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1、丹参酮对人脐静脉内皮细胞系一氧化氮合酶 和磷脂酰肌醇激酶的影响 凃 乾 叶 勇 杨丹丹 （ 江汉大学医学院， 湖北省武汉市经济技术开发区三角湖路号， ； 山东省乳山市人民医院） 基金项目： 科学技术部 年度国际科技合作重点项目计划资助项目（ ） 通讯作者： ， （ ） 摘 要 目的 探讨丹参酮促血管生成的作用机制。 方法 将人脐静脉内皮细胞系（ ） 分为空白组、 二甲 基亚枫（ ， 终浓度） 组、 血管内皮生长因子（ ， 终浓度） 组、 丹参酮（ 终浓度 ） 组， 分别加入相应 药物 后， 镜下观察各组细胞形态， 并采用蛋白质印迹法测定各组细胞内皮型一氧化氮合酶（ ） 、 磷酯酰肌醇激酶 （
2、） 表达情况。 结果 组和丹参酮组 细胞形态饱满， 丰度明显增加， 细胞间隙缩小， 均未见脱落。 与空白组比较， 组和丹参酮组细胞 、 蛋白表达均显著增强（ 或 ） 。 结论 丹参酮 能提高 内 和 蛋白表达， 可能是其促血管生成的作用机制之一。 关键词 丹参酮； 人脐静脉内皮细胞系； 内皮型一氧化氮合酶； 磷脂酰肌醇激酶 ， ， （ ， ； ） （ ） （ ） ， （ ， ） ， （ ， ） （ ） （ ） （ ） ， （ ） ， ； ； ； 血管内皮细胞主要通过释放血管活性物质实现 其功能， 其中一氧化氮（） 是最主要的活性物质， 是对抗动脉粥样硬化发生的重要因子， 它在一氧化 氮合酶作用
3、下， 由左旋精氨酸氧化途径产生。其中， 内皮型一氧化氮合酶（ ） 主要存在于血管内皮 细胞膜上， 是合成 的重要限速步骤之一， 其表达 增加有利于冠状动脉侧支循环的生成。磷脂酰肌 醇 激 酶 （ ） 蛋 白 质 丝 氨 酸 苏 氨 酸 激 酶 （ ） 是目前已知的影响血管生成的主要传导通路 之一， 促进血管生成的作用也是由 介导 的。本研究拟采用蛋白质印迹法探讨丹参中最具有 代表性的脂溶性酮类成分丹参酮对人脐静脉内 皮细胞系（ ） 和 表达的影响， 以初步探讨丹参酮对血管生成的作用机制。 材料 细胞株 ， 购自武汉大学中国典型培养物保 藏中心。 药物与试剂 丹参酮购自中国药品生物制品检定所，
4、批 号： ； 血管内皮生长因子（ ） 购 自美国 公司； 膜购自德国 公 司，蛋 白 裂 解 液、苯 甲 基 磺 酰 氟 （ ） 和牛血清白蛋白（ ） 购自 公司， 兔抗 、 兔 抗 和 抗 体 购 自 美 国 公司； 羊抗兔 抗体购自 公 中医杂志 年月第 卷第 期 ， ， ， 司， 购自美国 公司。 培养 基， 购自 公司， 批号 ； 胎牛血清， 购自 公司， 批号 ； 胰蛋白酶， 购自 公司， 批号 ； 三羟甲基氨基甲烷（ ） ， 购自 国药集团化学试剂有限公司， 批号 ； 三氯 乙酸（ ） ， 购自国药集团化学试剂有限公司， 批 号 ； 二甲基亚枫（ ） ， 购自上海生工 生物技术服务
5、有限公司， 批号： 。 主要仪器 二氧化碳培养箱（ ， ） ， 超净工作台 （ ， 哈尔滨东联电子技术开发有限公司） ， 酶标仪（ ， ） ， 倒置显微镜（ ， ） ， 电泳仪（ 垂直型， ） 。 方法 细胞培养 采用含 胎牛血清的 培养基培养于 、 培养箱， 细胞生长 至 融合传代， 胰酶消化细胞， 细 胞记数后按传代至孔板培养， 每孔 ， 实 验采用第代细胞， 鉴定内皮细胞纯度在 以上。 分组及给药 细胞分为空白组、 组、 组、 丹参酮 组， 每组个复孔， 分别给药后培养 ， 其中 组 终浓度为， 组 终浓度为， 丹参酮组丹参酮 终浓度为 。 形态学观察 各组细胞给药 后， 置于倒置显微镜下 倍观察各组细胞形态、 细胞间隙、 细胞数量。 、 表达 细胞给药 后， 收集细胞， 蛋白裂解液裂解 细胞， 离心取上清液， 保存备用， 法 蛋白定量。配制分离胶（ ）
