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1、实验 植物抗逆性的测定（电导仪法）一 实验目的 进一步理解和认识逆境胁迫对植物细胞膜透性的影响，了解电导法在植物逆境生理与抗性育种研究中的应用范围。二、实验原理 在正常生长状况下，植物细胞膜保持着良好的选择透性，而当植物组织受到逆境（例如干旱、低温、高温、盐渍等）伤害时，由于膜脂过氧化、膜蛋白变性及膜脂流动性改变，造成膜相变和膜结构破坏，使得细胞膜透性增大，从而使细胞内的电解质外渗，以致植物细胞浸提液的电导率增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关，胁迫强度越大，伤害越重，外渗越多，电导率的增加也越大。同时也与植物抗逆性的强弱有关，抗性越强，伤害越轻，外渗越少，电导率的增加也越小。所以，通过测
2、定外渗液电导率的变化，就可以反映出细胞膜的伤害程度和所测材料抗逆性的大小。 三、材料、仪器和试剂 1. 材料：各种植物叶片（如丁香、小麦等）2. 仪器设备：电导仪；天平；恒温箱；真空干燥器；抽气机；恒温水浴锅；烧杯；剪刀或打孔器；吸水纸；纱布等。3.试剂：去离子水四、实验步骤 1容器的洗涤： 电导法对水和容器的洁净度要求严格，所用容器必须彻底清洗，再用去离子水冲净，倒置于洁净滤纸上备用。2试验材料的处理： 选取正常生长的小麦或其他植物相同部位叶片若干，剪下后，先用纱布拭净，分成 2份，将其中一份放置 50左右的恒温箱中处理 30min，进行逆境胁迫处理。另一份放置在室温下作对照。3. 测定步骤
3、(1) 将处理组叶片与对照组叶片用去离子水冲洗 2 次，再用洁净滤纸吸净表面水分，各称取 2g，然后剪成长约 1cm 小段放入小烧杯中（大小以够容电极为度） ，并用玻璃棒压住，在杯中准确加入蒸馏水 20ml，浸没叶片。 将其放入真空干燥器中，用抽气机抽气 78min以抽出细胞间隙中的空气；重新缓缓放入空气，水即被压入组织中而使叶片下沉。 （注：材料为阔叶时，最好使用打孔器取材）(2) 将抽过气的小烧杯取出，放在实验桌上静置 20min，然后用玻棒轻轻搅动叶片，在2025恒温下，用电导仪分别测定处理组和对照组得电导值为 T1 和 C1。 (3) 测过电导率之后，再放入 100沸水浴中 15min
4、，以杀死植物组织，取出待其冷却至25时测其煮沸电导率，分别为 T2 和 C2。 五、实验结果伤害率（%）计算式为：1t2TL0%= 12CLck0%= 式中 Lt处理叶片的伤害率； Lck对照叶片的伤害率。在电导率测定中一般应用去离子水，若制备困难可用普通蒸馏水代替，但需要设一空白(蒸馏水作空白)，测定样品时同时测定空白电导值，计算时各电导值需减去相应的空白电导值。六、思考题. 测定电导率时为何反复清洗仪器和样品?实验 植物组织水势的测定（小液流法）一、实验目的 验证植物组织水分移动方向由水势决定；掌握小液流测组织水势的方法。植物体内的生理生化活动与其水分状况密切相关，而植物组织的水势是表示植
5、物水分状况的一个重要生理指标。目前，植物组织水势的测定主要有几种方法：小液流法、折射仪法、压力室法、热电偶湿度计法等。压力室法较适于测定枝条或叶柄导管的水势。热电偶湿度计法较适宜测定柔软叶片的水势，且精确度高，可在一定范围内重复测定叶片的水势，是较好的水势测定方法。小液流法具有操作简便、反应灵敏、结果可靠、费用低廉诸多优点，因而在我国目前的许多研究中，测定植物组织水势仍以小液流法为主要方法之一，同时该法也是校验其它方法的一个基准方法。二、实验原理将植物组织分别放在一系列浓度递增的溶液中，当找到某一浓度的溶液与植物组织之间水分保持动态平衡时，这时可认为此植物组织的水势数值上等于该溶液的渗透势（溶
6、质势） 。因溶液的浓度是已知的，可以根据公式算出其渗透压取其负值，即为溶液的渗透势（ ） ，代表植物的水势（ w） （water potential） 。三、材料、仪器和试剂1. 材料：植物叶片或马铃薯块茎等。2. 仪器：试管、青霉素小瓶 9 个；打孔器；镊子；移液管；烧杯；毛细滴管；刀片。2. 试剂：1molL 1 CaCl2 母液；甲烯蓝粉末。四、实验步骤1 系列 CaCl2 溶液浓度配制（1）取干燥洁净试管 9 个，贴上标签，编号，用 1molL1 CaCl2 母液配成0.05、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45molL 1 浓度的 CaCl2 溶液，
7、各管总量为10ml，并塞上塞子（防止浓度改变） ，作为甲组。（2）另取干燥洁净的小瓶 9 个，贴上标签，编号，标明0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、 0.30、0.35、0.4、0.45molL 1 浓度,分别从甲组取相应浓度CaCl2 溶液 2.5ml 盛于小瓶中，作为乙组。2 取样及测定（1）选取生长一致的叶片，用直径为 0.5cm 的打孔器钻取圆片，在玻璃皿内混匀，然后用镊子把圆片放进乙组小瓶中，每瓶放 1520 片， （若采用植物块茎如马铃薯，先用打孔器钻取圆条，然后切成约 1mm 厚圆片，每瓶放 5 片） ，放置 30min 左右 ，其间轻轻摇动 3 次，以加速平衡。
8、（2）到预定时间后，各小瓶加入微量甲烯蓝粉染色，摇匀，取毛细滴管，分别从乙组中取出溶液，插入甲组原相应浓度 CaCl2 溶液的中部，轻轻挤出滴管内的溶液一滴，并小心地抽出滴管（注意勿搅动溶液） ，注意观察小液滴升降动向。如果某一管中的小液滴悬浮不动，植物组织的水势等于该浓度溶液的水势，根据公式算出该溶液水势也即得出植物组织水势 。若前一浓度溶液小液流下沉，而后一浓度溶液中上浮，则组织的水势值介于两浓度溶液水势之间，可取平均值计算。五 实验结果按下表记录实验结果。表 1-1-1 系列浓度 CaCl2 溶液的配置和实验结果记录需配 CaCl2 溶液浓度（molL 1 ）1 molL1 CaCl2
9、溶液（ml）蒸馏水 (ml)小液流移动方向（上、下、不动）0.05 0.5 9.50.10 1.0 9.00.15 1.5 8.50.20 2.0 8.00.25 2.5 7.50.30 3.0 7.00.35 3.5 6.50.40 4.0 6.00.45 4.5 5.5根据以下公式计算出植物组织的水势：公式中： w= iRTC （MPa）w 植物组织水势,单位：Mpa（兆帕） 溶液的渗透势 , 单位：Mpa （兆帕）C 溶液浓度（ molL1 ）R 气体常数（ 0.008314 LMPamol1 K1 ）T 绝对温度（273 + t）i 解离系数（ CaCl2 =2.60；蔗糖=1）六、注意事项1.配制 CaCl2 溶液浓度要准确，并充分摇匀。2.取样时选材要一致。3.加甲烯蓝要适量，过多会影响溶液浓度，过少则很难识别小液流移动方向。七、思考题1.影响小液流法测定水势准确度的因素有哪些？2.如果在液滴的升降转换过程中没有停滞不动的那一点，应如何处理？
