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1、热原反应专题,小绪 2014.03,热原反应专题,家兔热原实验专题,什么是发热反应？发热的程度划分？,正常情况下，体温受体温调节中枢调控，并通过神经、体液等因素使产 热和散热过程动态平衡，保持体温在相对恒定的范围内；当机体在致热 源（pyrogen）作用下或各种原因引起体温调节中枢的功能障碍时，体 温升高超过正常范围，称为发热。 程度（口温计） 37.3-38为低热 38.1-39为中度发热 39.1-40为高热 40.1以上为超高热。 短程发热: 2周,人体正常体温平均在3637之间(腋窝)。 1.口测法:先用75%酒精消毒体温表,放在舌下,紧闭口唇,放置5分钟后拿出来读数,正常值为36.3
2、-37.2. 2.腋测法:此法不易发生交叉感染,是测量体温最常用的方法.擦干腋窝汗液,将体温表的水银端放于腑窝顶部,用上臂半体温表夹紧,嘱病人不能乱动,10分钟后读数,正常值为36-37. 3.肛测法:多用于昏迷病人或小儿.病人仰卧位,将肛表头部用油类润滑后,慢慢插入肛门,深达肛表的1/2为止,放置3分钟后读数,正常值为36.5-37.7. 正常人的体温在24小时内略有波动,一般情况下不超过1. 生理情况下,早晨略低,下午或运动和进食后稍高.老年人体温略低,妇女在经期前或妊娠时略高.,什么是发热反应？人体发热如何体现？ ？,发热机制,发热为何会寒战？,发热激活物,致热微生物及其产物 内毒素、外
3、毒素 致炎物 组织蛋白分解产物 抗原抗体复合物 类固醇,下丘脑 ,体温调定点上移,散热,产热,皮肤血管收缩,骨骼肌紧张、寒战,体温上升,发热发病学基本环节模式图,EP,单核细胞,LP,发热为何会寒战？,寒战 血管改缩,发热 血管扩张,寒战 血管收缩,发热 血管扩张,体温,调定点 恢复,体温 上升期,体温 高峰期,体温 下降期,发热时相中调定点与中心温度的关系,41 40 39 38 37,调定点 上移,什么是热原反应？,症状：含有热原的输液注入人体，大约半小时以后，就使人体发冷、寒战、体温升高、身 痛、出汗、恶心呕吐等不良反应，有时体温可升至40，严重者出现昏迷、虚脱，甚至有 生命危险。 热原
4、反应的温度变化曲线：因热原种类不同而有差异。一般先经过一个短的潜伏期后，温 度略微上升，然后又略微下降，接着又很快上升，并出现一个高峰. 作用于视丘下部体温调节中枢，可能引起5-羟色胺的升高而导致发热。 热原分类： 内毒素热原 革兰氏阴性细菌细胞壁的组分 非内毒素热原 除内毒素外的热原,热原,热原是微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质,热原由磷脂、脂多糖(LPS) 和蛋白质组成 性质 ： （1）耐热性：温度达150，经数小时不能杀灭热原 （2）滤过性：热原体积小，一般在15nm之间 （3）水溶性 （4）不挥发性 （5）能被强酸、强碱、超声波破坏，强氧化剂如高锰酸钾或过氧化氢所钝化,
5、热原：Pyrogen,内毒素：革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖。当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。 其毒性成分主要为类脂质A。内毒素位于细胞壁的最外层、覆盖于细胞壁的黏肽上。各种细菌的内毒素的毒性作用较弱，大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。 发热：人体对细菌内毒素极为敏感。极微量（1-5纳克/公斤体重）内毒素就能引起体温上升，发热反应持续约4小时后逐渐消退。,热原引入途径,溶剂、原料、用具、容器中带入 灭菌不彻底或包装不严 临床应用过程中带入 药物因素：色素、鞣质、淀粉、蛋白质存在于药液中，药物与输液配伍后产生氧化，聚
6、合或由于pH改变而使生物碱、皂苷析出产生大量不溶性微粒,个体因素：人对热原敏感度不同，相同内毒素含量对不同人群会产生不同反应。内毒素在人 体内有反应阈值，不是有内毒素就一定出现热原反应，只有当内毒素超过反应阈值时，才发 生热原反应。因此临床上体质弱和敏感患者更易发生热原反应。另外，由于输液剂量过大或 输液速度过快，造成体内热原累加超过限量。而人体对热原也有一定的承受程度，当累积输 入血中热原到达一定限度，就会发生热原反应。,热原检查法,体内热原检查法兔温法（PT)：是一种体内的、全热原的检查方法。 体外热原检查法（ITP)：细菌内毒素检查法。利用一种低温海洋动物鲎的血细胞（变形细胞）溶解物（又
7、称鲎试剂）与革兰阴性菌产生的细菌内毒素发生凝胶反应。 医药工业普遍接受控制内毒素等于控制热原,家兔法：家兔法检测内毒素的灵敏度为0.001g/ml，试验结果接近人体真实情况。 优点： 可在规定时间里观察到家兔的体温变化，反应了热原质引起哺乳类动物复杂的体温反应过程 从试验原理的角度来看，家兔体内试验与人血试验在检测热原质方面完全一致，且不受热原质性质的限制 。 缺点： 标准化程度低:取决于试验动物的状况、试验室条件和操作的规范性。 有一定的动物个体因素差异，易受干扰 实验动物易受药物影响 价格昂贵,2,家兔法优缺点,2,家兔检查法基本要素,2,家兔检查法基本操作步骤,1、取合格兔，停食、停水，
8、称重并固定约1小时 2、每隔30分钟测温一次，连续2次温差 0.2，并算得2次均值为基础体温体温。 3、及时配制供试液并预热至3738 4、选兔并分组（初试3只/组、组内温差1.0 ；复试5只/组） 5、注射供试液（分组后15分钟内） 6、计时开始并记录6次体温，间隔0.5小时，以6次中最高温度减去该兔基础体温为升温值,流程,器具除热原 实验用具的除热原处理：试验用注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，洗涤，干燥， 250,1h以上。,2,家兔检查法基本操作步骤,1、选符合规定的家兔，称重后置于家兔固定盒内至少1h，头部固定应宽松适宜，应适用于体重不同的动物。 2、每隔30min测量家兔体
9、温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2，不作修约，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。平均值计算后修约保留三位有效数字，如38.90,39.0平均38.95，修约至39.0。如按（英国药典检查，可保留四位有效数字如38.95）。 3、当日使用的家兔，正常体温应在38.039.6范围内，且同组各兔间相差不得超过1。5.4每个供试样品用家兔3只，在测定正常体温后15min内给药。 4、供试品的配制：供试品制备完毕后应在30min内注射于家兔体内（个别品种因给药体积过大，可能超过30min）。 5、注射前先用75%乙醇棉球轻擦耳静脉的注射部位，从耳缘静脉耳尖端进针，如进针不利，应顺序向
10、前进行。 6、注射完毕，拔出针头时，按住针孔下端数秒钟，止血。 7、给药后每隔30分钟测量体温1次，共6次。 8、温差计算： 升温：注射药液后，6次测得体温中最高的一次减去正常体温，以为该兔体温的升温值，计算3只家兔体温升高总和。 降温：如6次体温均低于正常体温，则升温值以“0”计。6次体温中最低的一次，减去正常体温，即为降温值。 9、打印或出具结果报告,具体步骤,2,家兔检查法关注点,实验材料及设备 实验准备 实验动物 实验环境 供试液配制,新兔预选 家兔重复使用 检查法 结果判断（合格、复试、重做、不合格）,2,家兔检查法关注点-实验材料及设备,计量设备（天平、公斤称等） 电热干燥箱（可达
11、250以上） 恒温水浴（3738 ） 家兔固定盒 热原测温仪或肛温计（测温探头或肛温计） 其它用品（7#针头、 12#针头、注射器、直镊、配制容器、灭菌注射用水、氯化钠注射液、酒精棉球等）,2,家兔检查法关注点-实验动物,动物品系：日本大耳白、新西兰白、青紫蓝等。 要求：健康合格、1.73.0kg、同一来源和品系。 性别:雌雄均可，雌性应无孕。雌性动物，比较温顺，易于捉持，体重增长较缓慢。 动物的检疫、标记：一周的检疫期，动物编号和笼具编号,2,常用实验动物,2,常用实验动物,2,常用实验动物,2,家兔特刊,兔属于哺乳纲,啮齿目,兔科,草食性动物，性情温顺，群居性差; 喜干怕热，适宜的环境温度
12、因年龄而异，初生仔兔窝内温度30-32 ，成年兔202; 有食粪特性：软粪在晚上排出，含有较丰富的粗蛋白和维生素，家兔直接由肛门吞食软粪; 兔是反射性排卵的动物，生育年龄56年。平均寿命8年; 属恒温动物，正常体温在38.539.5之间，对致热物质反应敏感，适于用作热源实验; 耳大，血管清晰，便于注射和取血； 眼球大，虹膜内有色素细胞，眼睛的颜色是由该色素细胞决定；,2,家兔检查法关注点-实验环境,实验室温度： 17-25 实验室与饲养室温差： 3 实验温度变化： 3 实验室：保持安静，避免强光、噪音等刺激，注意实验兔之间相互影响。,2,家兔检查法关注点-供试品配制,1、固体样品注意称量、稀释
13、时的操作，避免热原和其它污染。 2、样品稀释时应注意准确性并尽量减少误差。 3、配制时应注意含量或效价(抗生素）的折算问题以及总量是否够试验之用。 4、稀释用的灭菌注射用水及氯化钠注射液宜经鲎试剂检查合格再用于稀释。,2,家兔检查法关注点-新兔预选,1、新兔饲养7日以上 2、预测体温（条件同热原检查）：测温8次、间隔30min。 3、中选条件：体温在38.039.6 ， 8次测温变化 0.4 （可供3周使用）,2,家兔检查法关注点-家兔重复使用,重复使用： 1、结果符合规定的实验兔，休息48hr 2、复试用兔升温0.6且供试品合格，休息48hr 3、使用次数未达10次的实验兔 4、复试用兔升温
14、0.6且供试品合格，按新兔测温合格 淘汰： 结果不符合规定的实验兔,2,家兔检查法关注点-注射体积和速度,通常给药剂量 10 ml/kg体重，并应在10分钟内完成注射。一般情况下，注射的速度和体积并不影响发热反应，大部分受试溶液可以在1-2 min内注射完成，但部分受试产品具有明显和迅速的药理作用，可影响或干扰发热反应，需要缓慢进行注射。,2,家兔检查法关注点-结果判断,复试： 1、初试3只家兔中仅有1只体温升高0.6或高于0.6； 2、3只家兔升温均低于0.6但升温的总数达1.3或高于1.3 ，应另取5只家兔复试。 注：3只家兔升温值为0，其中有1只降温值0.6，或3只家兔中有2只降温值在0
15、.5，为防止降温影响热原检查，可考虑在消除降温的影响因素后（如动物体温波动异常、室温变化、注射速度、测温异常等）另取3只家兔重试一次后，按中国药典规定判定结果。,2,家兔检查法关注点-结果判断,合格 1、初试3只家兔中，体温升高均低于0.6，并且3只家兔升温的总和低于1.3（生物制品为1.4）可判断为符合规定。 2、复试5只家兔中，体温升高0.6或高于0.6的家兔总数不超过1只，并且初复试合并，8只家兔的体温升高总和为3.5或低于3.5，可判断为符合规定。 判断不合格 1、初试3只家兔中，体温升高0.6或高于0.6的家兔数有2只或3只，可判断为不符合规定。 2、复试的5只家兔中，体温升高0.6或高于0.6的家兔有2只或多于2只，可判断为不符合规定。 3、初复试合并8只家兔的升温总数超过3.5，可判断为不符合规定。,2,向实验动物致敬！,
