倍增高。 (2)特异性IgM抗体测定：此抗体在病后4天即 可出现，2周可达高峰，常用于早期诊断。 用 ELISA
4、、间接免疫荧光法等检测，敏感 性和特异性较高。,(3)补体结合试验：补体结合抗体为lgG 抗体，常在病后第二周出现，56周 达高峰，单份血清1：4为阳性，双份 血清效价增高4倍为阳性，用于回顾 性诊断或流行病学调查。,(4)血凝抑制试验：可用于临床诊断 及流行病学调查。血凝抑制抗体 在病后5天出现， 2周时达高峰， 双份血清抗体效价增高4倍以上 有诊断价值，阳性率高于补体结 合试验，但可出现假阳性。,4.临床意义,1细菌性脑膜炎是常见类型，其中以 流行性脑脊髓膜炎为常见，结核性 脑膜炎呈回升趋势，为防治重点。 肺炎球菌、链球菌脑膜炎仍常见， 流感嗜血杆菌脑膜炎以及其他G-杆 菌性脑膜炎有增多趋
5、势。,2真菌性脑膜炎最常见是隐球菌 脑膜炎，其他真菌性脑膜炎如 白假丝酵母菌、球孢子菌渐增 多，免疫功能低下患者易并发。,3流行性乙型脑炎是人兽共患的自然 疫源性疾病。 4肠道病毒对中枢神经系统的危害性 已逐渐引起人们的关注和重视。还 不断发现新肠道病毒68-71型引起的 脑膜炎及脑炎。,第三节 创伤和外科感染 1.常见病原菌,2.微生物检验程序,见第一节血液感染或有关章节。 取创伤分泌物和脓液作标本；放 线菌首先要检出标本中的硫磺颗 粒；检测结核分枝杆菌作抗酸染色 镜检；检测厌氧菌要作厌氧培养。 由创伤、手术、侵人性器械操作等 外科治疗引起的感染最为常见，并 日渐增多。,第四节 上呼吸道感染
6、,(一)常见病原体 1.革兰阳性 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、化脓 链球菌、肺炎链球菌、结核分枝杆菌、白喉棒 状杆菌、厌氧菌、炭疽芽胞杆菌、白假丝酵母 菌、放线菌、奋森螺旋体; 2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、大肠埃希菌、肺炎克雷白杆菌、 铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、不动 杆菌、百日咳杆菌、军团菌、肺炎支原体,(二)细菌学检验程序,1. 细菌学检验见第一节血液感染及有关章节。 2. 病原体检测只对某些疾病诊断具有意义。 由于菌群复杂，正常寄生菌和种类繁多， 一份咽拭子分离出来的细菌不一定与疾病 有关，另外由于接受药物治疗，使某些细 菌受到抑制，可影响阳性检出率。因此， 在分析结果时
7、应紧密结合临床。,3. 鼻咽拭子标本的检测有助于猩红热、风湿热、急性肾小球肾炎病人的临床诊断；还可检出化脓链球菌、奋森螺旋体、脑膜炎奈瑟菌、麻风杆菌等以协助诊断；对白喉、百日咳或口腔念珠菌感染的诊断有意义，应结合临床。,4. 呼吸道还可见病毒感染，常见 普通感冒或流行性感冒，咽炎 和扁桃腺炎等，均应结合临床 进行诊断。,第五节 下呼吸道感染,(一)常见病原体 1.革兰阳性 金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、 肺炎链球菌、A群链球菌、肠球菌、结核 分枝杆菌、白喉棒状杆菌、炭疽芽胞杆 菌、白假丝酵母菌、毛霉、曲霉;,2.革兰阴性 脑膜炎奈瑟菌、黄色球菌、大肠 埃希菌、克雷白杆菌、铜绿假单胞 菌、
8、流感嗜血杆菌、百日咳杆菌、 军团菌、支原体,3.病毒 腺病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、巨细胞病毒、纯疱疹病毒、麻疹病毒等,(二)细菌学检验程序 一般要求下呼吸道感染培养的细菌 浓度应107CFUml，可视为病原 菌，104CFUml视为污染菌。介于 两者之间时，要连续分离培养两次 以上。,痰培养标本的前处理：用无菌盐水 将洗涤3次，洗去痰中的常居菌， 然后加入等量的(pH76)1胰酶 溶液，放置3790min即可使痰液 均质化。,支气管分泌物等要离心沉淀，以生理 盐水适当稀释后,直接涂片染色镜检: 1)正染色法：适用于多种标本及培养 物，将标本固定于洁净玻片上直接 染色。常用革兰
9、染色，苏本索一伊 红染色(HE)，乳酸酚棉蓝染色，过 碘酸锡夫染色(PAS)，嗜银染色(GMS) 等;,2)负染色法：用真菌不着色而使背 景着色,检查新型隐球菌，如用 墨汁负染色镜检找隐球菌。,(三)临床意义,1.下呼吸道感染指肺实质性炎症的肺 炎和支气管粘膜炎症的支气管炎， 是病死率高的疾病。近几年来呈上 升趋势。,2.细菌学检查对诊断有重要意义， 采集痰要来自于下呼吸道合格 的标本，提高检出率和阳性的 正确率。,3.细菌性肺炎为最常见的类型，肺 炎链球菌所致仍为常见，由流感 嗜血杆菌，金黄色葡萄球菌、MRSA 和G-杆菌所致肺炎比例明显上升， 军团菌肺炎引起了重视。在医院感 染中，条件致病
10、菌和耐药菌的G-杆 菌占50以上，成为医院内肺炎的 主要致病菌。,4.支原体肺炎常以不典型肺炎表现， 近年发生率上升, 约80的慢性 气管炎病人合并有支原体感染。约 占肺炎的10-20 。,5.真菌性肺炎是致病性真菌和条件致 病性真菌所引起。目前以条件致病 性真菌感染致病为主，并呈上升趋 势，以白假丝酵母菌为主，毛霉、 曲霉和隐球菌也常见。常合并多种 细菌感染。,第六节 消化道感染,()常见的病原体 1.肠毒素为主的病原菌 霍乱弧菌、志贺菌(福氏、宋内)、 大肠埃希菌(ETEC、EHEC、EAggEC)、 金黄色葡萄球菌、难梭菌、产气荚 膜梭菌。,2.侵袭性为主的病原菌 沙门菌、大肠埃希菌(E
11、PEC、EIEC )、 志贺菌(鲍氏、志贺)、弯曲菌、副溶 血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、结核 分枝杆菌、白假丝酵母菌。,3.病毒 轮状病毒、埃可病毒、Norwolk 病毒、甲型肝炎病毒、戊型肝炎病 毒、腺病毒。,病原学检验程序,采集脓血或糊状新鲜粪便，应在急性 期，使用抗生素前进行肠道细菌多为 G-杆菌，形态区分困难，不做涂片镜 检。检验程序见第一节血液感染。,1.临床意义,1感染性腹泻 最为常见，为胃肠炎 的症状，由多种病原体感染所致。 2细菌性痢疾是指由志贺菌属(福氏和 宋内氏)引起的肠道传染病。常有里 急后重和脓血样便，中毒性痢疾见于 小儿。发病率呈下降趋势。粪培养对 诊断有价值。,3细
12、菌性食物中毒常见于沙门菌、副 溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、葡 萄球菌、肉毒棱菌、腊样芽胞杆菌 食物中毒。多发生在夏秋季，以暴 发和集体发病为特征。,4致病性大肠埃希菌的肠道感染分 为5类。即ETEC可致霍乱样肠毒素 水泻，常见于儿童和旅行者腹泻； EPEC可引起婴幼儿腹泻；EIEC可 引起志贺菌样粘液脓血便；EHEC 的0157：H7血清型可引起出血性 肠炎和溶血性尿毒综合征；EAggEC 是新近报道可引起慢性腹泻的大肠 埃希菌。,5消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要 部位是胃及十二指肠球部。大量 研究及临床证明胃炎、消化性溃 疡主要是HP所引起，HP可能还参 与了胃癌的形成。从此消化性溃 疡经抗感
13、染的治疗而成为一个新 的概念，并取得好的疗效。,6近年来胃肠炎的病毒感染呈上升的 趋势 (1)轮状病毒常引起幼儿腹泻； (2)腺病毒是引起儿童腹泻的主要病原， 还可引起成人腹泻； (3)Norwolk病毒常感染成人和大龄儿 童，引起水样便或黄稀便的腹泻； (4)埃可病毒常引起婴幼儿腹泻。,第七节 尿路感染,(一)常见病原菌 80为G-杆菌，大肠埃希菌占70以上， 其次为变形杆菌、铜绿假单胞菌、克雷伯 杆菌、肠杆菌、沙雷菌、产气杆菌、沙门 菌等；20为G+菌，其中以肠球菌为多见， 次为葡萄球菌、粪链球菌、结核分枝杆菌， 少数为厌氧菌等； 支原体、衣原体、真菌感染呈上升趋势； 急性感染多见于大肠埃
14、希菌，慢性感染多 见于变形杆菌和铜绿假单胞菌。,(二)病原学检验程序,(1)要严格无菌操作,收集晨起第一次清洁 中段尿标本，其结果才可靠。 (2)标本直接显微镜检查 可用1滴尿涂片 作染色镜检是有意义的方法。如平均 每个视野1个细菌(表示细菌定量培 养 105ml)率达90以上。 (3)尿细菌定量培养诊断标准是以细菌数 105ml为真性细菌尿 ,104-105ml为 可疑阳性，需再复查。,(三)临床意义,1.尿路感染主要经尿道口上行感染所致，极少数为血行感染，即从体内感染灶侵入血流到达肾引起肾盂肾炎。尿液细菌学检验可反映肾、膀胱、尿道、前列腺等处的炎症变化。临床表现主要有尿频、尿急、尿 痛、排
15、尿困难和腰痛等。 2尿路感染常见肾盂肾炎(急性和慢性)、膀胱炎(急性为主)、尿道炎(细菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎)、前列腺炎(常见慢性)等。 3尿路感染需要明确部位和急性 与慢性，主要依病原菌检测，还要紧密结合临床综合考虑作出诊断，药物敏感试验对指导临床合理使用有效抗生素有重要意义。,第八节 性传播疾病,性传播疾病(STD)是指以性行为为主要传播途径的一组传染病。 STD有二十几种，1991年8月我国确认8种STD为重要防治的病种，如梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、艾滋病、尖锐湿疣、生殖器疱疹8种。 STD在概念与病种范围上不同于传统的性病，性病是指以性交为主
16、要传播途径的传染病。性病只包括梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿和腹股沟肉芽肿5种。,一、梅毒螺旋体感染的检查,(一)标本采集 取下疳分泌物或二期皮疹或 病灶渗出物或局部淋巴结等穿刺物为标本。 (二)微生物检验 1直接显微镜检查 用暗视野显微镜直接 镜检。有动力的梅毒螺旋体。镀银染色 用光学显微镜直接检查螺旋体。用直接 荧光检测法(IFA)检查见亮绿色荧光的梅毒 螺旋体,有诊断价值，主要适用于一、二期 梅毒。,2梅毒血清学试验 非螺旋体抗原 试验主要测定反应素，如VDRI、USR、 RPR试验为筛查试验；密螺旋体抗 原试验：主要测定特异性抗体，如 TPHA、FTAABS、FTA-ABSDS、MHA- TP试验等，特异性高为证实试验。,3PCR 快速敏感特异，可检测梅毒 螺旋体DNA片段，对分析疑难病例 有帮助。 4暗视野镜检和血清学试验为目前 实验室检查的金标准。,(三)临床意义,1梅毒分期：一期梅毒为硬下疳， 病灶中有大量螺旋体，适用涂片 直接镜检；二期梅毒是梅
