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1、临床医学论文-沙棘汁对铅所致小鼠脑组织生物化学指标的影响作者：许妍姬，韩春姬，李莲姬 【关键词】 脂质过氧化作用;生物源单胺类;胆碱酯酶类;植物,药用;小鼠摘要 目的 研究沙棘汁对醋酸铅所致小鼠脑脂质过氧化及胆碱酯酶和单胺类神经递质含量改变的影响. 方法 制作铅中毒小鼠模型，灌胃给予不同剂量的沙棘汁，利用硫代巴比妥酸比色法、碱性羟胺法及荧光法分别测定小鼠脑组织内过氧化脂质、胆碱酯酶及单胺类神经递质含量. 结果 铅组小鼠脑组织内 MDA 含量明显升高，200，400g/L 沙棘汁降低铅致 MDA 含量升高，且呈剂量-效应关系;铅组小鼠脑组织内胆碱酯酶活性明显升高，单胺类神经递质中除 DA 外 N
2、E，5-HT，5-HIAA 含量均明显下降，400g/L 沙棘汁抑制铅致脑组织内多种神经递质含量的变化. 结论 沙棘汁可拮抗铅所致小鼠脑组织内脂质过氧化及胆碱酯酶和单胺类神经递质含量的改变.关键词 脂质过氧化作用;生物源单胺类;胆碱酯酶类;植物，药用;小鼠Effects of the Hippophae Rhamnoides L juice on lead-induced change of lipid peroxidation，acetylcholinesterase and catecholamine neurotrans-mitters in mice brainABSTRACT:OBJ
3、ECTIVE To study the effects of the Hippophae Rhamnoides L juice on lead-induced change of lipid peroxidation，acetylcholinesterase（AchE）and catecholamine neurotransmitters in mice brain.METHODS Mice were administrated peritoneal injection with lead acetate，then mice were given various dosages of Hipp
4、ophae Rhamnoides L juice by gavage.The value of MDA was determined by the thiobarituric acid colorimetricmethod，and the activity of AchE was determined by the alkaline hydroxylamine method，and contents of NE，DA，5-HT were determined by the flourimetric method.RESULTS The MDA levels were increased in
5、lead-treated mice，which were reduced by200，400g/L Hippophae Rhamnoides L in dose-dependent manner.The activities of AchE was significantly increased in the lead-treated group，which were decreased by400g/L Hippophae Rhamnoides L.The levels of NE，5-HT，5-HIAA were significantly decreased in the lead-tr
6、eated mice，and this decreases were antagonized by400g/L Hippophae Rhamnoides L，except for that in dopamine.CONCLUSION Hippophae Rhamnoides L juice has protective effects against the lead acetate-induced changes in neurobiochemical parameters.Key words:lipid peroxidation;biogenic monoamines;cholinest
7、erases;plants，medicinal;mice铅是广泛存在于自然环境中的强神经毒物，可影响神经系统的许多功能.动物实验及临床观察结果表明，铅中毒可引起行为和智力障碍，可改变一些酶的活性，减少突触前神经递质的释放，影响自由基代谢 1，2 .沙棘为胡颓子科酸刺属灌木，含有多种维生素（E，C，B 1 ，B 2 ，B 6 ）、氨基酸、黄酮、脂肪油及微量元素等物质，具有降血脂、抗心律失常、抗氧化、抗癌、抗过敏及增强免疫功能等功效 3 .本实验选用神经生物化学实验方法，观察了沙棘对铅致小鼠脑脂质过氧化及胆碱酯酶和单胺类神经递质含量改变的影响.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂 沙棘汁为采
8、集于吉林省珲春市郊产沙棘果经压榨及过滤而得原汁，加水配制成 200，400g/L;醋酸铅为哈尔滨市化工试剂厂产品，临用前用双蒸水配制成浓度为 10mmol/L 的溶液，以每 g 体重 10L 的剂量行腹腔注射;NE，DA，5-HT，5-HIAA 购自 Sigma 公司;MDA 测试盒、胆碱酯酶测试盒、蛋白质定量试剂盒购自南京建成生物工程公司.1.1.2 实验动物 取昆明种小鼠，体重为 2022g，雌雄兼用，由延边大学医学部实验动物科提供.1.2 方法1.2.1 过氧化脂质含量的测定 取昆明种小鼠 50 只，随机分为 5 组，每组各为 10 只.1）对照组:每日腹腔注射等体积生理盐水 10mL/
9、kg;2）铅组:每日腹腔注射醋酸铅溶液 10mg/kg;3）400g/L 沙棘汁组:每日灌胃给予 400g/L 沙棘汁10mL/kg;4）铅加 200g/L 沙棘汁组:上午灌胃给予 200g/L 沙棘汁 10mL/kg，下午腹腔注射醋酸铅溶液 10mL/kg;5）铅加 400g/L 沙棘汁组:上午灌胃给予 400g/L 沙棘汁 10mL/kg，下午腹腔注射醋酸铅溶液 10mL/kg.连续给药 20d，其后对相应组别小鼠隔日分别给予 200 及 400g/L 沙棘汁灌胃，给予对照组小鼠等量生理盐水灌胃，共 5 次.实验第 31 日处死动物，取脑，称其质量，在预冷的0.32mol/L 蔗糖，10m
10、mol/L PBS（pH 值为 7.4）中以 110 的比例匀浆，以3500r/min 离心 10min，取上清液，用 MDA 测试盒测定过氧化脂质含量.1.2.2 胆碱酯酶活性的测定 分组、染毒方式及给药方法同 1.2.1 项下方法.实验第 31 日处死动物，取脑，称其质量，在 70mmol/L PBS 中匀浆，离心30min，取上清液 50L 置于反应管内，利用胆碱酯酶测试盒测定胆碱酯酶活性 4 .1.2.3 神经递质含量的测定 分组、染毒方式及给药方法同 1.2.1 项下方法.实验第 31 日，处死动物，取脑，称其质量，在冰浴条件下与冷酸化正丁醇以 110 的比例匀浆，补足液体至 4mL
11、，旋涡振荡 5min，以 3000r/min 离心5min，取上清液 2.5mL 置于反应管内，加入正庚烷 5.0mL，0.1mol/L 盐酸5.0mL，旋涡振荡 5min，以 3000r/min 离心 5min，其水相内含有 5-HT，NE，DA，有机相内含有 5-HIAA 4，5 .NE，DA 含量的测定:取水相0.5mL，加 70mmol/L PBS1.7mL（pH 值为 7.2），碘试剂 0.1mL，静置 2min，加碱性亚硫酸钠溶液 0.5mL，静置 2min，加入 6mol/L HAc 溶液 0.6mL，煮沸20min，冷水冷却，用荧光分光光度计在 475/385nm 处测定 NE
12、 的荧光强度，在370/322nm 处测定 DA 的荧光强度.5-HT 含量的测定:取水相 0.5mL，加入 5g/L半胱氨酸 0.1mL，40mg/L 邻苯二甲醛 3mL，煮沸 10min，冷水冷却，用荧光分光光度计在 475/350nm 处测定 5-HT 的荧光强度.5-HIAA 含量的测定:取有机相0.5mL，加入 0.5mol/L PBS1.5mL（pH 值为 7.0），旋涡振荡 10min，以3000r/min 离心 5min，取水相（含 5-HIAA）1mL 置于反应管内，加入 10g/L 半胱氨酸 0.1mL，1g/L 邻苯二甲醛 0.1mL，20mg/L NaIO 4 溶液 0
13、.1mL，煮沸5min，冷水冷却，用荧光分光光度计在 475/350nm 处测定 5-HIAA 的荧光强度. 1.2.4 统计学处理 所有数据均用 SPSS 统计软件进行单因素方差分析.2 结果2.1 沙棘汁对铅中毒小鼠脑过氧化脂质含量的影响 铅组小鼠脑过氧化脂质的含量明显高于其它各组，与对照组比较有显着性差异（P0.05，P2.2 沙棘汁对铅中毒小鼠脑胆碱酯酶活性的影响 铅组小鼠脑组织胆碱酯酶活性明显高于其它各组，与对照组比较有显着性差异（P0.05）;见 Fig2.2.3 沙棘汁对铅中毒小鼠脑组织单胺类神经递质含量的影响 铅组小鼠脑组织内 NE，5-HT，5-HIAA 含量均低于对照组，分
14、别与对照组比较均有显着性差异（P0.05）;400g/L 沙棘汁可缓解铅致脑组织 5-HT，5-HIAA 含量下降，但不能拮抗 NE，DA 含量变化;200g/L 沙棘汁不能拮抗铅致脑组织单胺类神经递质含量的变化;单独给予 400g/L 沙棘汁可增加脑组织 5-HT 含量;见3 讨论脂质过氧化作用可导致细胞功能与结构的改变，而神经系统内含有丰富的脂质，故脂质过氧化对神经细胞的损伤尤为明显.染铅后细胞的脂质过氧化作用增强，以抗氧化物 SOD，CAT，GSH-Px 为标志的神经元抗氧化能力下降，据此推断铅是通过对神经细胞的氧化损伤来发挥其神经毒作用的 6 .本实验结果表明，铅组小鼠脑组织 MDA
15、含量明显高于对照组，与文献报道相符.沙棘果汁内含有可清除氧离子的 SOD 3 ，可明显增强正常小鼠 GSH-Px 活性，降低过氧化脂质含量 7 .本实验结果表明，400g/L 沙棘汁可拮抗铅致小鼠脑组织MDA 含量的升高，可能与上述沙棘抗氧化机制有关.阮迪云 7 报道，胆碱类递质参与学习记忆过程.在体和离体实验均证实铅可诱发乙酰胆碱释放的减少和胆碱能系统功能降低，而铅可引起 M 2 受体激动剂的超敏感性，从而激活 M 2 受体，最终使乙酰胆碱释放量减少.本实验中给予 10mg/kg 醋酸铅的小鼠脑组织胆碱酯酶活性增强，与文献报道有所差异，可能与测定部位、方法及染毒剂量不同有关.Pillai 等
16、 8 报道，50g/kg 铅染毒 15d 可导致雌性大鼠下丘脑组织 DA，NE，5-HT 含量下降.本研究结果示，10mg/kg 铅染毒 20d 时小鼠脑组织 DA，NE，5-HT 含量明显下降，与文献报道相符.沙棘中的维生素 C 含量是 许多果实及蔬菜之冠 3 ，Goyer 等的动物实验认为 维生素 C 排除组织内的铅的能力较 EDTA 好，沙棘还含有维生素 B 1 ，B 2 ，B 6 等 3 ，而维生素 B 1 可加速 铅排泄 9 ，故沙棘汁具有降低铅在体内的吸收和蓄积的作用.本实验结果进一步在生物化学机理上证实了沙棘汁具有保护铅致小鼠脑组织损伤的作用，关于沙棘是否具有排铅作用尚待进一步研究阐明. 参 考 文 献1 时胜利，陈自强.铅染毒对大鼠神经行为功能及神经化学的影响J. 中华预防医学杂志， 1995，3（2）:80.2 陆巍.铅的神经毒作用机制J. 国外医学卫生学分册 ，1995，22（6）:3
