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1、蛇白质组学研究技术12生物制药第一组一、虾白质组学研究背景人类基因组计划结束给科学工作者极大鼓彗,同时也引出了更多的间题:大量涌现出的新基因,它们有什么功能?编码什么虾白?在生命过程中发挥什么样的作用?这些问题靠传统的研究方法不可能解决。虾白质组(proteome)和蛋白质组学(proteomics)的概念就是在这个基础上提出的。二、蛋自质组学定义及内容2.1蛋自质组学定义2.1.1重自质组1994年,MarcWilkim在Siena双向凝胶电泳(two一dimen.sionalelectrophoresis,2-DB)会议上最早提出了蛋白质组(proteome)概念一-是由一个基因组或一个细
2、胞,组织表达的所有protein。2.1.2蛋自质组学CP獒真腾獠学是蛇白质和基因组研究在形式和内容两方面的完美组合,该技术致力于研究某一物种,个体,器菖芹琶霾或细胞在特定条件，特定时间所表达的全部虾质图谱。2.2蛋白质组学研究内容2.2.1重自质鉴定:分子量及等电点分析westernblot或者免疫共沉淮等技术初步鉴定蛋白质种类质谱技术分析蛋自质的氮基酸序列在数据库中对比确定蛋白质的家族归属2.2.2蛋白质的修饰:真核生物虾白质翻译后会进行修饰:乙酰化碳酸化糖基化这些修饰是调节蛋白质功能的重要方式2.2.3虾自质功能确定:研究蛋自质的功能,虾白质相互作用酵母杂交技术噬菌体展示技术RNA干扰技
3、术三、虾白质组学研究技术占“双向电泳技术(一D6)十“英光差异显示双向留泳技术(20D_DTGB)卞“蛋自质质谱分析技术(ESIMS)3.1双向电泳技术(2一1晶皂年,意大利生化学家05Farrel1奥法雷尔)发明了双向电泳(2-DB)技术。该技术应用两个不同分离原理为依据进行分离,即利用蛋自质分子的等电点(PD)和相对分子量的不同进行分离第一向电泳是蛋白质的等电聚焦,根据蛋白质等电点差异进行分离,该分离技术采用固定pH挺度技术(IPG)史以实现等电点友差0。01pH单位的蛋白质的分离;第二向电泳是利用虾白质相对分子量差异进行分离,可分离相对分子量在100X103一150X103的蛋自质。HB-10pH5-10图1用不同裂解波裂解后的CK-2双向电泳图左图裂解波中的去垢剂用的是CHAPS,右图裂解波中的去垢剂是NP-40。PHB-10PH3-I0图2对照样品CK以及和平号搭载样品MIR的双向电泳结果图
