《小鼠骨髓间充质干细胞原代培养》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小鼠骨髓间充质干细胞原代培养（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、一、立题依据1、小鼠骨髓间充质干细胞原代培养的意义e有利于进行骨髓间充质干细胞的生物学特性的研究为下一步的传代培养创造条件e可以直接应用于临床实践,是研究骨髓间充质干细胞作用的前提2、骨髓间充质干细胞原代培养的方法贴壁培养筛选法密度梯度离心法3、骨髓间充质干细胞的应用前景在适当的条件下,骨髓间充质十细胞可以分化为三个胚层来源的组织细胞而进行细胞移植的治疗,在体外培养扩增后也可种植于生物材料上,回恒入机体修复组织损伤。骨髓间充质干细胞在治疗组织器官退行性疾病、遗传缺陷性疾病和基因治疗方面也展现了美好前景。二、材料和方法1、材料e成年小白鼠4只胎牛血清(杭州四季清公司)L-DMEM(Hyclone
2、赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司)e胰蛋白酶(5igma公司)ePBS(NaclI8g,KC10.2g.NaHpD4012H202.88g,KH2P040.2g,三蒸水1000m)Percoll细胞分离液(Percoll原液:三蒸水:NaCI2.6:1.9:0.5)e青震素、链零素(100U/ml青霆素,100hg/ml链霄素)8%NaHCO3溶液(8gNaHCO3,100ml超纯水)2、仪器、倒置显微镜尼康TE2000E(上海于欣仪器有限公司)CO2恒温培养箱MC0-15A(日本三洋电机桃氏会公司)超净工作台SW-CJ-2F(苏州安泰空气技术公司)。生物显微镜(移守公司)低温高速离心机(Jouan公司)无菌操作台,血球计数板,6孔培养板等巳ap骨髓的收集一Percoll1密度梯度离心法分离纵化骨髓间充质干细胞一一贴壁培养骨髓间充质干细胞一形态学观察一原代培养细胞生长曲线的测定(一)骨髓间充质干细胞的形态学观察24h后就见有细胞贴壁,多数细72h九y量换液胞呈圆形(图1A)细胞,|第1次换波后5-7d可见由几十个到数百个细胞组成的集落,细胞形梭态呈形、三角形或星形(图1C、D)
