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1、后发酶“京威“芫砖茶中主要茶多酚的变化及儿茶素四种新B环分裂代谢物的形成机理M14506王恒鹏文献来源:Zhu,YR,Chen,J.J二X.Metal(2015).ChangesofmmjorteaFhe国ctionoffournewB-ringfissionmetabolitesofcatechinsfrompostfermentedoodChenisto170.110-117茯砖茶荫砖荪,属黑莪,称发醇茶始祖。约在公元1368年(洪武元年即朱元璋“明太祖“建立明朝初问世,采用陕南,四川等茶为原料,手工筑制,因原料送到咸阳泾阳筑制,称“泾阳砚“;因在伏天加工,故称“伏茶“,又因其药效似士茯苓
2、,就由“伏莪“美称为“茯茶或“福砖“。荫砖荪压制要经过原根处理、区堆、压制定型、发花干燥、成品包装等工序。而友花是茯砖茶特有的T艺，伍这个过程兰中形成了茯砖特有的“金花“,这也是保证茯砖茶品质的关键工艺。研究表明:苍砖茶“金花“的多种提取成分对PPARy、PPAR5均有激活作用,“金花“内两种新的活性物质茯茶素A和茯茶素B,具有显著降低人体类脂肪化合物、血脂、血压、血精、胆固醇等功效。长期饮用茯茶,能够促进调节新陈代谢,增强人体体质、延缓衰老,对人体起着有效的荪理保健和病理预防作用。埕春洵茶多酚(TeaPolyphenol1s)茶多酚的成分为茶多酸总量的60%80%、儿茶素类(黄烷醇类)约占茶
3、叶干重的12%一24%黄酮醇及其苷类约占茶叶茶叶本身|花黄素类(黄酮及黄酮醇类)重量的35-4%的成分花色素类(花白素和花青素)配酸及缩酣酸类(加没鱼水酸制茶过程中|茶黄素类茶多酣的氧北产物茶红素类茶多酣(TeaPolyphenols),又名抗氧灵、维多酚、防哈灵,是茶叶中所含的一类多羟基类化合物,简称TP。儿茶素类化合物为茶多酣的主体成分,占茶多酚总量的60%“80%。儿莪素(EC)没食子儿荪紫(EGC)儿茶素类儿荪素没食子酸酬(CECG)没食子儿荪素没食子酸酯(EGCG)摘要高效液相色谱分析“京威“茯砖茶的四个主要发醉过程表明没食子儿茶素没食子酸脂(CEGCG和儿茶素没食子酸酯(CECG)
4、持续下降到只占终产物的1/3左右。对终产物的植物化学物进行研究发现儿茶素类有四个新B环裂解代谢物(BRFCs),即荫砖素C-F(1-4)以及三个已知BRFCs(5-7),六个己知儿茶素(8-13),五个简单酚类(14-18),七个黄酮和黄酮苷(19-25),两个生物碱(26,27),三个三荀类化合物(28-30),一个类固醇(31)。这五化台物的结构由一雌、二维技磁共报,高分辨质谐,红外光谱以及CD光谱等鉴定。茶叶中有五个化合物(16-18,28,29是首次报道,并同时提供主要茶多酚降解及BRFCs代产生的可能途径。1研究背景随着发醉程度的增加,茶可具体分为四大类:未发酶(如绿茶、半发酷(如丿
5、龙茶、完全发醉的(如红茶、和后发醇(黑茶,如荫砖茶,FBT。砖黑茶是以砖的形式用老的、粗的叶子及茶树、冬虫夏草等小树枝压缩而成的一种独特的后发醉茶。据报道,砖黑茶还有抗肥胖、抗菌、抗氧化、抑制脂肪沉积等特殊健康益处。根据材料和制造工艺,砖茶产品可分为以下几种类型:黑砖茶、茶砖茶CFBT、青砖茶和普洱砻茶。据报道,在部分发醇的乌龙茶,全发酵的红茶以及后期发醉的黑茶中主要茶多酚变化明显,尤其是没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG。绿茶中的儿茶素含量比其他种类的茶高,因为新鲜采捌药名中的多防气化酶和天然微生物在燃焦或萼制后会立即失活。而黑茶在发眼过程中,茶叶中的主要儿茶紧类被多酚氯化酶催化的成茶黄素,大
6、大凑少了儿茶素的含量。芫砖茶CFBT在“发花“过程中,会有大量的微生物繁殖,并释放胞外酶,由于酶的氟化作用,使得茶叶中的儿茶素,特别是没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG及没食子儿茶素(CECG的水平大大下降。据报道,在侦砺茶(FBT)生产过程中能够况少粗淼显和酒精味的产生,能提高其质量和口味的主要反应是氧化聚合。一些B环裂解代谢物的和其他聚合产品的明显区别,也可能有助于形成FBT的独特风味和品质。1研究背景蚀有关芳砖茶的化学物分析及化合物提纯已经有了大量研究,但是到目前,我们还没有意识到可用高效液相色谱法分析荫砖茶在生产过程中主要茶多酚的变化。另外,还没有形成对“京威“茯砖茶化学提纯的系统研究。
7、因此,本文我们主要探究“京威“芫砖茶的化学组成。通过高效液相色谱,已经分离有31种化合物。通过红外光谱、核磁共振氢谱、高分辨质谱及CD兆谭确定4个新B环根取代谢物与27种已知化合物。高效液相色谱分析不同发酵程度中主要儿茶素水平变化情况,并提供了B环裂变代谢物的可能代谢途径。2材料与方法2.1主要仪器ThermoNicolet8700红外光谱仪;氡谱、碳谱;Agilent6210高效液相色谱仪;J-815分光偏振计,进行圆二色性(CD光谱检测。2.2材料与试剂没食子酸(GA、儿茶素CEC)、儿茶素没食子酸酯(CECG、没食子儿茶素没食子酸脂(EGCG标准品,购于成都超纯科技有限公司,纯度高于98
8、%8;“京威“茴砖茶,购于苍山茶叶公司(中国哈阳,制作过程中的样品仍由该公司提供,真菌生长阶段(称为发花期是制作茯砖茶的关键步骤,其间的化学成分发生很大的变化)-高效液相色谱也主要分析这一期间主要儿茶素的变化。2.3高效液相色谱分析参数确定分析使用XPODS-AC18色谱柱(内径250mmx4.6mm,5um,宁波H&E有限公司);柱温:30“C;洗脱液,流动相A(0.17%乙酸水溶液,流动相B(乙腈;流动相B的梯度设置:0-4min,6%;4-16min,6%-1496;16-22min,494-15%6;22-32min,15%-185%;32-37min18?6-29?6;37-45mi
9、n,29%4-45%6;45-50min,45?6;50-51min,459-69;保持浓度6%6洗脱10min;溶剂流速:1.0mLmin;注射量,5uL;检测波长,280nm。2材料与方法2.4“京威“茯砖茶植物化学物质的分离称取“京威“苄砖莪15g“研磨*石油醚、乙酸乙酯、甲醇(3X20L)室湘平萃取三次“萃取渭健压浓缩三种馋分,A(石油醚馋分165g9)、B(乙酸乙酯馋分200g、C甲醇馈分2qgy馈分C二氯甲烷、正于醇分别萃取一一准压浓缩D(正丁醇馈分450g9。馈分A用硅胶柱分离,用石油酯混合物洗脱,用乙酸乙酬增加极性(1:0一0:1),得到13种馈分(A1-A13)。馈分B用聚酰
10、胺色谱柱分离,用二氯甲烷混合物洗脱,用乙酸乙酯、甲醇增加极性(2:1:0-0:1:25-,得到8秋偷分(B1-B8)馋分D用二氯化硅凝胶柱分离;用二氯甲烷、申醇:水6:1:0.1)洗脱,得到4种馋分(D1-D4)。高效液相色谱使用XPODS-AC18色谱柱(内径250mmx4.6mm,5um分离化合物3和4。柱温:30C。洗脱液:流动相A(甲醇,流动相B(水;流动相A的梯度设置:0-15min,5096;15-17min,5096-10096;17-20min,496-15?6;20-22min,100%-50%8,保持浓度50%洗脱10min;溶剂流速:1.0mLmin;注射量20uL;检测波长,280nm和210nm。囤胡淑烈忻烈滞淋斐辟口PungatEEE巳明8幼s+命纳GLZ英35esQkec万技日月目育月相见林朐c|-mmasm二e沥E一Tl擅辜羹嘈五TE
