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1、日本血 吸 虫 病 原 学 检 查 方 法,目 录,一、血吸虫病原学查病方法种类,二、详细介绍毛蚴孵化法和改良加藤厚涂片法,三、各种病原学方法查出的虫卵及毛蚴涂片欣赏,一、日本血吸虫病原学查病方法种类,从粪便中检出血吸虫虫卵或孵出毛蚴是确定诊断和考核疗效的最可靠的指标。粪检虫卵方法简便易行，但在轻度感染者、晚期患者和经治疗未愈者粪便中虫卵数很少，检出率不高，故粪检虫卵阴性不能排除血吸虫感染。粪检虫卵（毛蚴）有定性检查法和定量检查法。,1.粪 检,定性检查： A 直接涂片镜检法 B 集卵镜检法 C 孵化法,1.粪 检,自然沉淀法,尼龙袋集卵法,定量检查： 改良加藤厚涂片法,1.粪 检,用乙状结肠
2、镜或直肠镜观察直肠粘膜的病变；急性期以肠粘膜充血、水肿为主，慢性期时肠粘膜苍白、肥厚及瘫痕形成。各期均可见典型的小斑点或小结节。将夹取疑有虫卵结节的米粒大小粘膜组织，压于两载玻片之间镜检。本法检出血吸虫卵的阳性率很高。对未经治疗的病人，检出的虫卵不论死、活卵均有确定诊断价值；对经特效药物治疗过的病人，则只有检出活卵或近期变性卵才有诊断、治疗意义。活检时要细心操作，以防发生肠大出血或肠穿孔，尤其对晚期血吸虫病患者更应小心操作。,2.直肠粘膜活组织检查,二、详细介绍毛蚴孵化法和改良 加藤厚涂片法,毛 蚴 孵 化 法,基本原理： 血吸虫病患者粪便中虫卵较少，直接涂片法不易检出，毛蚴孵化法最常与自然沉
3、淀法或尼龙筛集卵法联用于血吸虫感染的诊断。血吸虫卵内毛蚴在温度2528，pH7.57.8的清水中，能在短时间内孵化，孵出后毛蚴接近水面呈直线运动。由于此法将较大量粪便经水洗自然沉淀法或用尼龙绢筛集卵法浓集，再行毛蚴孵化，使之检出率较一般方法显著提高。,器材准备： a.120目尼龙袋 ,40目铜丝筛 b.孵化瓶或三角烧瓶 c.pH7.4的无氯清水 d.带光源的恒温箱 e.放大镜 f.玻璃吸管 g.观察毛蚴日光光源,毛 蚴 孵 化 法,操作方法： 将自然沉淀法或尼龙筛集卵法收集的粪便沉渣，倒入孵化瓶内，加调试好pH的清水（约30水温）置瓶颈处，既后将孵化瓶移放在25有光照的条件下孵化毛蚴。孵育约4
4、8小时后取出检查毛蚴，若为阴性，继续孵化，于810小时及2024小时左右各再检查一次，仍为阴性，则报告为阴性。检查时面向光源，将孵化瓶移置在黑色背景下，用肉眼或扩大镜观察，双目平视，注意寻找接近水面1厘米水域处快速运动的小白点，如见针尖大小、菱形、乳白色、半透明小白点，同时仔细观察这些小白点的运动特点（直线游动，碰壁迅速拐弯），即可能是毛蚴。且应特别注意与水中其他原生动物（如草履虫）相鉴别。若肉眼观察鉴别困难，可用吸管吸出运动的小白点，置于载玻片上，用低倍镜进行鉴别，其基本形态特征是：梨形，体表有纤毛。如未发现毛蚴，可将孵化瓶中粪渣经260目过筛浓集，用吸管吸取粪渣涂片在镜下寻找虫卵，这样做可
5、显著提高检出率（可能有部分虫卵内毛蚴发育不良而不能孵化出的缘故）。,毛 蚴 孵 化 法,毛 蚴 促 孵 法,将洗净的粪渣用以下3种方法中的任意一种处理 a.粪便沉渣不加水，置2530环境中10h。 b.将粪便沉渣挤去多余水分，保持含水量80%左右，防止干燥，30保存24h。 c.粪便沉渣加生理盐水，30避免保存2024h后滤去盐水。,收集的粪渣放入三角瓶内，或将粪便置于吸水纸上，放在2030温箱中过夜。检查时，加热水，2小时后就见到孵出的毛蚴，采用此法，毛蚴孵出的时间较一致，数量也较多。处理后的粪渣，加水孵化，毛蚴便出现得早、齐、多，孵化8小时后，毛蚴孵化数量为孵化24小时毛蚴总数的98%左右
6、，可提高检验效果，这可能与虫卵在外界进一步发育成熟有关。,毛 蚴 促 孵 法,注意事项： a.粪便必须新鲜，不能混有尿液。气温超过26时，粪便搁置24小时后，毛蚴孵出率大减，48小时后则不能孵出毛蚴。因此，若粪便不能及时孵化，可加生理盐水，调成混悬液，置4冰箱内12天，不影响孵出率。 b.毛蚴孵化的最适温度为2528，10以下或30以上毛蚴不易孵出。,毛 蚴 孵 化 法,注意事项： c.夏秋季节温度较高，为防止自然沉淀过程中，毛蚴过早孵出被倒掉，可用1.2%盐水代替清水，以抑制毛蚴孵出，但最后孵化时仍需用去氯自来水。 d.河水、塘水中有原生动物，其形态及动态很像毛蚴，易于误诊，故做毛蚴孵化时，
7、沉淀及孵化用水均需经过处理杀灭水中原生动物。自来水中虽无原生动物，但往往有过多的余氯，对孵化不利，也需经过测定余氯和脱氯处理。,毛 蚴 孵 化 法,孵化用水的处理，一般将水至60以上便可杀灭水中原生动物。也可利用漂白粉或漂白粉精遇水后放出的游离氯杀灭水中原生动物。每100Kg水加漂白粉0.7g或漂白粉精0.34g，半小时测定水中氯含量，应达0.71.0ppm，若低于此数值，应补加漂白粉精，如达到了上述标准，再作用1小时，便可杀死全部水中原生动物，已杀灭水中原生动物的水或自来水，使用前要测定余氯含量，若浓度在0.3ppm以上，则对毛蚴孵化不利，要脱去余氯方可使用，如贮水缸不加盖。夏季经6小时，冬
8、季经24小时，余氯便散逸殆尽。若急需应用，每100Kg水中加硫代硫酸钠约0.40.8g，搅匀，经半小时后便可除去余氯，并进一步沉淀澄清水质。,毛 蚴 孵 化 法,此法诊断血吸虫病，查到毛蚴表明患者体内有活的血吸虫，是血吸虫病原检查最常用的方法，检出率比自然沉淀法高。但操作较繁，费时，且需有观察和鉴别毛蚴的经验，对于粪便中虫卵较少的患者，有时需多次检查才能查见毛蚴。,毛 蚴 孵 化 法,日本血吸虫毛蚴孵化法视频,基本原理： 利用粪便定量或定性厚涂片，以增加视野中虫卵数，可作虫卵定量检查。经甘油和孔雀绿处理，使粪膜透明，从而使粪渣与虫卵产生鲜明的对比，便于光线透过和镜检。孔雀绿则使视野光线变得柔和
9、，以减少眼睛的疲劳。适用于检查各种蠕虫卵。方法简便，操作过程中虫卵不会散失。效果较好。过硬和过稀的粪便不宜使用本法。泡沫状的粪便会在玻璃纸下形成许多微小气泡，妨碍镜检。并可作虫卵定量检查。,改 良 加 藤 法,材料准备： a.聚丙乙烯定量板（大小为40mm30mm1.37mm，模孔为8mm4mm）及刮棒 b.100目尼龙或金属筛网片（约4cm4cm） c.亲水玻璃纸条（5cm2.6cm）浸泡于甘油孔雀绿溶液（3孔雀绿1ml加纯甘油和水各100m1）中24小时 d.压板 e.载玻片,改 良 加 藤 法,操作方法： a.将筛网覆盖在粪标本上，刮取从筛孔挤溢出的粪便； b.将定量板紧贴于载玻片上，把
10、刮棒上取得的粪便填满模孔，刮去多余部分，掀起定量板，在粪样上覆盖含孔雀绿甘油的玻璃纸条，展平后用压板加压，粪样即在玻璃纸和玻片之间铺成椭圆形； c.3037温箱中透明0.51h后镜检并作虫卵计数； d.每克粪便虫卵数（EPG）为每板虫卵总数乘以24，再乘以粪便性状系数。,改 良 加 藤 法,注意事项： a.粪膜要均匀铺开，不宜过厚； b.透明时间要适度（尤对钩虫卵检查，透明时间宜短，不要超过30分钟）。若粪膜过厚，透明时间短，虫卵难以发现，若透明时间过长，虫卵则变形，也不易辨认。或因虫卵也透明了，镜检时易漏检。 c.在定量应用中，为提高检出率，要求每一样本作3张加藤片。,改 良 加 藤 法,注意事项： 玻璃纸制备 将玻璃纸剪成大小约22mm30mm的小片，浸于甘油-孔雀绿溶液（含纯甘油100ml，水100ml和3%孔雀绿1ml）中，浸泡24小时以上，直至玻璃纸呈现绿色。 形态观察 经透明处理的虫卵形态与直接在大便中观察到的虫卵有较大差异。,改 良 加 藤 法,改良加藤厚涂片法视频,三、病原学方法查出的日本血吸虫 虫卵及毛蚴图片欣赏,日本血吸虫虫卵,日本血吸虫虫卵,经茚三酮染色后毛蚴,谢 谢 听 讲 ！,
