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1、CIK细胞联合树突状细胞治疗恶性肿瘤的研究进展严 芳 张 智 张 珍 李亚红 李泽泳 邱厚匡(广东省第二人民医院生物实验中心，广州，510317)摘要：随着生物技术的发展，对恶性肿瘤进行免疫治疗已成为研究热点，免疫治疗是肿瘤治疗的一种崭新模式，部分已经进入临床应用阶段，并取得了明显的治疗效果，尤其是细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞联合树突状细胞（DC）对恶性肿瘤的治疗显示出良好的效果，本文综述了CIK细胞和DC的一些基础研究现状及近年的临床应用情况。关键词：CIK细胞，DC，肿瘤Progress in research on application of DC-CIK cells immuno
2、therapy for cancerYan Fang Zhang Zhi Zhang Zhen Li Yahong Li Zeyong Qiu Houkuang（Biology Experiment Center, Guangdong NO.2 Provincial Peoples Hospital, Guangzhou, 510317, China）Abstract: With the development of biological technology, immunotherapy of cancer has been the focus of cancer treatment stu
3、dy. Immunotherapy is a new approach for cancer treatment, parts of which have been in clinical practice, and obtained prominent curative effect, especially dendritic cell-cytokine induced killer cells (DC-CIK) in treating cancer. In this article, the new progress on study and clinical practice for c
4、ancer is reviewed in the past few years.Key words: cytokine induced killer cells, dendritic cells, cancer细胞介导的过继免疫治疗已成为肿瘤患者放、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。通过研究淋巴因子-激活的杀伤（LAK）细胞、肿瘤浸润淋巴（TIL）细胞、细胞因子诱导的杀伤（CIK）细胞等，表明CIK细胞是一种新型、高效、具有广谱杀瘤活性的非主要组织相容性复合体（MHC）限制性免疫效应细胞，在肿瘤免疫治疗中显露出巨大的应用价值。树突
5、状细胞（DC）是人体内功能强大的主要的抗原递呈细胞，能诱导出抗原特异性细胞毒淋巴细胞（CTL）反应 1，并可通过直接或间接方式影响细胞（胰腺的胰岛中能产生胰岛素的细胞）的增殖，活化体液免疫应答2。将CIK细胞和DC联合治疗恶性肿瘤，有助于解除肿瘤患者的T细胞免疫无能，有协同抗肿瘤的作用。 1 CIK细胞的免疫生物学特性1.1 CIK细胞的来源及表型特点CIK细胞是将人外周血或人脐带血单个核细胞在体外用多种细胞因子如IL-2、IFN-和CD3单克隆抗体等诱导而获得的一群异质细胞。CIK细胞主要分布于肝脏中，其次为外周血。通过对细胞的表面标志物研究发现，CIK细胞为CD3、CD56双阳性细胞群，而
6、这些CD3+CD56+细胞主要来源于CD3+CD56-的T淋巴细胞，而非CD3-CD56+的NK细胞。来源于CD3+CD56-CD8+ T细胞的CIK细胞最终分化为CD8 T细胞，它们表达为多克隆的T细胞受体，并获得CD56、NKG2D以及大颗粒淋巴细胞的形态学特征，能杀死K562靶点，但是缺乏NK细胞特异性激活因子（NKp30, NKp44, NKp46）和抑制因子（KIR2DL1, KIR2DL2, KIR3DL1, NKG2A, CD94）受体3。1.2 CIK细胞的抗肿瘤作用机制目前认为淋巴细胞功能相关抗原-1（LFA-1）有关识别结构以及与CD3受体结合可激活CIK细胞，导致胞浆毒性
7、颗粒释放而杀伤肿瘤细胞；另外CIK细胞可产生大量炎性细胞因子、活化肿瘤细胞凋亡基因，使得FLIP、Bcl-2、Bcl-xL、DAD1和survivin基因表达上调。另外，CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤具有非组织相容性复合体（MHC）限制性，可杀伤多种不同组织来源的肿瘤细胞，但其靶点上需有MHC分子与CD3-T细胞受体复合物相互作用4。1.3 CIK细胞的抗肿瘤作用CIK细胞是以CD3+CD56+T细胞为主的异质细胞群，较LAK细胞和CD3AK细胞具有更强的杀瘤活性，而且CIK细胞表面高表达IL-2R并能分泌内源性的IL-2，较易维持其体内杀瘤细胞毒性。施玲燕等5在研究CIK细胞体外增殖特性及治疗肿
8、瘤的过程中发现，体外培养5天后，CIK细胞扩增倍数明显高于LAK细胞，表型分析发现CIK细胞中杀伤作用细胞CD8和CD3+CD56+的比例分别为70.9%和36.9%，而LAK细胞为50.6%和1.63%。2 DC的免疫生物学活性DC的前体细胞由骨髓进入外周血，再分布到全身各组织。DU Z等6利用肝癌病人手术中流失的血液中的单核细胞经RhGM-CSF和rhIL-4诱导可分化成为具有典型形态学和表型的DC，虽然其表达的表面标志物要比脐血诱导的DC少，但仍可有效地与CIK细胞联合发挥抗肝癌的作用。DC 是专职抗原呈递细胞（APC），其递呈抗原、激发 T 细胞增殖的能力是其它 APC 细胞的 100
9、-1000 倍，能摄取、加工、递呈抗原，高表达MHC-、MHC-类分子、共刺激分析和黏附分子，并分泌高水平辅助性T细胞1（Th1）型细胞因子IL-12，2干扰素（IFN-）,进一步加强T细胞活化的功能细胞因子。Michiels等7研究表明，联合双链RNA和肿瘤抗原编码mRNA的DC能介导完全活化抗原负荷的DC，从而提高抗原特异性的CTL反应。利用特异抗原冲击致敏 DC，激活体内特异细胞毒反应，是 DC 为基础肿瘤免疫治疗的基本原理。如何使 DC 呈递抗原更特异、效应更高，是当今研究的热点。CD40 与配体 CD40L（CD154）在免疫系统存在于不同细胞表面，二者相互作用在调节体液与细胞免疫反
10、应具有枢纽作用。CD40 不仅表达于增殖潜能较强的造血与淋巴细胞，许多肿瘤细胞表面也有表达，并且与肿瘤的发生有某种内在联系。近年研究发现，CD40 信号的激活可为恶性肿瘤治疗开拓新的途径。一定状态下，CD40L 与肿瘤细胞表面 CD40 结合，可以直接抑制肿瘤细胞增殖，增加抗肿瘤制剂的敏感性8。更重要的是 CD40L 可以增强患者抵抗肿瘤的免疫能力。3 CIK细胞与DC协同抗肿瘤作用CIK细胞是由多种细胞因子诱导的非特异性杀伤细胞，能分泌多种细胞因子(如IL-4,IFN-等)，而DC作为体内功能强大的专职抗原递呈细胞，在细胞毒性细胞的活化过程中发挥着重要的作用。因此，将CIK细胞和DC联合应用
11、于治疗恶性肿瘤，有助于解除肿瘤患者T细胞的免疫无能，起到抗肿瘤的作用。Wei XC等9将CIK细胞和DC联合培养，并设CIK细胞单独培养为对照组，发现DC-CIK细胞增殖能力明显高于对照组，共培养中CIK细胞的双阳性率如CD3(+) CD8(+), CD3(+) CD56(+)明显增高(p 0.05)，第三天IL-12 和 INF-水平明显上升(p 0.01, p 0.05)，靶点效应与对照组分别为5:1和4:1，对白血病细胞的杀伤效果明显高于参考组(p 0.05)，同时显示了靶点效应与杀伤效果之间的关系。Wonqkajornsilp A等10对接种了人胆管癌的SCID小鼠进行CIK细胞与DC
12、联合治疗，通过对小鼠体内细胞毒素、肿瘤大小和免疫组织化学的观察，发现联合治疗显示了最佳的肿瘤抑制效果。Shi YJ等11研究发现将DC加入到SKBr3细胞5分钟后发现SKBr3细胞被DC环绕，48小时后，透射显微镜下发现许多DC质中靶点细胞的膜结构细胞器发生凋亡，60的DC对IgG（Fc-RI或CD64）表现为高亲和力的受体，CD14在成熟的DC中表达较少，HLA-DR和HLA-ABC在对照组即曲妥单抗组中表达较高，CD1a, CD80, CD83 和CD86在曲妥单抗组中的表达要比未成熟的DC组中要高， DC-CIK细胞负载SKBr3抗原引起SKBr3抗原减少的能力大约是单独CIK细胞的1.
13、7倍，DC-CIK诱导的SKBr3细胞的减少是通过DC与曲妥单抗结合捕获SKBr3细胞抗原完成的。Shi M等12发现慢性肝炎B（CHB）病人体内骨髓和血液中的DC（mDCs, pDCs）的功能明显削弱，经CIK细胞免疫治疗后有50%的病人CHB DNA减少，mDCs、pDCs和细胞因子产生频率和能力增加，且这些病人体内的DC亚型相同，说明CIK细胞免疫治疗CHB病人的功效与mDCs, pDCs的频率和功能恢复至少部分相关。4 存在问题及应用前景 综上所述，CIK细胞和DC在联合抗肿瘤治疗中具有广泛的应用前景，可望成为肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案，目前该免疫疗法已进入临床试验。但目前用联合治
14、疗恶性肿瘤的临床试验病例还不多，确切疗效需进一步评价；CIK细胞的抗肿瘤作用机制有待于进一步深入研究；如何解除肿瘤患者体内的免疫抑制状态，使DC-CIK细胞联合免疫治疗在体内更好的发挥抗肿瘤的作用更需进一步探讨。进一步探讨DC-CIK细胞免疫治疗联合放疗、化疗、手术及中草药治疗13，将有助于减少恶性肿瘤的转移与复发，提高临床疗效，改善肿瘤患者的生活质量。1 Banchereau J, Steinman P M. Dendritic cells and the control of immunityJ. Nature, 1998, 392 (6673): 245-2522 Zoll B, Lef
15、ierova P, Ebert O, et al. Modulation of cell surface markers of NK-like T lymphocytes by using IL-2, IL-7 or IL-12 in vitro stimulationJ. Cytokine, 2000,12(9):1385-13903 Franceschetti M, Pievani A, Borleri G, et al. Cytokine-induced killer cells are terminally differentiated activated CD8 cytotoxic
16、T-EMRA lymphocytesJ. Exp Hematol, 2009,37(5): 616- 6284 Linn YC, Lau SK, Liu BH, et al. Characterization of the recognition and functional heterogeneity exhibited by cytokine-induced killer cell subsets against acute myeloid leukaemia target cellJ. Immuology, 2009, 126(3):423-435 5 施艳玲, 刘继武, 刘晓玲, 等. CIK细胞实验研究及治疗肿瘤的临床疗效观察. 肿瘤基础与临床, 2009, 22(2):141-1426 DU Z, Z
