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1、临床医学论文-两种制备冷沉淀方法的比较作者：杨玉峰，黄春萍，赵 云，沈华仙【摘要】 目的：通过对改良快速融化离心法和水浴虹吸法制备冷沉淀的质量比较，选择合适的制备冷沉淀的方法。方法：利用血凝分析仪检测冷沉淀中F和 Fg 的含量，电子称称量血袋重量并计算容量，计算三者的合格率。结果：改良快速融化离心法和水浴虹吸法的 F含量(IU袋)分别为：(86.7524.91)、(62.9122.87)，差异有显着性(P005)，合格率分别为：100、91.7，差异无显着性(P005)；Fg 的含量(mg袋)分别为：(142.1627.53)、(117.9131.99)，合格率均为：100，差异无显着性(P0
2、05)；容量(ml袋)分别为：(25.44.3)、(27.32.3)，合格率均为 100，差异无显着性(P005)。结论：两种方法都能制备出符合 GB184692001全血及成分血质量要求的冷沉淀，但改良快速融化离心法制备的冷沉淀 F含量要优于水浴虹吸法。 【关键词】 冷沉淀；凝血因子；纤维蛋白原；容量；质量标准冷沉淀是目前临床常用的一种血液成分，是新鲜冰冻血浆在 1 5 的条件下不溶解的白色沉淀物，其主要含有凝血因子（F），纤维蛋白原（Fg）、vW 因子(von Willebrand factor)、凝血因子（F），以及纤维结合蛋白（Fn）等成分。由于其中含有一些不稳定的凝血因子，特别是 F
3、因子，容易降低或失去活性，从而影响冷沉淀的质量。现将两种方法制备的冷沉淀质量情况，报告如下。1 材料和方法1.1 仪器和材料 日本 Sysmex CA50 自动血凝分析仪，试剂：德国Dade Behring Marburg 公司生产（APTT,批号：537108；Owrens Veronal 缓冲液，批号：527634；乏因子血浆，批号：536502A），苏州医用仪器厂的 KJX一型冰冻血浆解冻箱,德国贺利氏 6000 i 容量冷冻离心机，常熟双杰测试仪器厂生产的 GGDT 1000 电子称。1.2 方法1.2.1 原料血浆 采集全血后 6 h 内，3 000 g，4 ，10 min，离心分离
4、制备新鲜冰冻血浆（FFP），放入50 冰箱快速速冻后，置入20 以下的冰箱保存。冷冻 24 h 以上的 FFP 用于制备冷沉淀1。1.2.2 改良快速融化离心法 将 FFP 放入(31) 冰冻血浆解冻箱的恒温循环水槽中，待 FFP 融化到一半多时取出血浆袋,将还未融化的血浆块捏散成碎冰块，加速其溶解，然后继续放入恒温循环水槽中融化，待剩少许碎冰块时,及时取出，3 000 g,0 ,10 min 离心,分离出上层血浆，下层(255) ml 血浆和白色沉淀物即为冷沉淀，将其快速置于低温速度冰箱中冻结。1.2.3 水浴虹吸法 将联袋装有 FFP 袋子置于(31) 冰冻血浆解冻箱的恒温循环水槽中，另一
5、空袋悬于箱外，两袋之间有一定的落差。FFP 融化时，由于虹吸的作用，融化的血浆流入空袋中，剩余的(255) ml 的有白色结晶颗粒的血浆块即为冷沉淀，将其快速置于低温速度冰箱中冻结。1.2.4 F和 Fg 的检测方法 按试剂说明书操作。1.2.5 容量计算2。1.2.6 质量标准 按照 GB184692001全血及成分血质量要求规定，由 100 ml FFP 制备的冷沉淀(0.5 u)：F含量40 IU袋，Fg 含量75 mg袋，容量：(255) ml，符合质量标准者为合格。1.2.7 统计学方法 t 检验和四格表的确切概率法。2 结果2.1 两种方法制备冷沉淀比较 将随机抽取的 24 袋 1
6、00 ml FFP，随机分成两组，用上述两种方法分别进行检测，见表 1。表 1 两种方法制备冷沉淀三种指标比较（略）2.2 两种方法制备冷沉淀的三种指标合格率比较 改良快速融化离心法制备的 F含量合格率为 100（12/12），水浴虹吸法的 F含量合格率为91.7（11/12），两者差异无显着性（见表 2）；两种方法检测的 Fg 含量均为 100的合格率，差异无显着性；两种方法制备的容量合格率也为 100，差异无显着性。表 2 两种方法制备冷沉淀合格率比较方法 略2.3 两种方法三相指标均合格的合格率比较 符合 GB184692001全血及成分血质量要求对冷沉淀的要求，改良快速融化离心法制备的
7、冷沉淀合格率为 100，水浴虹吸法的为 91.7,差异无显着性。3 讨论冷沉淀通过静脉滴注、局部注入、局部喷洒或点滴、口服的方式，广泛应用于临床的甲型血友病、深度烧伤、肿瘤手术、皮肤、黏膜疾病、角膜疾病、弥散性血管内凝血（DIC）、多发伤和手术创伤、自发性气胸等的治疗3。冷沉淀的质量好坏在临床疗效中取到了至关重要的作用，因此选择好的制备方法也是非常关键的。根据本文检测结果显示，改良快速融化离心法同水浴虹吸法所制备的 F含量（P0.05）差异有显着性，Fg 含量(P0.05)和容量(P0.05)差异无显着性，在三相指标均合格的合格率上改良快速融化离心法高于水浴虹吸法，但差异无显着性。F含量差异有
8、显着性可能是水浴虹吸法在FFP 溶解的过程中，冷沉淀有时不能形成大的凝聚团块，或成絮状，不能聚集吸附在中央未融化的冰块上或袋壁上，有部分往往由于虹吸作用而流到另一转移空袋中，降低了 F含量。而 Fg 为较稳定的凝血因子，受制备时间和制备温度的影响较小，因此 Fg 含量差异无显着性。在用改良快速融化离心法时，容量控制取决于离心前冰渣的量，冰渣剩余过多，不能转移到另一联袋中，冷沉淀容量过大，冰渣过少影响冷沉淀的沉积，需要一定的操作经验才可以控制好容量；而虹吸法，只需计算出虹吸出的血浆量，适时终止虹吸作用即可，两种方法的容量控制前者比后者人为影响因素多，但都能满足质量要求，合格率都为100。在制备的
9、时间上，由于改良快速融化离心法，加入了 FFP 融化到一半多时取出血浆袋,将还未融化的血浆块捏散成碎冰块的步骤,缩短了融化过程，抵消了离心增加的时间，故而两种方法时间相差不大。综上所述，两种方法都能制备出符合 GB184692001全血及成分血质量要求的冷沉淀，虽然改良快速融化离心法同水浴虹吸法相比较改良快速融化离心法所需仪器要多，步骤相对繁琐，受人为因素影响，而虹吸法相对简便，所需仪器少而便宜，步骤精简，人为因素影响小，但改良快速融化离心法制备的冷沉淀 F含量要优于水浴虹吸法，血站可以根据自己的实际情况选择适合的方法。冷沉淀的制备还受到采集、分离、制备环境和保存等多个环节的影响，由于 F是不
10、稳定因子，随着时间的延长或制备期间温度的升高，F的活性降低4,极易衰减，半衰期为12 h24 h5，因此除了选择合适的制备方法外，还应该严格控制原料血浆的制备过程，血站各部门通力合作，加强整个过程的冷链控制，改进从采集到制备成成品的流程，尽量缩短其时间，确保在采集全血后的 6 h 内分离出FFP，并且即刻放入50 冰箱快速冰冻后，放入20 以下的冰箱保存，冷冻 24 h 以上的 FFP 用于制备冷沉淀，制备完成的冷沉淀快速冻存等，才能保证冷沉淀的质量。【参考文献】1 陈均,李琼芝,杨通汉,等.应用半自动血凝仪检测冷沉淀中 F:C含量J.临床输血与检验,2003,5(1):35.2 中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程(血站部分)M.天津:天津科学技术出版社,1997:44.3 雷千红,叶东.冷沉淀临床应用的新进展N.医学研究生学报，2004，17（1）：8182.4 苗翠英，李蓬，孙波，等新鲜冰冻血浆中 F：C 检测结果分析J中国输血杂志，2002，15(1)：345 王军，李平，刘焕亮，等。冷沉淀因子生物半衰期的测定及意义J.血栓与止血杂志,1977，4（3）：125126.
