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1、临床医学论文-大肠癌患者外周血微转移与化疗及预后的关系【摘要】 目的 研究大肠癌患者外周血微转移与化疗及预后的关系。方法 选取大肠癌患者 121 例，应用 RT-PCR 技术，以 CK20 mRNA 为标志物，检测术前、术后第 2 天、首次化疗后血液微转移情况及与生存期的关系。结果术前血液 CK20 mRNA 微转移阳性率为 53.7%，其中 DukesA、B、C、D 期的阳性率分别为 20%、25%、78.5% 、75%, 4 组之间有显着性差异(2=12.03，P0.05)。化疗前后血液 CK20 mRNA 阳性率差异非常显着(2=25.59，P1.65，排除 RNA 酶污染可能。行 RN
2、 电泳，见清晰的18S、28S 两条带，证实 RNA 无降解，可为 RT-PCR 反应模板。1.2.3 RT-PCR 反应使用 Promega Access RT-PCRSystem 试剂盒，反应体系 25l，参照试剂盒说明行一步法 CK20 mRNA RT-PCR 扩增，同时每组体系均设立 -actin 为内参照。反应条件如下：48 45min，94 2min，进入 PCR 循环，9430s 601min、682min，共 40 个循环，687min 终延长，4保存。1.2.4 产物鉴定 取反应产物 5l，行电泳。电泳条件：1TBE 缓冲液，2%琼脂糖凝胶，电压 5V/cm，时间 30min
3、40min。凝胶成像系统观察，如在 540bp 处出现清晰条带者可证实 RNA 无降解和反应体系适当。如反应产物在 462bp 处出现清晰条带者为待测标本 CK20 mRNA 阳性，无此条带者为阴性。2 结 果大肠癌患者血液 CK20 mRNA 阳性率为 53.70%(65/121)。其中 DukesA、B、C、D 期的阳性率分别为 20.0%(5/25)、25.0%(7/28)、78.52%(44/56)、75.0%(9/12)。DukesA、B、C、D 期之间 CK20 mRNA 差异有显着性(2=12.03，P0.05)。大肠癌术后首次化疗结束当天血液 CK20 mRNA 阳性率为 26
4、.7%(33/121)，其中DukesA、B、C、D 期的阳性率分别为 4.0%(1/25)、10.79%(3/28)、41.11%(23/56)、50.0%(6/12)，统计学分析显示：术后化疗前后血液 CK20 mRNA 阳性率差异有显着性(2=25.39，P0.05)，表明在对恶性肿瘤行手术治疗过程中，由于机械刺激和沾染等原因可能增加肿瘤转移或术野肿瘤细胞残留，与文献报道相符。术后化疗结束后血液 CK20 mRNA 阳性率为 26.7%(33/121)，统计学分析显示：术后化疗前后血液 CK20 mRNA 阳性率差异非常显着性(2=25.39，P0.05)；术后化疗结束后与术前相比血液
5、CK20 mRNA 阳性率亦显着性降低(2=17.56，P0.05)。显示术后化疗对微转移细胞存在杀灭作用。本组用FOLFOX4 方案术后化疗，结果表明术后第 1 个疗程化疗结束后微转移检出率显着降低，证实该化疗方案对大肠癌术后微转移的治疗有明显疗效。大肠癌患者中无淋巴结转移 A、B 期患者被认为是很少复发的，对这些患者并不推荐化疗7，但实际上，微转移的肿瘤细胞已存在，仍有 30%40%发生了复发或转移。因此，监测微转移可识别出高危患者8，并指导其治疗。我们对大肠癌患者进行 Cox 多因素分析发现，血液中检测到微转移的患者，其死亡危险性明显增加。Maruyama 等9亦发现淋巴结中无微转移的期
6、肺癌患者 5 年生存率为 90.9%，而检测出微转移者仅为 64.4%。由此可见，微转移是一个独立的预后指标。微转移的检出是肿瘤复发的高风险因素。监测肿瘤微转移可对选择术后化疗方案及预后评估起到重要作用。【参考文献】1 Yuasa N, Nimura Y. Survival after surgical treatment of early gastric cancer, surgical techniques, and long-term survivalJ. Langenbecks Arch Surg, 2005, 390(4):286-293.2 Zhou QH, Gong YL, Qi
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8、merase chain reaction for cytokeratin 20J. Int J Cancer, 1998, 79(3):288-293.4 Huang P, Wang J, Guo Y. Molecular detection of disseminated tumor cells in the peripheral blood in patients with gastrointestinal cancerJ. J Cancer Res Clin Oncol, 2003, 129（3）:192-198.5 Lowe B, Avila HA, Bloom FR, et al.
9、 Quantitation of gene expression in neural precursors by reverse-transcription polymerase chain reaction using self-quenched, fluorogenic primersJ. Anal Biochem, 2003, 315(1):95-105.6 赵增顺, 王少文, 焦喜林, 等. 胃癌根治术对单细胞入血转移的影响J. 华人消化杂志, 1998, 6(7):610-611.7 Weitz J, Kienle P, et al. Detection of disseminate
10、d colorectal cancer cells in lymph nodes, blood and bone marrowJ. Clin Cancer Res, 1999, 5(7):1830-1836.8 Miyake Y, Yamamoto H, et al. Extensive micrometastases to lymph nodes as a marker for rapid recurrence of colorectal cancer: a study of lymphatic mappingJ. Clin Cancer Res, 2001, 7(5):1350-1357.9 Maruyama R, Sugio K, Mitsudomi T, et al. Relationship between early recurrence and micrometastases in the lymphnodes of patients with stagenon small cell lung cancerJ. J Thorac Cardiovasc Surg, 1997, 114(4)535-543.
