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1、软肝颗粒主要药效学研究 李小芹 , 沈 鸿 , 霍海如 , 吴子伦 , 周爱香 , 贺蓉 , 郭淑英 , 回连强 , 邹德高 软肝颗粒是根据中医药理论及多年临床经验总结而成的复方制剂 , 由黄蔑 、 寄生 、 女贞 子等8味药组成 , 具有益气活血 软坚散结等功能 。 为更好牌提供 临床用药依据 , 现将主要 药效学试验结果报告如下 。 1 材料 1 . 1 受试药物软肝颗粒由北京华荣制药有限公司提供 , 为棕黄色(液体)膏状 , 19 液体 (膏状 )约为 2 . 39生药 , 批号 991025 。 1 . 2 动物Wi sta r 大鼠 , 体重 190一2 109 , 舍 , 昆明种小
2、 鼠 , 体重 15一209 , 早舍各半 , 均 由中 国医学科学院动物研究所提供 , (医动字0 1 一 3 0 0 8 ;医动字第 0 1 一 3 00 1号) ; a B L Bc / 纯系小 鼠 , 舍 , 11 一 1 4 9 , 购自北京中国医科院肿瘤医院动物房(京动许字 1999 0 D 1 5) 。 1 . 3 剂量设计软肝颗粒临床人 日用量为8 0 9 生药 , 人按6 0kg计算为 1 . 39 生药爪g体 重 , 试验用剂量按动物与人公斤体重折算 , 中剂量约相 当于人临床等效剂量 , 大鼠 19 剂量为 1 4 、 79生药瓜g 。 小 鼠i g剂量为2 8 、 1
3、4 、 79生药八g 体重 。 阳性对照药 : 朝阳丸 , 北京双桥制 药公司 , 批 号 : 991107 , 动物给药剂量按动物 与人公 斤体重折算 , 大鼠临床 等效剂量为 0 . 189k / g , 小鼠为 0 . 369k / g 。 1 . 4 试 剂丙氨酸氨基转换酶 (9 90726) 、 天门冬氨酸氨基转换 酶 (990726) , 总蛋白 (2 0 0022 9) 、 白蛋白(2000229 ) 测定试剂盒 , 均由北京北化精细化学品有限公司临床诊断试剂 分厂出品 。 弗氏完全佐剂 。 美国产品 , (030)43 1 一85 8 5 。 1 . 5 仪器 Uv 一75 4
4、 连续式分光光度计 , 上海第三分析仪器厂产品 。 2 方法和结果 2 . 1 对四氯化碳致大鼠肝硬化的影响川取 w i s t ar 大鼠 , 按体重随机分为 5 组 , 即正常对 照组 、 肝损伤模型组 、 朝阳丸组 、 软肝颗粒高剂量组和中剂量组 。 各组动物每日i g给药一次 (l ml1 /0 0 9 体重 , 正常对照组 馆同体积的蒸馏水) , 连续给药 7 周 。 同时 , 各组动物 ip3 0% C C玩植物油溶液0 . 2ml/10 09 体重 , 每周 2次 , 共 7周 , 正常对照组iP 生理盐水 。 实验结束 前 ,动物禁食 1 2h , 将动物摘眼球采血 , 以30
5、0 0转/分离心1 0mi n , 分离血清 , 测定A L T 、 AST 、 TP和A LB;之后 , 将动物处死 , 取肝组织作经脯氨酸测定胶原蛋 白含量 2 , 结果见表 1 、 2 。 另取肝组织作组织化学及组织病理学检查 , 结果见表 3 、 4 。 表 1 、 2结果表明 , 软肝颗粒可抑制多次注射 C C 从引起的大鼠血清转氨酶的升高 、 总蛋 白和白蛋白降低 , 减少肝胶原蛋白含量 。 病理检查结果表明 , 给药不同剂量组 : 肝细胞肿胀 、 纤维化 、 脂肪变等肝脏病变与模型对 照 组相比有所减轻 , 其中软肝颗粒中剂量组肝脏病变比其它给药剂量组有明显减轻 , 周边完 .
6、406 好的肝小叶糖原颗粒有增加趋势 。 表 1 软肝顺粒对四抓化碳致大鼠肝硬化的影响 (王士 : ) 剂量动物数 (g/ k g) (只) 肝功能 组别 A L T ( n o m l/ s )几 A ST (o m n l/ s )/L T P (g/L) AL B (g/L) 对照 模型 朝阳丸 0 . 1 8 软肝颖粒 1 4 . 0 软肝颗粒 7 . 0 221 . 92士85 . 44702 . 0 0士6 0 . 2468 . 7 0士5 . 40 782 . 24士31 2 . 80#1163 . 92士147 . 04# # 6 0 . 10士 4 . 3# # 40 . 6
7、0士1 . 9 0 3 6 . 00士 1 . 9 0# 435 . 12土240 . 48 . 93 6 . 00士240 . 24 骨 68 . 40士7 . 80 . 3 9 . 80士2 . 60二 377 . 36士240 . 88二9 3 6 . 08士253 . 84 . 67 . 50士8 . 40 每 38 . 90士3 . 40 1043 2 . 7 0士228 . 62 任 1036 . 24士294 . 8067 . 80士5 . 40 哥. 39 . 6 0士2 . 00二 注 :与对照组相 比 , # 尸 0 . 0 5 , # # 尸 0 . 01;与模型组相比
8、,乞 尸(0 . 05 , ” 尸 0 . 01(下同) 。 裹 2 软肝顺粒对慢性肝损伤大民 衰4软肝顺粒对大民肝摘原的影晌(王士 : ) 肝胶原蛋白增生的影 晌(王士 : ) 组别 动物数 组别 剂量 (gk / g) 动物数胶原蛋白含量 (只)(拌gm / g 干粉) 1029 . 2 6士6 . 02 840 . 54 士4 . 6 3# # 83 3 . 10士6 . 0 3 . 93 1 . 3 6士6 . 09 . 103 3 . 11士5 . 4 2 . 剂量 ( gk /g) 肝糖原含量 (分数 ) 正常对照组 模型组 朝阳丸 软肝颗粒 软肝顺粒 衰 3 软肝顺粒对 大吸肝
9、损伤程度的影晌(王士 : ) 组别 剂量 ( gk /g) 动物数肝损伤程度 抑制率 (%) 对照组 模型组 朝阳丸 软肝颖粒 软肝顺粒 14 . 0 0 2 . 75士0 . 7 1 1 . 8 8土0 . 64 . 1 . 78士0 . 71 份 1 . 8 9士0 . 7 8 . 31 . 8 2 36 . 3 6 3 1 . 31 注汗正染色10 x 2 0倍光镜连续观察三个视野 记分标准 : 0 分 : 肝组织正常结构 ,无病变 ; 1分 : 肝细胞局限性肿胀 , 纤维化 , 大部分肝小 叶再 生 ; 2分 : 肝细胞肿胀 , 纤维化较轻 , 肝细胞再生较 多 ; 3分 : 部分肝
10、细胞肿 胀 , 纤维 化 , 有炎 症细 胞浸润 , 肝 细胞 再生少 ; 4 分 : 肝细 胞呈弥漫性肿 胀 , 纤维化 , 脂变 , 间质有 炎症 细胞浸 润 。 对照组 一 1 0 4 . 00士0 模型组 一 80 . 7 5 士0 . 8 9 朝阳丸 0 . 1881 . 38士0 . 52 软肝颖粒 14 . 091 . 50士0 . 5 3 软肝颗粒 7 . 0101 . 11士0 . 61 注 : 肝搪原记分法 O分 : 未见糖原颗粒 ; 1分 : 可见糖原颗粒 ; 2分 : 肝细胞内糖原颗粒 散在 ; 3分 : 部分肝细胞 内有糖原颗粒 ; 4分 : 大部分肝细胞内有 明显糖
11、原颗粒 ;各 组记分经统计学处理 。 2 . 2 对小鼠迟发型超敏反应的 影响 (DT H) (足拓 增厚法) 3 取昆明种小 鼠 , 体重 1 8 一2 09 , 舍 , 随机分为 5组 , 即 正常对照组 、 朝阳丸组 、 软肝颗粒高 、 中 、 低三个剂量组 , 每组 1 0只 。 每日上午 19 给药一次(正常对照 组 i g同体积的蒸馏 水) , 连续给药s d后 , 小鼠 ivZ % (VV / ) 绵羊红细胞 (SR BC )0 . 2ml , 致敏 4d后 , 用游标卡尺 测 量左后足肠厚度 , 然后在 测量部 位皮下 注射 2 0% SB RC(2 0闰/ 407 鼠) ,
12、注射后 24h再次测量左后足踢厚度 。 以攻击前后足肠厚度差值(足肠肿胀度)来表示 D T H 的程度 。 表 5结果表明 , 软肝颗粒高剂量及 阳性 药朝阳丸对小鼠迟发型超敏反应有一定的增 强作用 。 2 . 3 对小 鼠脾脏抗体生成检测(分光光度 法) 4 取昆明种小鼠 , 体重1 8 一209 , 随机 分为6组 , 即正常对照组 、 模型组 、 朝阳丸组 、 软肝颗粒高 、 中 、 低三个剂量组 , 每组 1 0只 。 每日上午i g给药一次(正常对照组 i g同体积 的蒸馏水) , 每只鼠i v Z% (VV /)SR BC 0 . Zml 致敏 , s d后放血处死小 鼠 , 取出
13、脾脏 , 用磷酸 缓冲液制成 脾细胞悬液(5 x 10“ 脾细胞 / ml) 。 依次加人脾细胞悬液 、 0 . 2 %SRBC和 豚鼠血清( 补体) , 混均 , 置37水浴中温育 lh , 离心 , 吸取上清液 , 用分光光度计(4 1 3nm 波长)测定吸收度 。 结果表明 , 软肝颗粒高 、 中剂量及朝阳丸 能明显提高小鼠脾脏抗体细胞生成量 , 与模 型组相比有显著性差异 。 2 . 4 对小鼠免疫性肝损伤的保护作用川 表5软肝颖粒对正常小橄迟发型 变态反应的影晌(王士 : ;n二 10 ) 组别 剂量( gk /g) 足肠肿胀度(mm) 正常对照组 朝阳丸 软肝颗粒 软肝颗粒 软肝颗
14、粒 0 . 3 6 28 . 0 14 . 0 7 . 0 0 . 24士0 . 0 3 0 . 30士0 . 06 . 0 . 31士0 . 0 8 . 0 . 28土0 . 0 8 0 . 25士0 . 05 表6软肝顺粒对正常小鼠脾脏抗体生成 细胞数 的影响 (王土 : ; n 二 10 ) 组别 剂量 ( gk /g) 光密度(OD值) 正常对照组 2 . 56士0 . 08 模型组 1 . 99士0 . 23# 朝阳丸 0 . 362 . 34士0 . 31 . 软肝 颗粒 28 . 02 . 35士0 . 23 软肝颗粒 14 . 02 . 2 9土0 . 2 3 软肝颗粒 7 .
15、 02 . n 士0 . 2 7 取昆明种小鼠断头处死 , 用生理盐水从门静脉冲洗肝脏以驱除肝内存血 。 取肝脏剪成小块 , 再以生理盐水浸洗至无色 。 取湿重1 0 9 肝组织加 10 0ml生理盐水在匀浆器内制成1 0%肝 匀浆 , 再用高速冷冻离心机(1000 0 xg )低温离心3 0 min (0一4) 。 取上清液加等量弗氏完全 佐剂制成乳化液 。 给刚断乳纯种小鼠背部注射进行免疫 , 每鼠每次皮下注射乳化液 0 . lml , 每周2次 , 共 3周 , 然后改为每周 1次 , 共 4 周 , 前后共1 0次 。 免疫2周后开始给药 , 将动物 随机分为 6组 , 每组 20只
16、, 分别于免疫后 2 、 5 、 8周进行肝脏病理检查 , 给药6周后 , 动物眼 眶取血 , 测肝功能指标并称重 , 观察软肝颗粒对肝损伤小 鼠谷草转氨酶 (AST) 、 谷丙转氨酶 (A L T) 、 总蛋白(T P) 、 白蛋 白(AL B)及体重的影响 。 结果表明 , 软肝颗粒高 、 中 、 低剂量组与空白剂量组 、 造型组 比较均有显著性差异 (尸 0 . 05) , 软肝颗粒对小鼠免疫性肝损伤有保护作用 (见表7) 。 3 小结 软肝颗粒所试剂量可抑制 CC I ; 所致大鼠血清 AL T 、 AST 升高 , 提高血清蛋白量 , 肝组 织检查显示 , 能改善病理变化并抑制肝糖原含 量降低 , 对免疫系统的影响 , 能 明显提高小 鼠 脾脏抗体生成量 , 并对羊红细胞所致小鼠迟发型超敏反应有一定的增强作用 ;软肝颗粒对小 鼠免疫性肝损伤有保护作用 。 . 40 8 . 表 7 软肝顺粒对小吸免疫性肝损伤的影晌(王士 : ;n二 1)0 组别 剂量 (g/ k g) A S T ( nmol/ s )几 A L T ( n m
