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1、Agilent 1200 LC1、仪器设备：Agligengt 1200 LC* G1310A：（单元泵）；G1312A，G1312B XL：（二元泵）；G1311A：（四元泵）* G1329A（标准型自动进样器）* G1316A，G1316B XL：（柱温箱）* G1314B，G1314C XL：（VWD检测器）* G1362A（示差检测器）* G1315B，G1315C XL：（DAD检测器）* G1365B，G1365C XL：（MWD检测器）* G1321A（FLD检测器）* 色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18 1504.6mm,5um column P/N99396
2、7-902/5063-66002、溶剂准备：* 色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇* 二次蒸馏水基本操作步骤：（一）开机1、打开计算机，进入Windows 2000（或Windows XP）画面。（IP地址由Bootp Service程序写入）2、打开1200LC各模块电源3、待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 On line”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入工作站画面。4、从“View”菜单中选择“Method and Run control”画面，点击“View”菜单中得“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System d
3、iagram”，“Sampling diagram”，使其命令前有“”标志，来调用所需的界面。5、把流动相放入溶剂瓶中。6、打开“Purge”阀。7、点击“Pump”图标，点击“Setup pump”选项，进入泵编辑画面。8、设Flow：3-5ml/min，点击“OK”。9、点击“Pump”图标，点击“Pump control”选项，选中“On”,点击“OK”。则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。10、点击“Pump”图标，点击“Pump Control”选项，选中“Off”,点击“OK”关泵，关闭Purge va
4、lue。11、点击“Pump”图标，点击“Setup pump”选项，设Flow:1.5ml/min。12、点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以四元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积 。点击“OK”。（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑方法：从“Method”菜单中选择“Edit entire method”项，如上图所示选中除“Data analysis”外的三项，点击“OK”，进入下一画面。2、方法信息：（1）在“Method Comments”中写入方法的信息（如：This is for test）。（2）点击“OK”进入下一画面。3、泵参数设置：（以四元泵为例）（1
5、）在“Flow”处输入流量，如1.5ml/min，在“Solvent B”处输入70，（A=100-B-C-D）,也可Insert一行，“Timetable”，编辑梯度。在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。（2）点击“OK”进入下一画面。4、自动进样器参数设定：（以标准型G1329A为例）（1）选择合适的进样方式，进样体积1.0ul，洗瓶位置为6号。“Standard Injection”（只能输入进样体积，此方式无洗针功能）。“Injection with Needle Wash”(可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中
6、洗针)。“Use injection program”可以点击“Edit”键进行进样程序编辑。（2）点击“OK”进入下一画面。5、柱温箱参数设定：（1）G1316A：在“Temperature”下面的空白方框内输入所需温度，并选中它，点击“more”键，选中“Same as left”使柱温箱的温度左右一致。G1316B：在“Temperature”下面的空白方框内输入所需温度或与检测池一致，并选中它，点击“more”键，选中“Same as left”使柱温箱的温度左右一致与检测池一致。（2）点击“OK”进入下一画面。6、VWD检测器参数设定（1）G1314B：在“Wavelength” 下
7、方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在“Peak width(Response time)”下方点击下拉式箭头，选择合适的响应时间，如0.1min（2s）。最快采样速率13.74HZ。G1314C：在“Wavelength” 下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，在“Peak width(Response time)”下方点击下拉式箭头，选择合适的响应时间，如0.1min（2s）。最快采样速率55HZ。（2）在Timetable 中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。点击“OK”进入下一画面。7、DAD检测器参数设定：（1）G1315B
8、：检测波长：254nm,BW=4nm,参比波长=360nm，BW=100nm 检测波长：一般选择最大吸收处的波长。样品带宽BW：一般选择最大吸收值一半处的整个宽度。参比波长：一般选择在靠近样品信号的无吸收或低吸收区域。参比带宽BW：至少要与样品信号的带宽相等，许多情况下用100nm作为缺省值。Peak width (Response time):其值尽可能接近要测的窄峰峰宽。Slit:狭缝窄，光谱分辨率高；宽时，噪音低。同时可以输入采集光谱方式，步长，范围，阈值。选中所用的灯。G1315C XL：可以开启光学单元温度控制；可以设定8通道信号等。（2）点击“OK”进入下一画面。8、RID检测器参
9、数设定：（1）色谱条件： 进样体积：20ul；流速：1.5ml/min；光学单元温度：35；柱箱温度：25；极性：正；峰宽（响应时间）：4s。（2）“Optical Unit Temperature”若环境温度控制在2，设定为“Off”，若环境温度不稳定，则设定光学单元。温度为高于环境温度5度，以防止样品在池中沉淀。“Peak width”大多数分析设为4S，只有在高速分析下设为更短。“Automatic recycling after analysis”在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。（3）点击RID图标，选择“RID Control”：Heate
10、r 设为“On”，若要循环流动相，必须将”Recycling Valve”设为“On”。手动Purge参比池，将其设为“On”。并输入Purge时间。9、FLD检测器参数设定：色谱条件：* 样品：P/N 01018-68704用甲醇稀释为1:10* ODS Hypersial column 125mm4.0mmID5u* 流动相：A:Water 35% B：乙腈 65%* 进样体积：5ul；柱温箱：30；EX：246nm，EM=317nm；PMT=10* 响应时间=4s 停止时间：4min* Excitation A :激发波长：200-700nm，步长为1nm，或Zero Order* Em
11、ission:发射波长：280-900nm，步长为1nm, 或Zero Order* PMT:多数应用适当的设定值为10，若高浓度样品峰被切平头，则减少PMT值* “Peak width”:大多数应用设为4s，只有快速分析采用小的设定值* Multi Ex:多波长及光谱（激发）* Multi Em：多波长及光谱（发射）* 同时可以输入范围Range、步长step、采集光谱10、在“Run time checklist”中选中”Data acquisition”，点击“Ok”。11、点击“Method”菜单，选中“Save method as”，输入一方法名。如“test”，点击“Ok”。12、
12、从菜单“View”中选中“Online signal”,选中Windows1,然后点击“Change”按钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“Ok”。（如同时检测二个信号，则重复12，选中Windows2）。13、从“Run control”菜单中选择“Sample info”选项，输入操作者名称，如zzz；在”Data file”中选择“Manual”或“Prefix”。 区别：Manua每次做样之前必须给出新名字，否则仪器会将上次的数据覆盖掉。Prefix在Prefix框中输入前缀，在Counter框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd0001,vwd0002、。14、点击“
13、OK”，从“Instrument”菜单选择“System on”，或依次点击图标开启各模块。15、等仪器Ready,基线平稳，从“Run Control”菜单中选择“Run method”,进样。（若无自动进样器，则基线平稳后，进样并搬动手动进样阀，启动运行）。（三）数据分析方法编辑：1、从“View”菜单中，点击“Data analysis”进入数据分析画面。2、从“File”菜单选择“Load signal”，选中您的数据文件名，点击“OK”，则数据被调出。3、做图谱优化： 从“Graphics”菜单中选择“Signal option”选项。从“Ranges”中选择“Full”或“Auto
14、 scale”及合适的显示时间或选择“Use Ranges”调整。反复运行，直到图的比例合适为止。点击“OK”。4、积分：* 从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项。选择合适的Slope sensitivity”,“Peak width”,“Area reject”, “Height reject”。* 从“Integration”菜单中选择“Integrate”选项，则数据被积分。* 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。* 点击左边“”图标，将积分参数存入方法。5、打印报告：* 从“Report” 菜单中选择“Specify re
15、port”选项。* 点击“Quantitative Results”框中“Calculate”右侧的黑三角，选中“Percent”（面积百分比），其它选项不变。点击“OK”。* 从“Report” 菜单中选择“Print Report”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“Report”底部的“Print”按钮。（四）关机* 关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。* 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机（用Shut down关）。* 关闭Agilent 1200 各模块电源开关。（五）Agilent 1200 LC维护保养：* 色谱柱长时间不用，存放时，柱内充满溶剂，两端封死（乙腈/甲醇适用于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。* 手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口。* 流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。* 带seal-wash的1200，要配制90%水+10%异丙醇，开启seal-wash清洗泵，溶剂不能干涸。
