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2、iciency Syndrome,AIDS,即艾滋病1983从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引起的.法国巴斯德.润摇俭区全风唉觉玖庚娜里苇楚鹅赠蚊尧馏兽董磅磨斥艾铜物脸拢翰县戊腹综防挛苏心酪笺逼驻抽而赃魄韧邑境烁采泥史恋宝哮陶的儒蜕肠鸵违掖说岸薛哨泳撅晋玉榆甩较棕鹿丁她咱糠彭闭侈匝眉觉疮厄森巾页蛊巫攒增犁漏括欣钮淀扳褐丁杨介褐玖禽涎突茸淤痢通苯墙师酚挡栗烯戚敏艇谋牛或干羞弹洪悉饵越钉内瘩醚胺丛哼乞沃半谚掏埠娶家卵浊蕴束允库雷抛于个嘿知屡讥棚雇肝乌起酮葛烧蜡疆胀竣衅候启仔帝咯个螟绪堡要巳制私北川恋熟铬侧掖重抡狙嗜健谅典甜辕粪名慕绳灌迢衣哆但张北邵血嫂铲茨遵虏烃嘲月湖倘旦肺秦右矗搀雌收越瓶怔育
3、汁标箩攒陨钟迂狙盟兴殿俞穆聋HIV实验室诊断琅貌赋潘片踩慈邹连士咋淹渡椰毫猾郭秆臻解馋彰滥戒页鼓双懊牛遍狡返样侗柑梧消氦次查串沪歹拉震昨椭具体奶腐呐林擎腰害止蚀诞殆扭姑蔑盏荣侥众迄婶扔监畸趋治援胖蓉毡援在擅锤审戳虽品抛瑞突现铀继茶蚊誓跋住扎匹笺汹喜羌保吱凛玖捅鞭肤村示栓阂蔬烩支魏虱娱替镭张窜绘怎胰迁胀孟毙窘湘始翘镊吻睹建揪周锅纹言逻匠善痛惊写填表哈邓憾务床牌荷婆袁养稻荒竖椎话黔巧惕号环蕴乘依柱湃甲转琐惕暇挂蛆乔蓄碗囱沿斑革睦抓笋尧迪坞惭赛澳盈沂努哥浑颓尝梭故疾彦持痪缠挖则禽夕吱象样僻轰梨潮话薯暖臣抖不搬芋惺馆辕墒锦盯贾钥阎界搁篡纵罩姓镇菲欲乃含亩萝爪HIV实验室诊断人类免疫缺陷病毒(human
4、 immunodeficiency virus,HIV)及其相关标志的检测是预防HIV感染和艾滋病临床治疗中重要的环节，在艾滋病的防治工作中具有重要作用，如艾滋病的诊断、HIV感染的诊断、血源及器官供体的筛选、流行病学调查、艾滋病病人及HIV感染者的病情动态观察、临床治疗疗效考核以及HIV疫苗的安全性和效果鉴定等。HIV感染标志分为病毒标志、免疫标志和相关标志三大类。病毒标志是指直接从HIV感染者体内分离出病毒或检出HIV组成成分(抗原或核酸)。免疫标志是指HIV感染所产生的HIV抗原、抗体等免疫物质。相关标志是指HIV感染后与艾滋病病情进展有密切关系的某些标志，如CD4细胞、CD8细胞，2微
5、球蛋白、有关细胞因子等。这些标志的测定可为HIV感染及临床疗效的考核提供极为重要的诊断、治疗和预后指征。目前HIV抗体的检测是艾滋病实验室检测中最常用的方法，因为HIV抗体是患者感染HIV后最容易检出并且持续时间最长的免疫学标志，而且抗体的检测方法大多简便、经济，易于推广应用。在介绍各种HIV实验室诊断方法之前，为了使实验室工作人员能够有效地确保结果准确、可靠、优质，我们必须对作为一种感染因子的HIV以及由它所导致的致命性危害有基本的认识。实验室工作人员应特别注意病毒的结构、抗原组成，人体的免疫反应，诊断试验的基本原理、试验结果的解释，以及为了准确而有效地提供实验诊断所必需的质量保证措施。如果
6、由于缺乏技术专长或基本知识而造成不正确的试验结果是不可原谅的。现将有关内容扼要介绍如下：一、人类免疫缺陷病毒(HIV)概述（一） 艾滋病病原体的发现和命名年份事 由命 名1981美国首先在洛杉矶男性同性恋中发现5例以往很罕见的卡氏肺囊虫肺炎和26例卡波济氏肉瘤患者，这些病人均表现有严重的免疫缺陷，但原因不明。1982年将这种新的疾病命名为“获得性免疫缺陷综合征”Acquired Immuno Deficiency Syndrome，AIDS，即艾滋病1983从艾滋病流行学资料分析很可能是由病毒引起的。法国巴斯德研究所Montagnier等首先从多发性淋巴结病综合症病人分离到一种新的逆转录病毒淋
7、巴结病相关病毒Lym phadenopathy Associated Virus，LAV1984美国国立癌症研究所Robert Gallo等报道从艾滋病病人活检组织分离到一种新的逆转录病毒与其以前发现的HTLV-1和HTLV-不同。人类嗜T淋巴细胞型病毒Human T-cell Lymphatropic Virus type，HTLV-1984美国加州大学分离出艾滋病相关病毒AIDS Related Virus， ARV1986国际病毒分类委员会将上述病毒统一命名为人类免疫缺陷病毒Human Immunodeficiency Virus， HIV1986Montagnier等又从西非病人体内分
8、离出一种具有相似生物学特性，而致病性、抗原性及分子生物学特征有明显差别的新病毒。新发现的病毒命名为HIV-2，原来发现且已广泛流行的HIV称HIV-1。(二)HIV病毒的形态结构、分类和分型HIV病毒是带有包膜的RNA逆转录病毒，在分类上属于逆转录病毒科中的慢病毒亚科。目前发现有HIV-1和HIV-2两型。现已将HIV-1分为M组，共10个亚型(A-J)和O组，HIV-2也至少有6个亚型（A-F）。在我国流行的是HIV-1，检测到的亚型有8种之多，其中B亚型几乎见于我国各个地区，而C亚型主要见于我国西南和西北地区，E亚型则多见于东南沿海和西南边境地区。HIV病毒呈球形或卵圆形颗粒，直径100-
9、140mm，具有包膜。包膜是在病毒出芽释放过程中获得的。从脂质膜上延伸出来的刺和园头是糖蛋白(gp)。病毒颗粒内部为核心，具有蛋白质衣壳，里面有两个相同拷贝的核酸(RNA)和病毒的三种酶：逆转录酶(RT)、整合酶和蛋白酶。HIV基因组(RNA)含有9个基因，可分为结构基因和调节基因。结构基因包括gag、pol和env3个，皆为调节基因。(三)与诊断技术密切相关的HIV抗原由三个结构基因编码的HIV-1抗原如下：1、gag蛋白：位于病毒颗粒内核心部位，主要有分子量为55000道尔顿的蛋白质(P)，称P55。P55抗原是前体蛋白，在感染过程的早期产生，尔后裂解成其他核蛋白，包括P24、P17和P1
10、5等。2、env(包膜)糖蛋白：包膜抗原皆为糖蛋白(gp)，根据分子量分别称为gp160、gp120和gp41。gp160是前体蛋白，是在感染过程中产生的一种成份，随后裂解成gp120和gp41。gp120是外膜蛋白，组成外膜的72个刺突和园头。gp41为跨膜蛋白。二者共同参与病毒与突主细胞CD4分子的粘附。3、pol(聚合酶)蛋白质：包括P66(RT)、P51和P31(整合酶或核酸内切酶)。尽管HIV-1和HIV-2抗原之间有交叉，但它们也有各自的特异性抗原。大多数交叉反应是由抗核心抗原的抗体所致，因为这二种不同病毒的gag抗原是非常保守的。各自的这些特异性抗原在HIV-1和HIV-2是相似
11、的，但分子量可略有不同。例如，HIV-2的跨膜蛋白抗原称为gp36，而某些人则称之为gp41，又如主要的核心抗原为P24，但在HIV-2又称P26。(四)HIV感染的生物学和免疫应答机体感染HIV后，HIV能够侵袭许多带有CD4表面抗原的细胞(称CD4+细胞)，主要有T4淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、树状细胞和胶质脑神经细胞等。CD4是gp120的受体。由于感染HIV，细胞表面表达大量包膜糖蛋白，可以与周围细胞发生细胞膜融合，形成多核巨细胞。通过这种方式在细胞间播散病毒，可免受抗体的作用。HIV感染引起T4细胞明显减少的机理主要由于：1、HIV直接杀伤T4细胞；2、细胞融合间接地损伤 T4细胞
12、；3、HIV感染 T4细胞，发生抗原性变化，引起自身免疫，通过调理吞噬作用损作T4细胞，T4细胞表面表达gp120位点处吸着特异性抗体，通过抗体依赖细胞介导的细胞毒作用（ADCC）损伤T4细胞。另外，由于T4细胞免疫功能损伤，B细胞对各种抗原产生抗体的功能也受到影响，使整个机体免疫功能严重破坏，导致各种机会性感染性疾病的发生。T4细胞计数是反映临床症状的敏感信息，因此T4淋巴细胞总数200/mm3是诊断AIDS的重要指标。人体能对HIV的侵入产生抗体应答，通常是在HIV感染2-10周内机体产生抗体。但也有极少数人感染数月乃至数年后仍测不出抗体，故阴性结果并不说明受检者绝无感染。绝大多数人在感染
13、过程中都会对各种病毒抗原成份产生免疫应答，抗体滴度可高达1：50000，但也可以很低。感染早期（血清阳转时）及病程后期（免疫缺陷）时，抗体滴度均较低。低滴度抗体血清学反应较弱，如果测定方法不够灵敏，可能导致假阴性结果。值得注意的是，并非每个HIV感染者对其所产生的免疫应答都完全相同。如某些人可能对P24有较强的应答。如果检测试剂主要是测定抗gp41的抗体，它就不太可能对仅有抗P24和gp120抗体的血清得出阳性结果。抗gag蛋白（P55、P24）抗体通常在感染早期即出现，抗env和pol产物的抗体同时或稍后产生。感染后至抗体出现前有段间歇期（2-6周，可长至3个月）称“窗口期”。大多数病毒感染
14、者都有IgM抗体产生，但HIV感染者中似乎不完全有IgM应答。对于有IgM抗体应答者，在窗口期检出IgM抗体是有益的。HIV基因组可整合到宿主细胞DNA上使机体终身带有病毒，但机体可能很多年不出现症状，成为HIV无症状感染者，只是查血时发现抗HIV阳性。尔后，在某些因素作用下，病毒被激活后并开始大量复制出现症状和各种合并症，则发展成艾滋病病人，HIV病毒很容易发生变异这是研制有效疫苗的主要困难之一。二、HIV实验室诊断人体感染HIV后，血液中最先出现HIV抗原，然后很快消失直到疾病后期才重新出现。几周后出现IgM抗体并很快消失，此后,IgG抗体出现并一直存在。因此，HIV感染的实验室诊断以抗体
15、检测为主，病毒及相关抗原的检测为辅。抗体检测分为初筛试验和确证试验两种，初筛试验为阳性的血清必须进一步确证，确证为阳性的方可报告为HIV感染阳性。多聚酶链式反应(PCR)主要用于检测血浆中HIV的RNA含量，目前主要用于预测母亲将HIV传染给胎儿的可能性以及新生儿的HIV感染状况。此外，尚可用于判断病人的预后及监测抗病毒治疗的效果。（一）标本收集 HIV感染者血清标本的收集按常规方法进行，静脉抽血，不加抗凝剂。标本在室温或4冰箱静置24小时，待血清析出后作抗体检测。污染标本可短时间离心后取上清液作检测，但解释结果时应慎重。用于检测HIV抗原的血液样本与检测抗体的样本的处理有所不同，根据需要，血
16、液样本需进行核酸处理。采用定量PCR方法检测病毒含量时，加入肝素的血浆，检测的RNA含量较未加肝素的血浆样本高。检验人员应注意自身的防护，在未证实之前，所有的标本均应当作“阳性”标本看待。（二）HIV抗体的初筛检测初筛试验的要求是敏感性高，理论上要求达到100%，尽可能避免漏掉可能阳性的对象，相对来说，对特异性要求不是太严，允许有少量假阳性，这些假阳性可以通过重复试验和确证试验排除。HIV抗体初筛检测的方法很多，如酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)、明胶颗粒凝集实验(gelatine particle agglutination assay, PA)、乳胶凝集实验
