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1、中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用【摘要】目的：分析数种中药饮片对多重耐药菌（Multi drug resistant bacteria，MDROs）的抑菌作用，总结抑菌中药饮片筛选经验。方法：以 2015年 1月12 月，临床感染患者血液标本、冲洗液、尿液、伤口分泌物中获得并培养的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）150 株、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）500 株、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（CRAB）300 株、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌（CRPA）150 株，取黄连、黄柏、大黄、金银花、野菊花、鱼腥草、黄苓、雷公藤、赤芍生药饮片，菌株均参照卫生部全国临床检验操作规程中推荐方法
2、鉴定，接种、培养，将菌液 OD稀释至 1105cfu/ml，取以上中药材，磨成粉末、浸泡热水浴、离心、取上清液、煎汁，制得浓度为0.1g/ml生药液，采用二倍微孔稀释法，黄苓稀释到40mg/ml、20mg/ml2.5mg/ml。其余采用被比稀释 160mg/ml10mg/ml，进行药敏鉴定，测定最小抑菌浓度（MIC） 、最小杀菌浓度（MBC） 。结果：按照对 MRSA抑菌效果 MIC、BMC 大小从小到大排序前分别为黄苓（MIC=20ng/ml，MBC=20ng/ml） 、黄连、黄柏与赤芍、大黄、野菊花鱼腥草、雷公藤、金银花；按照对 MRCNS抑菌效果 MIC、BMC 大小从小到大排序分别为黄
3、连（20ng/ml） 、黄柏、大黄、黄苓、赤芍、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤，BMC从小到大分别黄连（20ng/ml） 、黄柏、黄苓、大黄、赤芍、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤；按照对 CRAB抑菌效果 MIC大小从小到大排序分别为黄连（MIC=20ng/ml） 、黄柏、黄苓、金银花、大黄、金银花、鱼腥草、雷公藤、赤芍，BMC 从小到大分别为黄连（BMC=20ng/ml） 、黄柏、野菊花、黄苓、大黄、金银花、鱼腥草、雷公藤、赤芍；按照对 CRPA抑菌效果 MIC、BMC 大小从小到大排序分别为黄连（MIC=80ng/ml，MBC=80ng/ml） 、黄柏、黄苓、大黄、金银花、野菊花、鱼腥草、
4、雷公藤、赤芍。结论：不同中药饮片煎剂对不同类型 MDROs抗菌作用存在一定的差异，黄连总体抗菌效果较好。【关键词】抗生素；多重耐药菌；中药饮片全世界范围内抗生素滥用情况十分严峻，我国是抗生素使用率最高的国家1。细菌耐药是抗菌药物滥用的必然结果，近年来多重耐药菌甚至泛耐药菌感染越来越常见，检出率不断上升 2。相较于普通细菌感染，MDROs 感染死亡风险明显增加，是普通感染的 2-3倍 3。中医药诊治感染性疾病经验丰富，许多中药被证实确实有抑菌药理学作用 4。中医学讲究整体观，强调人与自然的相互关系，中药具有多成分、多途径、多环节、多靶点特点，可从整体上增强机体免疫能力，可降低 MDROs发病风险
5、。中药是抗感染新药筛选、研发的重要来源，本次研究试简单的分析数种中药饮片对 MDRs的抑菌作用，总结抑菌中药饮片筛选经验。1材料与方法1.1仪器与试剂以 2015年 1月12 月，临床分离鉴定的常见 MORDs菌株作为研究菌株。主要来源于感染患者感染部位，包括血液标本、冲洗液、尿液、伤口分泌物，分离与培养获得耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）150 株、耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）500 株、耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（CRAB）300 株、耐碳青霉烯铜绿假单胞菌（CRPA）150 株，备用。中药材包括黄连、黄柏、大黄、金银花、野菊花、鱼腥草、黄苓、雷公藤、赤芍，均经过实验室高效液
6、相色谱法鉴定。电子分析天平、药敏鉴定系统、植物粉碎机、电热恒温水浴锅、明胶、离心机等。1.2材料1.2.1 制备菌液菌株均参照卫生部全国临床检验操作规程中推荐方法，采用 Vitek-2 compact全自动细菌鉴定系统鉴定，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌采用 K-B法鉴定。将以上四种分离鉴定的 MORDs菌株接种在 2#培养皿上。参照 CLSI标准操作，取单个菌落接种于 5ml LB培养液中，37、150rpm，振摇培养，过夜。以LB液 100l 为空白对照，将菌液 OD稀释至 1105cfu/ml。1.2.2 中药饮片煎剂取黄连、黄柏、大黄、金银花、野菊花、鱼腥草、黄苓、雷公藤、赤芍饮片，制作煎剂
7、。粉碎机粉碎药物，磨成粉末状。电子天平紧密称量每种药物各1g，分别装入试管中，编号。加入 10ml dd H20，轻轻摇匀，充分混匀，浸泡1820h，100 水浴 1h。室温内冷却到常温，离心，4000rpm，20min，取上清液，煎汁，制得浓度为 0.1g/ml生药液，4冰箱保存。实验前，采用二倍微孔稀释法，黄苓稀释到 40mg/ml、20mg/ml2.5mg/ml。其余采用被比稀释160mg/ml10mg/ml。设置阳性对照组（100l） 、阴性对照（100l Lb培养液） 。采用鉴定系统配套的药敏卡片进行体外药敏实验，37培养箱培养24、48h，测定最小抑菌浓度（MIC） 、最小杀菌浓度
8、（MBC） 。1.3 统计学处理以 WPS xls数据表录入数据，计数资料以数（n）或率（%）描述统计，组间比较采用 检验，以 P0.05 表示差异具有统计学意义。22结果2.1 中药饮片对 MRSA抑菌效果按照对 MRSA抑菌效果 MIC、BMC 大小从小到大排序前分别为黄苓、黄连、黄柏与赤芍、大黄、野菊花鱼腥草、雷公藤、金银花。见表 1。表 1 10种中药饮片对 MRSA抑菌效果指标 黄连 黄柏 大黄金银花野菊花鱼腥草黄苓雷公藤赤芍MIC（mg/ml） 20 80 160160160 160 10 160 80BMC（mg/ml） 20 80 160160160 160 10 160 80
9、2.2 中药饮片对 MRCNS抑菌效果按照对 MRCNS抑菌效果 MIC、BMC 大小从小到大排序分别为黄连、黄柏、大黄、黄苓、赤芍、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤，BMC 从小到大分别为黄连、黄柏、黄苓、大黄、赤芍、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤，见表 2。表 2 10种中药饮片对 MRCNS抑菌效果指标 黄连 黄柏 大黄金银花野菊花鱼腥草黄苓雷公藤赤芍MIC（mg/ml） 20 40 8016016016080160160BMC（mg/ml 20 40 160 16 16 16 80 16 160） 0 0 0 02.3 中药饮片对 CRAB抑菌效果按照对 CRAB抑菌效果 MIC大小从小
10、到大排序分别为黄连、黄柏、黄苓、金银花、大黄、金银花、鱼腥草、雷公藤、赤芍，BMC 从小到大分别为黄连、黄柏、野菊花、黄苓、大黄、金银花、鱼腥草、雷公藤、赤芍，见表 3。表 3 10种中药饮片对 CRAB抑菌效果指标 黄连 黄柏 大黄金银花野菊花鱼腥草黄苓雷公藤赤芍MIC（mg/ml） 20 40 80 80 4016040160160BMC（mg/ml） 20 40 160 160 40160401601602.4 中药饮片对 CRPA抑菌效果按照对 CRPA抑菌效果 MIC、BMC 大小从小到大排序分别为黄连、黄柏、黄苓、大黄、金银花、野菊花、鱼腥草、雷公藤、赤芍，见表 4。表 4 10种
11、中药饮片对 CRPA抑菌效果指标 黄连 黄柏 大黄金银花野菊花鱼腥草黄苓雷公藤赤芍MIC（mg/ml） 80 80 16016016016080160160BMC（mg/ml） 80 80 160160160160801601603讨论从本次研究来看，不同中药饮片煎剂对同一种多重耐药菌抑菌效果存在一定的差异，同一种中药饮片对不同类型多重耐药菌抑菌效果存在一定差异。总体上看，黄连对耐药菌抑菌效果较高，鱼腥草、野雷公藤、赤芍总体较差，野菊花对 CRAB抑菌作用优于其他类型多重耐药菌。这与中药饮片中抗菌成分的类型、含量有关。中药中抑菌成分十分复杂，主要包括生物碱、有机酸、黄酮、醌类等，如黄苓主要药物
12、成分为黄酮类化合物，其对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、乙型链球菌具有明显的抑制作用 5。黄苓、黄连等均为清热解毒药物，中医认为感染是外邪入侵结果，清热解毒药物往往具有一定的抗菌作用，本次研究也显示这些药物抑菌、杀菌效果优于其他药物。国内已有采用大黄等药物治疗多种耐药菌的报道，且作用满意，或采用中药联合西药抗生素，以增强抗感染治疗效果 6。采用中药饮片煎剂进行体外多重耐药菌抑菌实验，操作简单，有助于筛选天然抗菌药物，以挖掘药物药理学价值，为新药研发、中药饮片与方剂利用提供指导意见。【参考文献】1卫生部.多重耐药菌医院感染预防与控制技术指南（试行）R.2011.5.2赵红霞，轩凯.某综合医院多重耐药菌感染类型调查J.中国消毒学杂志，2015，32(2):180-182.3张锦红,江涛,曽昭智.预防“超级细菌”的滋长-合理规范使用抗生素J.国外医药抗生素分册,2011,32(1):46-48.4战旗，王蕊，李爽，等.中药抗菌作用研究现状J.山东中医杂志，2014，33(8):697-700.5尹国兴，尹海鹏，郭宝芳.浅析中药提取物伴生物质的生物药剂学特性及其制剂学意义J.中国实用医药，2013，8(24):251-252.6国家药典委员会.中华人民共和国药典M.一部.北京:化学工业出版社,2010:136-137.
